PAGE17什么是轉座?轉座因子在一個DNA分子內(nèi)部或者兩個DNA之間不同位置間的移動。病毒基因組有哪些特點?答：不同病毒基因組大小相差較大；不同病毒基因組可以是不同結構的核酸；除逆轉錄病毒外，為單倍體基因組；病毒基因組有的是連續(xù)的，有的分節(jié)段；有的基因有內(nèi)含子；病毒基因組大部分為編碼序列；功能相關基因轉錄為多順反子mRNA有基因重疊現(xiàn)象。原核生物基因組有哪些特點?答：基因組由一條環(huán)狀雙鏈DNA組成；只有一個復制起始點；大多數(shù)結構基因組成操縱子結構；結構基因無重疊現(xiàn)象；無內(nèi)含子，轉錄后不需要剪接；基因組中編碼區(qū)大于非編碼區(qū)；重復基因少，結構基因一般為單拷貝；有編碼同工酶的等基因；基因組中存在可移動的DNA序列；非編碼區(qū)主要是調(diào)控序列。真核生物基因組有哪些特點?答：每一種真核生物都有一定的染色體數(shù)目；遠大于原核基因組，結構復雜，基因數(shù)龐大；真核生物基因轉錄為單順反子；有大量重復序列；真核基因為斷裂基因；非編碼序列多于編碼序列；功能相關基因構成各種基因家族。基因重疊有什么意義?答：利用有限的核酸儲存更多的遺傳信息，提高自身在進化過程中的適應能力。質(zhì)粒有哪些特性?答：在宿主細胞內(nèi)可自主復制；細胞分裂時恒定地傳給子代；所攜帶的遺傳信息能賦予宿主特定的遺傳性狀；質(zhì)粒可以轉移。什么是順式作用元件?答：基因中能影響基因表達，但不編碼RNA和蛋白質(zhì)的DNA序列。順式作用元件主要包括啟動子、增強子、負調(diào)控元件等。簡述原核基因表達的特點。答：(1)只有一種RNA聚合酶。(2)原核生物的基因表達以操縱子為基本單位。(3)轉錄和翻譯是偶聯(lián)進行的。(4)mRNA：翻譯起始部位有特殊的堿基序列-SD序列。(5)原核生物基因表達的調(diào)控主要在轉錄水平，即對RNA合成的調(diào)控。簡述σ因子在原核基因表達調(diào)控中的意義。答：(1)6因子含有識別啟動區(qū)的結構域調(diào)控RNA聚合酶與．DNA結合，確保RNA聚合酶與特異啟動區(qū)而不是其他位點的穩(wěn)定結合(2)6因子使得RNA聚合酶選擇一套特定啟動區(qū)起始轉錄。一旦一種6因子被另一種代替，即引起原來一套基因轉錄的關閉和新的一套基因轉錄的開屆。在有乳糖而無葡萄糖的條件下，乳糖操縱子是如何調(diào)控轉錄起始的？答：無葡萄糖時，cAMP處于高水平，與CAP形成cAMP-CAP復合物并結合到啟動子上游的CAP位點，乳糖存在阻遏蛋白不與操縱基因結合，cAMP-CAP復合物與lac操縱子的調(diào)控元件結合后，促進結構基因的轉錄。簡述乳糖操縱子的結構。答：編碼β-半乳糖苷酶、半乳糖苷通透酶和硫代半乳糖苷轉乙酰基酶的基因Z、Y、A稱為結構基因，結構基因加上調(diào)控元件：啟動子P和操縱基因O及CAP結合位點，lac阻遏蛋白基因I，即構成乳糖操縱子。原核生物可以通過哪幾個層次的表達調(diào)控以適應環(huán)境的改變？答：(1)轉錄起始的調(diào)控：①6因子調(diào)控轉錄起始；②轉錄起始的負調(diào)控；③轉錄起始的正調(diào)控；④轉錄起始的復合調(diào)控。(2)轉錄終止的調(diào)控：①依賴ρ因子的終止調(diào)控，通過ρ因子的作用使轉錄終止；②不依賴ρ因子的終止調(diào)控；③核糖體調(diào)控轉錄終止。(3)翻譯水平的調(diào)控：①反義RNA的調(diào)控作用；②RNA的穩(wěn)定性；③蛋白質(zhì)合成中的自身調(diào)控。簡述真核基因表達的特點答：(1)細胞的全能性：所謂全能性是指同一種生物的所有細胞都含有相同的基因組DNA。(2)基因表達的時間性和空間性：高等生物的各種不同細胞具有相同的基因組，但在個體發(fā)育的不同階段，基因表達的種類和數(shù)量是不同的，在不同組織和器官中，基因表達的種類和數(shù)量不同。(3)轉錄和翻譯分開進行：在核中轉錄生成mRNA穿過核膜至胞質(zhì)指導蛋白質(zhì)合成。(4)初級轉錄產(chǎn)物要經(jīng)過轉錄后加工修飾。(5)不存在超基因式操縱子結構：真核生物基因轉錄產(chǎn)物為單順反子，一條mRNA只翻譯一種蛋白質(zhì)。(6)部分基因多拷貝。真核生物基因組DNA水平的表達調(diào)控包括哪幾種方式?答：(1)染色質(zhì)的丟失；(2)基因擴增；(3)基因重排；(4)基因的甲基化修飾；(5)染色質(zhì)結構對基因表達的調(diào)控作用。列舉幾種真核基因的順式作用元件答：(1)啟動子：Hogness(TATA)盒，CAAT盒；(2)增強子：SV40病毒中，位于早期啟動子5’上游約200bp，內(nèi)含2個72bp的重復序列，其核心序列為GGTGTGGA_AAG：(3)沉默子：SV40中的AG~ITiTIT序列為終止轉錄調(diào)控元件。簡述反式作用因子的基本結構特點。答：一個完整的反式作用因子通常含有三個主要功能結構域，分別為DNA識別結合域、轉錄活化域和結合其他蛋白質(zhì)的調(diào)節(jié)結構域。這些結構域含有幾十到幾百個氨基酸殘基。不同的結構域有自己的特征性結構。(1)DNA識別結合域：鋅指結構、堿性亮氨酸拉鏈、同源結構域、螺旋-環(huán)-螺旋結構、堿性α螺旋。(2)轉錄活化結構域：酸性α-螺旋、富含谷氨酰胺的結構域、富含脯氨酸結構域。簡述真核生物轉錄水平的調(diào)控機制。答：主要通過反式作用因子與順式作用元件和RNA聚合酶(RNApolymerase，RNAp01)的相互作用完成。(1)順式作用元件(cis—actingelement)指某些能影響基因表達但不編碼新的蛋白質(zhì)和RNA的DNA序列，按照功能分為啟動子、增強子、負調(diào)控元件(沉默子等)。(2)反式作用因子(trans—actingfactor)指能直接或間接地識別或結合在各順式作用元件8-12bp核心序列上，參與調(diào)控靶基因轉錄效率的一組蛋白質(zhì)，也稱序列特異性DNA結合蛋白(sequencespecificDNAbindingprotein，SDBP)，這是一類細胞核內(nèi)蛋白質(zhì)因子。