一、名詞解釋自然選育：利用微生物在一定條件下產生自發突變的原理，通過分離，篩選排除衰退型菌株，選擇維持原有生產水平的菌株。誘變育種：在人為的條件下，利用物理、化學等因素，誘發生物體產生突變，從中選擇，培育動植物和微生物的新品種。初級代謝產物：微生物通過代謝活動所產生的、自身生長和繁殖所必需的物質。次級代謝產物：微生物代謝產生的，而與菌體的生長繁殖無明確關系的代謝產物。培養基：是專門用于提供微生物生長繁殖和生物合成各種代謝產物所需要的按一定比例配制的多種營養物質的混合物。分批發酵：一種準封閉式系統，種子接種到培養基后除了氣體流通外發酵液始終留在反應器內。連續發酵：發酵過程中一邊補入新鮮的料液，一邊以相近的流速放料，維持發酵液原來的體積。基因工程：將外源基因通過體外重組后倒入受體細胞內，使這個基因能在受體細胞內復制、轉錄、翻譯表達的操作過程。細胞融合技術：指兩種不同的親株經酶法除去細胞壁得到兩個球狀原生質體或原生質體球，然后置于高滲溶液中，在以聚乙二醇助溶和氯化鈣存在的條件下，促使兩者互相凝集并發生細胞之間的融合，進而導致基因重組，獲得新的菌株。固定化酶：指經物理或化學方法處理，使酶變成不易隨水流失即運動受到限制，而又能發揮催化作用的酶制劑。生物制藥的下游技術：從動植物器官與組織、細胞培養液、細胞發酵液中提取、分離、精制有關生物藥物的過程。細胞破碎技術：利用外力破壞細胞膜和細胞壁，使細胞內容物包括目的產物成分釋放出來。13、 生物藥物：是指運用生物學、醫學、生物化學等的研究成果，綜合利用物理學、化學、生物化學、生物技術和藥學等學科的原理和方法，利用生物體、生物組織、細胞、體液等制造的一類用于預防、治療和診斷的制品。14、 生物制品：是指應用普通的或以基因工程、細胞工程、蛋白質工程、發酵工程等生物技術獲得的微生物、細胞及各種動物和人源的組織和液體等生物材料制備的，用于人類疾病預防、治療和診斷的藥品。15、 等電點沉淀法：是利用蛋白質在等電點時溶解度最低而各種蛋白質又具有不同等電點的特點進行分離的方法。16、 原代培養:是指直接從機體取下細胞、組織和器官后立即進行培養。17、 傳代培養：需要將培養物分割成小的部分，重新接種到另外的培養器皿（瓶）內，再進行培養的過程。18、 酶的激活劑：一些物質可以改變一個無活性酶前體（酶原），使之成為有活性的酶，或加快某種酶反應的速率產生酶激活作用。19、可逆性抑制：對主反應的抑制是可逆的，以酶促反應為例，可逆性抑制劑和酶形成復合物，抑制酶與底物的作用，從而抑制反應。203、帶用的:翊服訴蜂方怯：機械伸隹、郭*■牯尚翔理'由主要巨括；于嫌拄、反復凍融法'棒透E沖擊法。生物法主要包括,―法、?，白峰21、 凝聚作用；指親水膠體的粒子集聚而變成濃厚的溶膠（Sol），是作為顯微鏡下的小液滴或肉眼可見的"相"而被分離出來的現象。22、 絮凝作用；如在體系中加入一定量的某種電解質，可中和微粒表面的電荷，降低表面電荷的電量，降低Z電位及雙電層的厚度，使微粒間的斥力下降，從而使微粒的物理穩定性下降，微粒聚集成絮狀，形成疏松的纖維狀結構，但振搖可重新分散均勻。