在結構上含有與DNA結合的結構域。（3）反式作用因子的活性調(diào)節(jié)：①反式作用因子的活性調(diào)節(jié)：真核基因轉錄起始的調(diào)節(jié)，首先表現(xiàn)為反式作用因子的功能調(diào)節(jié)，即特定的反式作用因子被激活后，可以啟動特定基因的轉錄。反式作用因子的激活方式如下：表達式調(diào)節(jié)；共價修飾；配體結合；蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)相互作用②反式作用因子作用方式：成環(huán)；扭曲；滑動；Oozing③反式作用因子的組合式調(diào)控：基因表達的調(diào)控不是由單一的反式作用因子完成而是幾種因子組合，發(fā)揮特定的作用。簡述基因表達調(diào)控的意義及基本調(diào)節(jié)層次。答：(1)在同一機體的各種細胞中雖然含有相同的遺傳信息即相同的結構基因，但它們并非在所有細胞中都同時表達，而必須根據(jù)機體的不同發(fā)育階段、不同的組織細胞及不同的功能狀態(tài)，選擇性、程序性地表達特定數(shù)量的特定基因。通常情況下，真核生物細胞只有2％～15％的基因處于有轉錄活性的狀態(tài)。為了適應環(huán)境的變化，生物體需要不斷的調(diào)節(jié)和控制各種基因的表達。(2)基因表達的調(diào)控是一個十分復雜的過程。從DNA上的遺傳信息到蛋白質(zhì)功能發(fā)揮的整個過程中，存在著基因組、轉錄、轉錄后、翻譯及翻譯后多個水平的調(diào)控環(huán)節(jié)。舉例說明什么是管家基因及其基因表達特點。答：(1)管家基因(house．keepinggenes)是指所有細胞中均要表達的一類基因，其產(chǎn)物是維持細胞基本生命活動所必需的。如微管蛋白基因、糖酵解酶系基因與核糖體蛋白基因等。(2)管家基因表達水平受環(huán)境因素影響較小，在個體各個生長階段的大多數(shù)、或幾乎全部組織中持續(xù)表達，或變化很小。它的表達只受啟動序列或啟動子與RNA聚合酶相互作用的影響，而不受基他機制調(diào)節(jié)a調(diào)控區(qū)多呈低甲基化。簡述真核生物在翻譯水平上的調(diào)控。答：(1)翻譯起始的調(diào)控：①翻譯起始因子的功能調(diào)控：eIF-2是蛋白質(zhì)合成過程中重要的起始因子。有些物質(zhì)可以影響eIF-2的活性，調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)合成的速度。培養(yǎng)的真核細胞處于營養(yǎng)不足(“饑餓”)時，elF-2失活，最終導致肽鏈合成起始效率降低。②阻遏蛋白的調(diào)節(jié)作用：所有進入胞漿的mRNA分子并不是都可以立即與核糖體結合翻譯成蛋白質(zhì)。由于存在一些特定的翻譯抑制蛋白可以與一些mRNA的5’端結合，從而抑制了蛋白質(zhì)翻譯。③5’AUG對翻譯的調(diào)節(jié)作用．．以真核mRNA為模板的翻譯開始于最靠近其5’端的第一個AUG。90％以上的真核mRNA符合第一AUG規(guī)律。但在有些mRNA中，在起始密碼子AUG的上游(5’端)非編碼區(qū)有一個或數(shù)個AUG，稱為5'AUG。5'AUG的閱讀框通常與正常編碼區(qū)的閱讀框不一致，不是正常的開放閱讀框a如果從5'AUG開始翻譯，很快就會遇到終止密碼子。因此，若從5’AUG開始翻譯，就會翻譯出無活性的短肽。mRNA5’端非編碼區(qū)長度對翻譯的影響：起始密碼AUG上游非編碼區(qū)的長度可以影響翻譯水平。當?shù)谝粋€AUG密碼子離5’端帽子的位置太近時，不容易被40S亞基識別。當?shù)谝粋€AUG密碼子距5’端帽子結構的距離在12個核苷酸以內(nèi)時，有一半以上的核糖體40S亞基會滑過第—個AUG。當5’端非編碼區(qū)的長度在17—80核苷酸之間時，體外翻譯效率與其長度成正比。所以，第一個AUG至5’端之間的長度同樣影響翻譯起始效率和翻譯起始的準確性。(2)mRNA穩(wěn)定性調(diào)節(jié)：mRNA的穩(wěn)定性是翻譯水平調(diào)控的重要因素，是由于mRNA是翻譯蛋白質(zhì)的模板，其量的多少直接影響蛋白質(zhì)合成的量。mRNA半衰期越長，．翻譯效率越高，在細胞內(nèi)合成蛋白質(zhì)的量愈多。(3)小分子RNA對翻譯的調(diào)控作用：如lin-4RNA由lin-4基因編碼，可阻抑lin-14蛋白質(zhì)(一種核蛋白)，從而調(diào)控生長發(fā)育的時間選擇。簡述真核基因轉錄因子分類及功能。答：(1)反式作用因子指能直接或間接地識別或結合在各順式作用元件8-12bp核心序列上，參與調(diào)控靶基因轉錄效率的一組蛋白質(zhì)，有時也稱轉錄因子。(2)目前發(fā)現(xiàn)的轉錄因子有近百種，根據(jù)其作用方式的不同分為三類：①通用轉錄因子：系多數(shù)細胞普遍存在的一類轉錄因子，如TATAbox結合因子TFⅡD、C-X：box結合因子SPl等；②組織特異性轉錄因子：在很大程度上，基因表達的組織特異性取決組織特異性轉錄因子的存在；③誘導性反式作用因子：這些反式作用因子的活性能被特異的誘導因子所誘導，這種活性的誘導可以是新蛋白的合成。簡述真核和原核基因表達調(diào)控共同的要素。答：(1)DNA元件：具有調(diào)節(jié)功能的DNA序列原核：啟動序列，操縱序列真核：順式作用元件，啟動子，增強子，抑制子(2)調(diào)節(jié)蛋白：原核：阻遏蛋白：負性調(diào)節(jié)；激活蛋白：正性調(diào)節(jié)真核：轉錄因子——基本轉錄因子、激活因子、抑制因子(3)RNA聚合酶：RNA聚合酶主要是通過識別與結合啟動子，參與基因轉錄起始調(diào)控說明阻遏蛋白在原核基因表達調(diào)控中的普遍意義。答：阻遏蛋白通常是與基因操縱區(qū)結合，減弱或阻止其調(diào)控的基因轉錄，其介導的調(diào)控方式為負調(diào)控。如大腸埃希菌乳糖代謝，在沒有誘導劑時，與lac相鄰(上游端)的調(diào)節(jié)基因I的產(chǎn)物-lac阻遏蛋白，能與操縱子操縱基因O特異地結合，抑制結構基因的轉錄。請解釋正性調(diào)節(jié)在真核基因表達調(diào)控中的普遍意義。答：在真核細胞中，RNA聚合酶對啟動子的親和力很低，基本上不能靠其自身來起始轉錄，而是需要依賴多種激活蛋白的協(xié)同作用。真核基因調(diào)控中雖然也發(fā)現(xiàn)有負性調(diào)控元件，但其存在并不普遍；真核基因轉錄表達的調(diào)控蛋白也有起阻遏和激活作用或兼有兩種作用者，但總的是以激活蛋白作用為主。即多數(shù)真核基因在沒有調(diào)控蛋白作用時是不轉錄的，需要表達時就要有激活的蛋白質(zhì)來促進轉錄。換言之：真核基因表達以正性調(diào)控為主導。簡述乳糖操縱子在有葡萄糖存在而沒有乳糖存在時進行轉錄起始負調(diào)控的原理。答：由于在沒有乳糖的條件下，lac阻遏蛋白能與操縱基因特異地結合，抑制了結構基因的表達。DNA的損傷原因是什么?答：DNA的損傷原因包括三大類：(1)DNA分子的自發(fā)性損傷：DNA的自發(fā)性化學變化。DNA復制產(chǎn)生的誤差；(2)物理因素引起的DNA損傷：①紫外線照射引起的DNA損傷；②電離輻射引起的DNA損傷。(3)化學因素引起的DNA損傷：①烷化劑對DNA的損傷；②堿基類似物、修飾劑對DNA的損傷。簡述DNA分子的自發(fā)性損傷。答：DNA分子的自發(fā)性損傷包括兩大類：(1)DNA復制產(chǎn)生的誤差；(2)DNA的自發(fā)性化學變化包括堿基的異構互變、堿基的脫氨基作用、脫嘌呤與脫嘧啶、堿基修飾與鏈斷裂。簡述物理因素引起的DNA損傷。答：物理因素引起的DNA損傷有：(1)紫外線照射引起的DNA損傷。當DNA受到最易被其吸收波長(～260nm)的紫外線照射時，同一條DNA鏈上相鄰的嘧啶以共價鍵連成二聚體，相鄰的兩個T、或兩個C、或C與T間都可以環(huán)丁基環(huán)連成二聚體，其中最容易形成的是T-T二聚體。(2)電離輻射引起的DNA損傷：有直接和間接的效應，直接效應是DNA直接吸收射線能量而遭損傷；間接效應是指DNA周圍其他分子吸收射線能量而產(chǎn)生具有很高反應活性的自由基，進而損傷DNA。簡述電離輻射可導致的DNA分子變化。答：電離輻射可導致DNA．分子的多種變化：(1)堿基變化：主要是由-OH自由基引起，包括DNA鏈上的堿基氧化修飾、過氧化物的形成、堿基環(huán)的破壞和脫落，一般嘧啶比嘌呤更敏感。(2)脫氧核糖變化：脫氧核糖上的每個碳原子和羥基上的氫都能與-OH反應，導致脫氧核糖分解，最后引起DNA鏈斷裂。(3)DNA鏈斷裂：這是電離輻射引起的嚴重損傷事件，斷裂數(shù)隨照射劑量而增加。射線的直接和間接作用都可能使脫氧核糖破壞或磷酸二酯鍵斷開而致DSIA鏈斷裂。(4)交聯(lián)：包括DN．A鏈交聯(lián)和DNA-蛋白質(zhì)交聯(lián)。簡述哺乳動物中DNA損傷的修復類型。答：對不同的DNA損傷，細胞可以有不同的修復反應。目前，已在哺乳動物細胞中發(fā)現(xiàn)了四個較為完善的DNA修復通路，分別是核苷酸切除修復(nucleotide．excisionrepair，NER)、堿基切除修復(base—excisionrepair，BER)、重組修復(recombinationrepair)和錯配修復(mismatchrepair)簡述E.coli錯配修復機制答：在E.coi中，錯配修復蛋白MutS二聚體沿著DNA運動，能夠發(fā)現(xiàn)DNA骨架因非互補堿基對之間的不對稱而產(chǎn)生的變形，從而識別錯配核苷酸。MutS在錯配位點夾住DNA，利用ATP水解釋放的能量使DNA形成扭結，MutS自身構象也發(fā)生改變。隨后，MutS錯配DNA復合物募集該修復系統(tǒng)的第二種蛋白因子MutL,MutL再激活內(nèi)切核酸酶MutH在錯配位點附近切斷錯配核苷酸所在的一條DNA鏈，在解旋酶UvrD和外切核酸酶作用下，將包括錯配核苷酸在內(nèi)的一條單鏈DNA去除，所產(chǎn)生的單鏈DNA缺口由DNA聚合酶Ⅲ填補．DNA連接酶封口，完成錯配修復。以人為例，簡述堿基切除修復機制答：在人細胞核中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)八種DNA糖苷酶，他們參與堿基切除修復，具有損傷特異性，通常嘧啶的氧化損傷由hNTHI、hNEILI或hNEIL2移除，而嘌呤的氧化損傷由hOGGI移除。特異識別的異常堿基包括：胞嘧啶脫氨基產(chǎn)生的尿嘧啶、氧化的鳥嘌呤、脫氨基的腺嘌呤、開環(huán)堿基以及碳原子之間雙鍵變成單鍵的堿基等。APE．1蛋白酶的作用是修復AP位點，它從AP位點的5’端切開，再去除無堿基的殘基，然后由DNA聚合酶及連接酶插入—個新合成的堿基，完成修復過程。簡述E．coli核苷酸切除修復機制。答：E．coli的核苷酸切除修復主要由四種蛋白組成：UvrA、UvrB、UvrC、UvrD。兩個UvrA分子和一個UvrB分子組成復合物結合于DNA，并消耗ATP沿著DNA鏈移動，UvrA能夠發(fā)現(xiàn)損傷造成的DNA雙螺旋變形，由UvrB負責解鏈，在損傷部位形成單鏈區(qū)，并使之彎曲約130度，接著UvrB募集內(nèi)切核酸酶UvrC，在損傷部位的兩側切斷DNA鏈，其中一個切點位于損傷部位5’側八個核苷酸處，而另一個切點位于3’側四或五個核苷酸處。然后，DNA解旋酶UvrD去除兩切口之間的DNA片段，由DNA聚合酶和連接酶填補缺口。簡述人類核苷酸切除修復機制。答：人XPC蛋白負責發(fā)現(xiàn)DNA雙螺旋中的變形，其功能相當于E．coli中的UvrA；人XPB和XPD蛋白具有解旋酶活性，其功能相當于E．coli中的UvrB；核酸酶ERCCl-XPF切割損傷部位5’側，X．