23、 ；何謂超濾技術:是一項分子級膜分離手段「以壓力差為推動力將不同分子屋的物質進行麟性分嬴伏點：沒有相轉移,無需添加任（可強烈化學物質，可以低溫操作過濾麒快r便于無菌嬤24、濃差極化現急:外源壓力迫使分子量較小的溶質通過超濾膜，大分子溶質被截留于膜表面，并逐漸形成濃度梯度25、 不對稱膜：指膜的化學結構或物理結構隨膜的部位而異，即各向異性的膜。26、 有機溶劑沉淀：利用與水互溶的有機溶劑（如甲醇、乙醇、丙酮等）能使蛋白質在水中的溶解度顯著降低而沉淀的方法。27、 過飽和溶液：一定溫度、壓力下，當溶液中溶質的濃度已超過該溫度、壓力下溶質的溶解度，而溶質仍不析出的現象叫過飽和現象。28、 純培養：微生物學中把從一個細胞或一群相同的細胞經過培養繁殖而得到的后代。二、簡答題發酵過程中的主要參數有哪些？如何控制？溫度：整個發酵過程中或不同階段中所維持的溫度。壓力：罐內維持正壓可以防止外界空氣中的雜菌侵入，以保證純種的培養。罐壓一般在0.2-0.5個大氣壓。空氣流量：一般控制在0.5-1.5V粘度：它的大小影響氧傳遞的阻力，也可反應相對菌體濃度。PH：它的高低與菌體生長和產物合成有著重要的關系。基質濃度：發酵過程中必須定時測定糖、氮、等基質的濃度。溶解氧濃度：利用溶解氧的濃度變化，可以了解產生菌對氧的利用規律，反應發酵的異常情況，也可以作為發酵中間控制的參數及設備供養能力的指標。產物濃度：是發酵產物產量高低或生物合成代謝正常與否的重要參數，也是決定發酵周期長短的根據。菌體濃度：菌體量的大小和變化速度對菌體合成產物的生化反應都有重要的影響。微生物發酵操作方式主要有哪些？比較它們有什么不同點？分批發酵優點：操作簡單、周期短、染菌的機會少和生產過程、產品質量易掌握。缺點：分批發酵不適合用于測定其過程動力學，存在基質抑制問題。補料分批發酵避免了高濃度營養物質對代謝產物，特別是對次級代謝產物合成的抑制作用。此外，通過分批補料發酵還可以有效地控制菌體的濃度和粘度，延長發酵周期，提高溶解氧水平。連續發酵優點：在產率、生產的穩定性和易于實現自動化方面比分批發酵優越。缺點：污染雜菌概率和菌種退化的可能性增加。簡述基因工程菌的構建過程？目的基因的獲取獲取目的基因是實施基因工程的第一步。目的基因的獲取方法主要有兩種:①從自然界中已有的物種中分離出來②用人工的方法合成。PCR技術擴增目的基因基因表達載體的構建基因表達載體的組成:目的基因、啟動子、終止子、標記基因將目的基因導入受體細胞目的基因的監測與鑒定簡述基因工程制藥的基本過程？剪切、拼接、導入、表達、分離純化與液體培養細胞相比，固定化細胞有哪些優點？高度保持反應槽內的細胞量，提高反應效率。固定化使反應活性穩定，能夠長期連續地運行。產物易于和作為催化劑的細胞分離。柱式或槽式有可能連續運轉，易于控制生產中最適宜的生長環境條件、基質濃度等，能使生產穩定。某些重要物質的生產大多利用處于穩定增殖期的細胞，由于固定化可抑制其生長發育，因此應考慮盡可能模擬穩定期等。固定化酶有哪些優點？可以多次使用，而且在多數情況下，酶的穩定性提高。反應后，酶和底物和產物易于分開，產物中無殘留酶，易于純化，產品質量高。反應條件易于控制，可實現轉化反應的連續化和自動控制。酶的利用效率高，單位酶催化的底物量增加，用酶量減少。比水溶性酶更適合于多酶反應。酶和細胞的固定化方法有哪些？各有哪些特點?載體結合法：是將酶結合于不溶性載體上的一種固定化方法。