PG切割3’側，其功能相當于uvrC高等生物NER切割單鏈DNA片段程度為24—32個核苷酸。這一片段被釋放后，產(chǎn)生的缺口由DNA聚合酶和連接酶填補。NER不僅能夠修復整個基因組的損傷，而且能夠拯救因轉錄模板鏈損傷而暫停轉錄的RNA聚合酶，即轉錄偶聯(lián)修復。在這一過程中，NER蛋白被募集于暫停的RNA聚合酶。簡述人全基因組與轉錄偶聯(lián)核苷酸切除修復過程中的異同點。答：人全基因組與轉錄偶聯(lián)核苷酸切除修復的基本過程相同，即都有發(fā)現(xiàn)錯誤，解鏈并募集內(nèi)切核酸酶，切割損傷部位，解旋去除損傷位點，DNA聚合酶和連接酶填補缺口。轉錄偶聯(lián)與全基因組核苷酸切除修復的不同點在于hER蛋白被募集于暫停的RNA聚合酶，并且轉錄偶聯(lián)修復的核心TFⅡH分別參與了兩個獨立過程：一是在核苷酸切除修復時起DNA解旋酶的作用；二是在轉錄過程中打開DNA模板。簡述大腸埃希菌重組修復機制。答：E-coli的rec基因編碼的幾種酶(recA、recB、reeC和recD)參與重組修復。recB、recC、recD酶復合物兼有解旋酶和核酸酶活性，它利用ATP水解提供能量沿著DNA移動。其中，recB和recD是兩種解旋酶，recB沿DNA鏈5’端解旋，運動速度較慢；而recD沿DNA鏈3’端解旋，運動速度較快，導致單鏈DNA環(huán)狀結構逐漸累積。當recB、reeC、recD遇到chi序列。5’-GCTGGTCC-3’時，它就在附近將單鏈DNA切斷，從而使DNA重組成為可能。E．coli的recA蛋白在DNA重組中起關鍵作用。recA蛋白緊緊結合于單鏈DNA，每圈結合六個recA分子。DNA單鏈區(qū)產(chǎn)生于recB、recC、recD酶的作用或DNA缺口。recA蛋白結合DNA具有正協(xié)同效應。E．coli的RuvA蛋白識別Holliday結構連接處，而RuvB蛋白具有解旋酶和ATPase活性，能驅動分支移動。最后由內(nèi)切核酸酶RuvC特異識別Holliday結構中的ATrG序列并切割DNA，使Holliday結構分離，從而完成DNA重組。人DNA雙鏈斷裂后的修復機制。答：對于DNA雙鏈斷裂損傷，細胞必須利用雙鏈斷裂修復，即重緝修復，重組修復分為同源重組和非同源末端連接。DNA雙鏈斷裂后，細胞中存在姐妹染色體時，則通過同源重組的方式進行修復，如細胞中不存在姐妹染色體時，則通過非同源末端連接的方式進行修復。簡述SOS修復機制。答：在DNA受到嚴重損傷時，SOS應答能夠誘導合成很多參與DNA損傷修復的酶和蛋白質(zhì)。SOS應答十分迅速，在DNA損傷發(fā)生后幾分鐘內(nèi)就可出現(xiàn)。轉錄阻遏蛋白Lex．A抑制若干編碼參與SOS應答蛋白質(zhì)的基因表達，具有潛在的蛋白水解酶活性，Ecoli的DNA損傷產(chǎn)生的單鏈DNA誘導recA蛋白水平提高近50倍，而recA．蛋白能激活LexA自我蛋白酶解，導致至少15個參與SOS應答的損傷修復蛋白基因解除阻遏狀態(tài)而表達。recA激活的靶蛋白斷裂位點是位于多肽鏈中央的二肽Ala-Gly。Ecoli的recA蛋白有雙重功能，一是在DNA重組過程中具有DNA鏈交換活性；二是具有蛋白水解酶激活活性。當DNA兩條鏈的損傷鄰近時，損傷不能被切除或重組修復，這時在內(nèi)切核酸酶、外切核酸酶的作用下造成損傷處的DNA鏈空缺，再由損傷誘導產(chǎn)生的一整套特殊DNA聚合酶即SOS修復酶類，催化空缺部位DNA的合成，這時補上去的核替酸幾乎是隨機的，但仍然保持了DNA雙鏈的完整性，使細胞得以生存。這種修復帶給細胞很高的突變率。簡述SangerDNA測序法的原理。答：SangerDNA測序法是建立在兩個基本原理之上：(1)核酸是依賴于模板在聚合酶的作用下由5’端向3’端聚合；(2)可延伸的引物必須能提供游離的3’羥基末端，雙脫氧核苷酸由于缺少游離的3’羥基末端，因此會終止聚合反應的進行a如果分別用4種雙脫氧核苷酸終止反應，則會獲得4組長度不同的DNA片段。通過比較所有DNA片段的長度可以得知核苷酸的序列。何謂PCR?試述PCR技術的基本原理和影響茵素。答：PCR是一種體外酶促擴增特異DNA片段的技術，其原理類似DNA的體內(nèi)擴增a它包括：PCR包括三個基本過程：①變性，即在較高溫度(93℃～98％)使雙鏈模板DNA變性解鏈成單鏈DNA，以提供復制的模板；②退火，即在較低溫度(37℃～65％)使加入的引物與待擴增DNA區(qū)域特異性地結合，以提供DNA復制起始的3’-OH；③延伸，即在適當?shù)臏囟?70qC～75℃)下，DNA聚合酶從特異性結合到DNA模板上的引物3’一OH端開始，根據(jù)堿基互補配對原則，按照待擴增區(qū)域的核苷酸序列，進行DNA鏈的延伸，即合成新的DNA分子。這三個過程組成一個循環(huán)周期；每個周期合成的產(chǎn)物又可作為下—個周期的模板，如此循環(huán)往復，經(jīng)過11輪循環(huán)后，靶DNA的拷貝數(shù)理論n2=上呈2增長。影響PCR反應的因素主要有：引物、TaqDNA聚合酶、dNTP、模板和Mg離子，此外，pH、溫度、循環(huán)次數(shù)也會影響PCR反應。PCR的基本原理是什么?用PCR擴增某一基因，必須預先得到什么樣的信息?答：PCR是根據(jù)DNA半保留復制的原理，在體外進行DNA的變性、復性和引物延伸。用PCR擴增某一基因至少要預先知道足夠合成一對引物的靶DNA序列。切口平移(nicktranslation)標記探針的主要步驟有哪些?答：(1)DNaseI造成切口；(2)DNA聚合酶Ⅲ的5’-3’外切核酸酶進行切割；(3)DNA聚合酶Ⅲ的5’-3’合成酶進行修補；(4)在修補過程中，隨著切口(nick)的移動，將放射性的底物摻人到雙鏈DNA中。什么是Western免疫印跡?它與Southern印跡有什么不同?答：Western免疫印跡是將蛋白質(zhì)經(jīng)電泳分離后從凝膠中轉移到固相支持物上，然后用特異性的抗體進行檢測。它Southern的不同在于探針的性質(zhì)不同，在Western免疫印跡中使用的探針是抗體(蛋白質(zhì))。什么是隨機引物(randomprimer)?如何標記DNA?答：隨機引物是人工合成的長度為6個核苷酸的寡聚核苷酸片段群體，含有各種可能的排列順序(46=4096)；或是用DNase處理、牛胸腺DNA后獲得的6-12個堿基的片段。將待標記的DNA片段同隨機引物一起進行雜交，并以雜交體上的寡聚核苷酸為引物，在ICdenow酶的作用下合成互補DNA鏈，當反應底物中有放射性的dNTP時，新合成的DNA就帶上了標記。什么是印跡(blotting)雜交?答：通過一定的物理學方法將DNA、RNA或蛋白質(zhì)從凝膠上轉移到固體支持物，然后同液體中的探針(抗體)進行雜交，以檢測特異DNA、RNA或蛋白質(zhì)的一種方法。因為DNA、RNA或蛋白質(zhì)從凝膠向濾膜轉移的過程稱為印跡，故此將這種雜交稱為印跡雜交。什么是原位菌落雜交(colony，hybridization)?答：原位菌落雜交是根據(jù)微孔濾膜雜交和原位雜交的原理而改良的一種篩選重組體的一種核酸雜交方法。它是將生長在或影印在微孔濾膜上的菌落(或噬菌斑)原位溶菌，原位進行DNA變性并原位固定在濾膜上，然后用放射性標記的探針同固定了的DNA進行雜交經(jīng)放射自顯影后，確定哪一個菌落含有重組的DNA分子，再從參比平板上選取重組體。簡述Southem印跡雜交的原理和方法。答：Southern印跡雜交是1975年Southern建立起來的一種雜交方法，屬固相一液相雜交。該法的主要特點是利用毛細現(xiàn)象將DNA轉移到固體支持物上，稱為Southern轉移或Southern印跡(Southernblot)。它首先用合適的限制性內(nèi)切核酸酶將DNA切割，進行電泳分離后，利用干燥的吸水紙產(chǎn)生毛細作用，使液體經(jīng)過凝膠，從而使DNA片段由液流攜帶從凝膠轉移并結合在固體支持物表面，在通過和探針雜交來檢測固體支持物表面的DNA。Southern印跡雜交、Northern印跡雜交及Western免疫印跡彼此之間有哪些不同?答：(1)檢測目標物質(zhì)不同：Southern印跡雜交檢測的是DNA，Northern印跡雜交檢測的是RNA，Western免疫印跡雜交檢測的是蛋白質(zhì)。(2)所用凝膠不同：Southern印跡雜交和Northern印跡雜交用的是瓊脂糖凝膠，而Western免疫印跡用的是SDS'-聚丙烯酰胺凝膠。(3)是否變性電泳不同：Southern印跡雜交是跑非變性瓊脂糖凝膠電泳，電泳之后在凝膠上用NaOH處理使DNA變性，然后轉印；Northern印跡雜交實在電泳上樣前用甲基氫氧化銀、乙二醛或甲醛使RNA變性，而不用NaOH，因為它會水解RNA的2’·OH；Western免疫印跡則是跑變性的聚丙烯酰胺電泳或非變性的聚丙烯酰胺電泳。(4)探針不同：Southern印跡雜交、Northern印跡雜交的探針是單鏈的DNA或RNA，而Western免疫印跡用的探針是特異性抗體蛋白質(zhì)，而非核酸。TaqDNA聚合酶有哪些特性?答：TaqDNA聚合酶特性具有以下特性：(1)較高的熱穩(wěn)定性；(2)5’→3’聚合酶活性；(3)5’→3’外切酶活性；(4)具有轉錄酶活性；(5)較弱的非模板依賴性；(6)缺乏3’→5’外切酶活性。如何提高PCRDNA聚合酶的保真性?答：．(1)使用TaqDNA聚合酶時，摻人少量具有3’→5’外切酶活性的耐熱DNA聚合酶，錯配率可降為原來的1／10；(2)使四種dNTP底物濃度相等；(3)MgCl2濃度盡可能低；(4)減少循環(huán)數(shù)。PCR引物設計的原則主要有哪些?答：(1)引物長度：10～30Nt；(2)堿基分布：A、T、G、C隨機分布；(3)G+c含量：40％～60％Tm=4(G+C)+2(A+T)；(4)引物之間：避免3’端互補：(5)引物自身：不應形成二級結構；(6)引物3’末端堿基：最好選T、c、G，不選A；(7)引物5’末端堿基：可不與模板DNA互補。影響PCR擴增平臺期的因素?(1)引物及dNTP底物濃度降低，摻入速度減慢。(2)酶與模板比例下降,底物過量。3）非特異性產(chǎn)物或引物二聚體與反應物競爭4）產(chǎn)物的再結合簡述基因克隆的主要過程。答：①制備目的基因和相關載體；②將目的基因和有關載體進行連接；③將重組的DNA導入受體細胞；④DNA重組體的篩選和鑒定；⑤DNA重組體的擴增、表達和其他研究簡述寡核苷酸介導的定點誘變技術的原理。答：利用Klenow片段(DNA聚合酶I大片段)延伸與單鏈環(huán)狀DNA模板相配對的寡核苷酸引物，這個寡核苷酸引物除了有一處與模板的堿基錯配外，其余部分均與模板互補，由寡核苷酸的錯配處誘發(fā)突變，并在體外新合成一個雜合雙鏈DNA，用T4DNA連接酶將新合成的雜合雙鏈DNA連接成雙鏈閉環(huán)DNA分子，將體外合成的雜合閉環(huán)雙鏈DNA轉化到E．coli細胞，由于環(huán)狀DNA復制的特點，就會同時產(chǎn)生野生型與誘變型兩種DNA分子，最后通過篩選，將誘變型DNA分子篩選出來。Klenow片段的主要用途有哪些答：(1)補齊雙鏈DNA的3’末端。(2)通過補齊3’端，標記3’末端。(3)在cDNA克隆中，合成第二股鏈。(4)DNA序列分析。末端脫氧核苷酸轉移酶的作用。答；末端脫氧核苷酸轉移酶能將脫氧核苷酸加到DNA的3，OH~，主要用于探針標記；或者在載體和待克隆的片段上形成同聚物尾，以便于進行克隆將DNA分子進行體外連接的方法：黏性末端連接、平端連接、同聚物加尾連接、人工接頭連接表達融合蛋白有何優(yōu)點答：表達融合蛋白的優(yōu)點如下：(1)融合蛋白較穩(wěn)定，不易被細菌蛋白酶水解；(2)如果融合蛋白中有信號肽序列，可產(chǎn)生分泌型產(chǎn)物．(3)可利用針對原核部分的單抗進行親和層析，便于純化．堿性磷酸酶在基因克隆中的作用。答：堿性磷酸酶能去除DNA或RNA5’端的磷酸根。制備載體時，用堿性磷酸酶處理后，可防止載體自身環(huán)化，提高重組效率。基因克隆過程中，獲得目的基因的途徑有哪些?