可分為物理吸附法，離子結合法，共價結合法。物理吸附法：優點在于操作簡單，可選用不同的吸附劑，酶失活后載體仍可再生。缺點在于最適吸附酶量無規律可循，酶與載體之間的吸附劑不強，酶易于脫落。離子結合法：操作簡單，處理條件溫和，酶的活性中心不易被破壞。但是酶和載體的結合力比較弱，會發生酶脫落的現象。共價結合法：酶和載體的結合力牢固，不會發生酶脫落。但反應條件苛刻，操作復雜，酶的活性中心會遭到部分破壞。交聯法：優點是交聯后的酶活性較高，缺點是反應條件劇烈，酶的回收率低。包埋法：不需要改變酶的高級結構，酶的回收率較高。但包埋酶會導致酶的失活，包埋法只適合作用于小分子底物和產物的酶，對于那些作用于大分子底物和產物的酶是不合適的。簡述生物活性物質分離純化的主要原理？根據分子形狀和大小不同，可采用差速離心和超速離心，膜分離，超濾和凝膠過濾等分離技術進行分離根據分子極性大小和溶解度不同，可采用溶劑提取，逆流分配，分配層析，鹽析，等電點沉淀及有機溶劑分級沉淀等技術進行分離根據分子電離性質的差異，可采用離子交換，電泳，等電點聚焦等技術進行分離根據配體特異，可采用親和層析技術進行分離根據物質吸附不同，可采用選擇性吸附與吸附層析等技術進行分離試述生物技術下游加工過程的特點及應遵循的原則？動植物器官與組織、細胞培養液或發酵液中所含欲分離的生物濃度很低，雜質含量高，常需多步分離操作。待分離的生物藥物一般穩定性差，加熱、PH、有機溶劑等引起失活或分解，特別是蛋白質、核算藥物，應盡可能減少分離操作步驟。發酵或培養是分批操作，生物變異性大，各批發酵液不盡相同，因此分離應有一定的彈性。對于基因工程產品應注意生物安全問題，即應防止菌體擴散，在密閉環境下操作。簡述菌種保藏的方法？定期移植保藏法：也叫傳代培養保藏法，包括斜面培養，液體，穿刺培養等。它是最早使用并且現今仍普遍使用的方法沙土管保藏法：保存抗生素產生菌常用的方法，效果較好，操作簡便，保存期可達一年以上，變異率低，死亡少，是目前國內使用最廣泛的保藏方法。液狀石蠟保藏法：其實是斜面保存的一種方法，能克服斜面保存的缺點，能有效降低代謝活動，推遲細胞退化，效果比一般斜面好得多

（4） 液氮保藏法：比其他方法都要優越，被世界公認為防止菌種退化的最好方法。操作程序不復雜，主要有液態氮冰箱等設備（5） 冷凍干燥保藏法：是指液體樣品在冷凍狀態下使其中水分升華，最后達到干燥。為了防止冷凍干燥過程和保存期間細胞損傷與死亡，需要加保護劑11、 雙水相萃取、反膠束萃取、超臨界流體萃取基本原理及各自的優點？（1）超臨界流體萃取原理：利用處于臨界壓力和臨界溫度以上的一些溶劑流體所具有特異增加物質溶解能力來分離純化的技術。優點：①具有廣泛的適應性：萃取效率高，過程易于調節：分離工藝流程簡單：有些分離過程可在接近室溫下完成缺點：分離過程必須在高壓下進行，設備及工藝技術要求高，投資比較大，普及應用較為困難。（2） 雙水相萃取原理：利用生物物質在互不相溶的兩水相間分配系數的差異進行分離的過程。優點：保留產物的活性、可連續化操作（3） 反膠束萃取：原理：表面活性劑溶于非極性溶劑中，并使其濃度超過臨界膠束濃度，便會在有機溶劑內形成聚集體，非極性基團在外，極性基團則排列在內，形成一個極性核，此極性核具有溶解極性物質的能力。