答：(1)從基因組文庫中獲得(2)從cDNA文庫中獲得(3)PCR擴增特定基因什么是基因突變?它有哪些主要類型?在特定DNA序列中，堿基組成及排列順序可因機體內(nèi)外因素的作用發(fā)生改變，導致DNA一級結構變化，稱為基因突變。主要類型分為：1)點突變，在DNA序列某個位點上，一種堿基(核苷酸)被另一種取代所產(chǎn)生的改變2)缺失，一個堿基或一段堿基序列丟失的改變。3)插人，某個位置增加一個堿基或一段堿基序列的改變4)重排，常見有反置或遷移倒位，即基因DNA序列內(nèi)部重組5)配子突變和體細胞突變；6)動態(tài)突變，微衛(wèi)星序列串聯(lián)重復拷貝數(shù)隨著世代傳遞而不斷增加的現(xiàn)象簡述基因突變的不同遺傳學效應。基因突變的遺傳學效應包括錯義突變、無義突變、同義突變和移碼突變。1)錯義突變是因DNA分子中堿基對被取代，突變基因中相應密碼子所編碼氨基酸被另一種所取代。2)無義突變是由于堿基取代、缺失或插入后使得編碼某種氨基酸的密碼子變成了終止密碼子，導致蛋白質(zhì)翻譯過程被提前終止。3)同義突變是由于遺傳密碼的簡并性，使突變前后相應密碼子編碼同一氨基酸。4)移碼突變是指DNA序列中發(fā)生單堿基，多個堿基或DNA片段的缺失或插入，導致突變點后三聯(lián)密碼閱讀框改變。何謂基因診斷?與傳統(tǒng)醫(yī)學診斷相比，它具有哪些特點?答：用分子生物學的理論和技術，通過直接探查基因的存在狀態(tài)或缺陷，從基因結構、定位、復制、轉錄或翻譯水平分析基因的功能，從而對人體狀態(tài)與疾病作出診斷的方法。具有高特異性、高靈敏性、早期診斷性、應用的廣泛性等特點。簡述SSCP分析的原理。答：在非變性條件下，DNA分子為維持其穩(wěn)定而自身折疊形成具有一定空間結構的構象，這種構象是由單鏈DNA分子中的堿基順序所決定，DNA分子中的堿基變異(即使只有一個堿基)可導致其空間構型的改變，形成不同的構象，導致電泳遷移率發(fā)生改變。單核苷酸多態(tài)性用作遺傳標志具有那些突出優(yōu)勢答：分布更廣泛；高度穩(wěn)定性；部分位于基因內(nèi)部，直接影響基因功能發(fā)揮；是雙等位基因型的，易于自動化分析。簡述DNA指紋分析的基本流程。答：DNA指紋分析的基本流程為：DNA的提純與純化限制性內(nèi)切酶消化一電泳分離_分子雜交-+指紋圖的顯示。簡述基因診斷在傳染病檢測中的應用。答：任何類型的病原體，包括病毒、支原體、細菌、真菌和寄生蟲，它們感染宿主細胞后均攜帶有自身特異的遺傳信息DNA影或RNA，它們侵入機體后引起的傳染病和寄生蟲病等，都可以用基因診斷技術來進行檢測或診斷。試述內(nèi)源基因結構突變的主要類型以及內(nèi)源基因結構突變所致的疾病。答：內(nèi)源基因結構突變包括點突變、缺失或插入突變、染色體易位、基因重排、基因擴增等。突變?nèi)舭l(fā)生在生殖細胞，可引起各種遺傳性疾病；若發(fā)生在他細胞，可導致腫瘤、心血管疾病等熒光原位雜交的特點及應用包括哪些?答：(1)其探針比放射性探針更穩(wěn)定，不需要特殊的安全防護和污物處理措施；．(2)與原位雜交一樣，不需要提取和純化核酸；(3)多色TLSI-I可以在同一核中顯示不同的顏色，從而同時檢測兩種或多種序列；(4)應用不同的探針可以顯示某一物種的全部基因或某一染色體、染色體片段及單拷貝序列。簡述自殺基因治療的原理。答：將“自殺"基因導入宿主細胞中，這種基因編碼的酶能使無毒性的藥物前體轉化為細胞毒性代謝物，誘導靶細胞產(chǎn)生“自殺”效應，從而達到清除腫瘤細胞的目的。為惡性腫瘤基因治療的主要方法之一。簡述eXvivo和invivo兩種基因治療途徑。答：根據(jù)基因轉移的途徑不同，基因治療分為：(經(jīng)活體)是指在體外將目的基因導人靶細胞，經(jīng)過篩選和增殖后將細胞回輸給患者，使該基因在體內(nèi)有效地表達相應產(chǎn)物，以達到治療的目的。invivo(活體內(nèi))是指將目的基因直接應用于患者體內(nèi)。簡述RNA干擾的作用機制。答RNA干擾包括起始階段和效應階段。在起始階段，加人的小分子RNA被切割為21～23核苷酸長的小分子干擾RNA片段。證據(jù)表明一個稱為Dicer的酶，是l~aseⅢ家族中特異識別雙鏈RNA的一員，它能以一種ATP依賴的方式逐步切割由外源導入或者由轉基因、病毒感染等各種方式引入的雙鏈RNA，將其切割將DNA降解為19～21bp的雙鏈RNAs(siRNAs)，每個片段的3’端都有2個堿基突出。在RNAi效應階段，siRNA雙鏈結合一個核酶復合物從而形成RNA誘導沉默復合物。激活RISC需要一個ATP依賴的將小分子RNA解雙鏈的過程。激活的RISC通過堿基配對定位到同源轉錄的mRNA，并在距離siRNA3’端12個堿基的位置切割mRNA。治療基因的受控表達策略有哪些?答：治療基因的受控表達包括控制治療基因表達的時間、空間和水平三個方面。要實現(xiàn)治療基因的受控表達，必須建立完善的基因表達調(diào)控體系。基因調(diào)控策略大致有以下幾種：基因內(nèi)部調(diào)節(jié)機制、基因外部調(diào)節(jié)機制、利用病灶微環(huán)境使治療基因特異性表達以及治療基因的誘導表達等。列舉腫瘤基因治療的常用方法。答：通過基因置換和基因添加，導入多種抑癌基因以抑制癌癥的發(fā)生、發(fā)展和轉移；抑制癌基因的活性，通過于擾癌基因的轉錄和翻譯，發(fā)揮抑癌作用；增強腫瘤細胞的免疫原性，通過對腫瘤組織進行細胞因子修飾，刺激機體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生對腫瘤細胞的溶解和排斥反應；通過導入“自殺基因"殺傷癌細胞。簡述基因治療的幾種策略。答：(1)基因置換。(2)基因添加。(3)基因干預。(4)自殺基因治療。5）基因免疫治療哪些因素引起DNA的突變？簡要敘述生物體存在的修復方式。突變引起的物理因素：輻射、紫外線等，化學因素：聚乙二醇，致癌物質(zhì)等，生物因素：仙臺病毒等。修復方式：錯配修復恢復錯配切除修復（堿基、核苷酸）切除突變的堿基和核苷酸片段重組修復復制后的修復，重新啟動停滯的復制叉DNA直接修復修復嘧啶二體或甲基化DNASOS系統(tǒng)DNA的修復，導致變異描述乳糖操縱子的調(diào)控機制。（看不懂題目，亂寫的）乳糖操縱子的調(diào)控屬于可誘導調(diào)節(jié)。在以乳糖為碳源的培養(yǎng)基中，在單個透過酶分子的作用下，少量乳糖分子進入細胞，又在單個β-半乳糖苷酶分子作用下轉變成異構乳糖。某個異構乳糖與結合在操縱區(qū)上的阻遏物結合后使后者失活離開操縱區(qū)，開始了lacmRNA的生物合成。LacmRNA翻譯后生成大量的透過酶和β-半乳糖苷酶，加速了乳糖分子的轉變。當乳糖分子都被消耗完畢時，阻遏物仍在不斷被合成，有活性的阻遏物濃度超過了異構乳糖濃度，使細胞重新建立起阻遏狀態(tài)，導致lacmRNA合成被抑制。mRNA半衰期短，不到一個世代生長期，mRNA幾乎從細胞消失，透過酶和β-半乳糖苷酶的合成也趨于停止。簡述DNA半保留復制的概念。每個子代分子的一條鏈來自親代DNA，另一條鏈則是新合成的，這種復制方式被稱為DNA的半保留復制。對生物體轉錄和復制的特征進行說明比較？（網(wǎng)上找的）DNA復制和RNA轉錄在原理上是基本一致的，體現(xiàn)在：①這兩種合成的直接前體是核苷三磷酸，從它的一個焦磷酸鍵獲得能量促使反應走向合成；②兩種合成都需要RNA聚合酶和四種核苷酸；③兩種合成都是以DNA為模板；④合成前都必須將雙鏈DNA解旋成單鏈；⑤合成的方向都是5’→3’。 DNA復制和RNA轉錄的不同點體現(xiàn)在：①復制和轉錄所用的酶是不同的，復制用的是DNA聚合酶，而轉錄用的是RNA聚合酶；②所用前體核苷三磷酸種類不同，DNA復制用四種脫氧核糖核苷三磷酸，即dATP、dGTP、dCTP、dTTP，而RNA轉錄用四種核糖核苷三磷酸，即ATP、GTP、CrP、UTP做前體底物；③在DNA復制時是A與T配對，而RNA轉錄是A與U配對；④DNA復制時兩條鏈均做模板，而RNA轉錄時只以其中一條鏈為模板；⑤DNA復制是半不連續(xù)的，可產(chǎn)生岡崎片段，而RNA轉錄是連續(xù)的；⑥DNA復制時需RNA做引物，而RNA轉錄無需引物；⑦DNA復制時需連接酶的參與，而RNA轉錄時不需要。闡述蛋白質(zhì)生物合成途徑氨基酸的活化→翻譯的起始（核糖體結合mRNA且甲硫氨酰-tRNA*結合到核糖體）→肽鏈的延伸（后續(xù)AA-tRNA與核糖體的結合，肽鍵生成，移位）→肽鏈終止→蛋白質(zhì)前體加工→蛋白質(zhì)的折疊簡要敘述真核生物mRNA的轉錄后加工的方式，這些加工方式各有何意義RNA的編輯：某些RNA，特別是mRNA前體的一種加工方式，如插入、刪除或取代一些核苷酸殘基，導致DNA所編碼的遺傳信息的改變。因為經(jīng)過編輯的mRNA序列發(fā)生了不同于模板DNA的變化。生物學意義：校正作用有些基因突變在突變過程中丟失的遺傳信息可能通過RNA的編輯得以回復調(diào)控翻譯通過編輯可以構建或去除起始密碼子和終止密碼子，是基因表達調(diào)控的一種方式擴充遺傳信息能使基因產(chǎn)物獲得新的結構和功能，有利于生物的進化最早證明DNA是遺傳物質(zhì)的經(jīng)典實驗是什么？如何用實驗證明DNA的復制是以半保留的方式進行的？肺炎雙球菌的轉化實驗和噬菌體侵染細菌實驗證明DNA半保留方式復制的實驗：15N標記大腸桿菌DNA實驗15N氮源培養(yǎng)基→15N-DNA→14N氮源培養(yǎng)基→離心：14N-15N-DNA→14N氮源培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)→離心：14N-DNA，14N-15N-DNA列出你所知道的具有DNA外切酶活性的酶及它們在分子生物學研究中的應用。DNA聚合酶I具有5’→3’和3’→5’外切酶活性在切除因紫外線照射而形成的嘧啶二聚體中起著重要作用。也可以除去岡崎片段5’端RNA引物，使岡崎片段間缺口消失，保證連接酶將片段連接起來。DNA聚合酶ＩＩ具有3’→5’外切酶活性起校正作用，修復DNADNA聚合酶γ（線粒體）具有3’→5’外切酶活性線粒體DNA的復制DNA聚合酶δ（核內(nèi)）具有3’→5’外切酶活性參與前導鏈和后隨鏈的合成DNA聚合酶ε（核內(nèi)）具有3’→5’外切酶活性除去RNA引物圖示多肽合成后的空間輸送中信號肽的識別過程。（課本145的圖可能是的）什么是DNA的半保留復制和半不連續(xù)復制？如何證明？真核細胞與原核細胞的DNA復制有何不同？半保留復制：每個子代分子的一條鏈來自親代DNA，另一條鏈則是新合成的，這種復制方式被稱為DNA的半保留復制。半不連續(xù)復制：前導鏈的連續(xù)復制和后隨鏈的不連續(xù)復制稱為雙螺旋的半不連續(xù)復制。不同點：1.復制起點。原核生物只有一個復制起點，真核生物可以有多個。2.復制單元。原核生物有多個復制單元，可以一次復制多個；真核生物只有一個。3.復制叉移動速度。原核生物快，真核生物慢。4.復制子大小。原核生物大，真核生物小。簡述原核生物與真核生物mRNA的主要差別。原核生物真核生物場所轉錄、翻譯在同一細胞空間且兩過程同步進行核內(nèi)：前體RNA細胞質(zhì)：加工修飾后的mRNA轉錄翻譯分2步進行編碼蛋白幾個多肽多順反子mRNA1個多肽起始密碼子AUGAUGGUGUUG半衰期短5’端無帽子結構有帽子結構3’端較短的polyA尾巴或沒有有polyA尾巴真核生物蛋白質(zhì)的翻譯后加工有哪些？N端fMet或Met的切除二硫鍵的形成特定氨基酸的修飾（磷酸化，糖基化，甲基化，乙基化，羥基化，羧基化）切除新生肽鍵的非功能片段大腸桿菌乳糖操縱子的主要結構和阻遏蛋白的作用機制是什么？大腸桿菌乳糖操縱子包含3個結構基因：Z、Y、A，以及啟動子、控制子、阻遏子等。阻遏蛋白作用機制：誘導物或異構乳糖與阻遏蛋白結合，會改變其三維構象，使之不能與操縱區(qū)結合，從而激發(fā)lacmRNA的合成。簡述原核生物與真核生物蛋白質(zhì)合成的區(qū)別原核生物轉錄和翻譯可以同時進行，真核生物要先轉錄后翻譯。原核生物轉錄在擬核區(qū)，真核生物轉錄在核內(nèi)。原核生物翻譯直接由核糖體完成，真核生物核糖體翻譯后還要進過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體等加工。DNA聚合酶I有哪些催化活性？請說明其在E.coliDNA代謝中的作用。DNA聚合酶活性和3’→5’外切酶活性即可合成DNA鏈，又可以降解DNA，保證了DNA復制的準確性。5’→3’外切酶活性在切除因紫外線照射而形成的嘧啶二聚體中起著重要作用。也可以除去岡崎片段5’端RNA引物，使岡崎片段間缺口消失，保證連接酶將片段連接起來。敘述大腸桿菌色氨酸操縱子調(diào)節(jié)機制要點。1trp操縱子轉錄起始的調(diào)控是通過阻遏蛋白實現(xiàn)的。

2trp操縱子轉錄終止的調(diào)控是通過弱化作用實現(xiàn)的。大腸桿菌I型DNA聚合酶（DNApolymeraseI）有幾種酶活性？它在體內(nèi)有些什么功能？舉出一個這種酶在分子生物學技術中的應用例子。（同44題）DNA聚合酶活性和3’→5’外切酶活性即可合成DNA鏈，又可以降解DNA，保證了DNA復制的準確性。5’→3’外切酶活性在切除因紫外線照射而形成的嘧啶二聚體中起著重要作用。也可以除去岡崎片段5’端RNA引物，使岡崎片段間缺口消失，保證連接酶將片段連接起來。扼要說明真核生物內(nèi)含子的類型和剪接方式。GU-AG類（主要）和AU-AG類（次要）內(nèi)含子：通過形成剪接前體方式I類和II類內(nèi)含子：無剪接前體，主要通過轉酯反應的方式簡述乳糖操縱子的調(diào)節(jié)方式。（前面差不多）描述大腸桿菌細胞的“錯配修復”機制和功能。機制：Dam甲基化酶能使位于5’-GATC序列中的腺苷酸的N6位甲基化。一旦復制叉通過復制起始位點，母鏈就會在開始DNA合成錢的幾秒鐘至幾分鐘內(nèi)被甲基化。此后，只要兩條DNA鏈上堿基配對出現(xiàn)錯誤，錯配修復系統(tǒng)就會根據(jù)“保存母鏈，修正子鏈”的原則，找出錯誤堿基所在的DNA鏈，并在對應于母鏈甲基化腺苷酸上游鳥苷酸的5’位置切開子鏈，再根據(jù)錯配堿基相對于DNA切口的方位啟動修復途徑，合成新的子鏈DNA片段。功能：充分反映了母鏈序列的重要性，對DNA復制忠實性有很大的貢獻。真核mRNA有哪些轉錄后修飾事件？詳細敘述大部分真核mRNA3’末端的修飾過程。加5’端帽子結構，3’端polyA尾巴，進行mRNA剪接加polyA尾巴需要由內(nèi)切酶切開mRNA3’端的特定部位，然后由polyA合成酶催化多聚腺苷酸的反應。真核RNA聚合酶有三種，它們分別是什么酶？它們的轉錄產(chǎn)物分別是什么？RNA聚合酶IrRNARNA聚合酶IIhnRNA→mRNARNA聚合酶IIItRNA舉出三種細胞內(nèi)DNA修復系統(tǒng)的例子，說明它們各自修復的DNA損傷類型。錯配修復復制過程中發(fā)生錯配切除修復（堿基、核苷酸）DNA鏈上相應位置的堿基或核苷酸發(fā)生損傷重組修復復制起始時尚未修復的DNA損傷部位進行修復DNA直接修復修復損傷的堿基SOS系統(tǒng)DNA受到損傷或復制系統(tǒng)受到抑制的緊急情況下，細胞為求生存而產(chǎn)生的一種應急措施。在原核生物中，基因的表達通常以操縱子為單位進行調(diào)節(jié)。下列是一些基因調(diào)節(jié)的順式行為元件和反式行為因子，以及一些調(diào)控機制：啟動子；操縱基因；阻遏蛋白；終止子；弱化子；正調(diào)節(jié)作用；負調(diào)節(jié)作用；反饋抑制；反終止作用；CAP；cAMP。請把這些名詞和相應的操縱子相匹配。a，乳糖操縱子；b，色氨酸操縱子；c，阿拉伯糖操縱子乳糖操縱子：啟動子，阻遏蛋白，負調(diào)節(jié)作用，正調(diào)節(jié)作用，cAMP色氨酸操縱子：弱化子說出雙鏈DNA復制起始有關的五種重要的酶或蛋白并簡述它們的功能。拓撲異構酶I解開負超螺旋DNA解鏈酶解開雙鏈SSB單鏈結合蛋白保證被解鏈酶解開的單鏈在復制完成前保持單鏈結構Rep蛋白前導鏈模板3’→5’方向移動（與一般DNA解鏈酶相反）Dna蛋白與解鏈酶共同作用使復制起點解開雙鏈簡述增強子的特點和性質(zhì)及作用機制。增強子（定義）：指能使與它連鎖的基因轉錄頻率明顯增加的DNA序列。特點和性質(zhì)：增強效應十分明顯。增強效應與其位置和取向無關。大多為重復序列，一般長為50bp，適合與某些蛋白因子結合。其增強效應有嚴密的組織和細胞特異性，說明增強子只有與特定蛋白質(zhì)（轉質(zhì)因子）相互作用才能發(fā)揮功能。沒有基因專一性，可以在不同的基因組合上表現(xiàn)增強效應。許多增強子還受外部信號的調(diào)控，如金屬硫蛋白基因啟動區(qū)上游所帶的增強子，就可以對環(huán)境中的鋅、鎘濃度做出反應。作用機制：1.影響模板附近的DNA雙螺旋結構，導致DNA雙螺旋彎折或在反式因子的參與下，以蛋白質(zhì)之間的相互作用為媒介形成增強子與啟動子之間“成環(huán)”連接，活化基因轉錄2.將模板固定在細胞核內(nèi)特定位置3.增強子區(qū)可以作為反式作用因子或RNA聚合酶II進入染色質(zhì)結構的“入口”簡述真核RNA聚合酶II的轉錄起始復合物裝配過程和轉錄起始RNA聚合酶全酶識別啟動子→逆性結合形成閉合復合物→開放復合物（結合的DNA序列一小段雙鏈解開)→與最初的2個NTP結合→RNA聚合酶、DNA和新生RNA三元復合物→盡快釋放σ亞基→通過上游啟動子區(qū)（轉錄開始）簡述（或繪圖說明）真核細胞RNA聚合酶II轉錄的起始需要哪些基本轉錄因子及其裝配過程轉錄因子：TBPTFⅡATFⅡBTFⅡDTFⅡETFⅡFTFⅡH轉配過程：全酶→二元閉合復合物→二元開鏈復合物→三元復合物→RNA合成開始（課本74頁）簡述（或繪圖說明）色氨酸操縱子弱化的機制（課本251頁）當培養(yǎng)基中的色氨酸濃度很低時，負載有色氨酸的tRNA^Trp也就少，這樣翻譯通過兩個相鄰色氨酸密碼子的速度就會很