優點：具有成本低、溶劑可反復使用、萃取率和反萃取率都高等。12、 試述影響工程制藥酶活性的因素。①②③④⑤底物濃度的影響①②③④⑤酶濃度的影響溫度的影響pH的影響激活劑和抑制劑13.試述制備單克隆抗體的原理是什么？用到的動物細胞工程技術手段有哪幾種？單克隆抗體的特點有哪些？單克隆抗體的原理：要制備單克隆抗體需先獲得能合成專一性抗體的單克隆B淋巴細胞，但這種B淋巴細胞不能在體外生長。而實驗發現骨髓瘤細胞可在體外生長繁殖，應用細胞雜交技術使骨髓瘤細胞與免疫的淋巴細胞二者合二為一，得到雜種的骨髓瘤細胞。這種雜種細胞繼承兩種親代細胞的特性，它既具有B淋巴細胞合成專一抗體的特性，也有骨髓瘤細胞能在體外培養增殖永存的特性，用這種來源于單個融合細胞培養增殖的細胞群，可制備一種抗原決定簇的特異單克隆抗體。手段：（1）灌注懸浮培養：連續灌注新的培養基，同時連續排出舊的培養液了，使細胞在一個相對穩定的環境中生長和繁殖，可提高細胞密度10倍以上（2）貼壁細胞培養：由于大部分動物細胞無細胞壁，進行細胞培養時必須附在固體或半固體表面上培養，在固體載體表面上生長，并擴成一單層，稱為單層培養法（3）固定化細胞培養：采用載體使整個細胞固定化單克隆抗體的特點：（1） 單克隆抗體是針對單一抗原決定的化學結構完全相同的單一抗體，其特異性強，與其對應抗原的親和力高度均一（2） 制備時無需將抗原純化，適于由未純化的抗原大量制備。（3） 雜種瘤細胞株可冷凍于液氮中長期保存，所以單克隆抗體可以重復穩定的制備，不會因批號的不同而產生差異，只要使用來自同樣雜交瘤的單克隆抗體，就能夠以同一標準比較各研究室的數據。14、何謂鹽析？其原理是什么？常用的鹽析方法有哪些？影響鹽析的主要因素有哪些？鹽析操作時常用的鹽是什么？（1）鹽析法是利用各種生物分子在濃鹽溶液中溶解度的差異，通過向溶液中引入一定數量的中性鹽，使目的物或雜蛋白以沉淀析出，達到純化目的的方法。（2） 原理：鹽溶現象和鹽析作用鹽析作用的原理是：破壞雙電層:在高鹽溶液中，帶大量電荷的鹽離子能中和蛋白質表面的電荷，使蛋白質分子之間電排斥作用相互減弱而能相互聚集起來。破壞水化層:中性鹽的親水性比蛋白質大，鹽離子在水中發生水化而使蛋白質脫去了水化膜，暴露出疏水區域，由于疏水區域的相互作用，使其沉淀。（3） 影響鹽析的因素無機鹽的種類鹽析用鹽的選擇：鹽析作用要強鹽析用鹽需有較大的溶解度鹽析用鹽必須是惰性的來源豐富、經濟溶質（蛋白質等）種類：Ks、B溶質（蛋白質等）濃度：2~3%溫度pH（4） 鹽析中常用的鹽：硫酸銨、硫酸鈉、磷酸鉀、磷酸鈉。硫酸銨是最常用的蛋白質鹽析沉淀劑15、離子交換的基本原理及基本操作原理：借助于固體離子交換劑中的離子與稀溶液中的離子進行交換以達到提取或去除溶液中某些離子的目的，是一種屬于傳質分離過程的單元操作。離子交換是可逆的等當量交換反應。基本操作：用百分之3的酸HCL泡陽樹脂3-4個小時，用百分之4的堿NaOH泡陰樹脂3-4個小時。用軟水洗，洗到PH為7左右，反復三次，樹脂就可以混合在一起做水用了。16、離子交換樹脂的預處理和再生辦法樹脂的預處理（1）物理處理：去雜，過篩。化學處理：用8?10倍的1mol/L鹽酸或氫氧化鈉溶液交替浸泡。最后以去離子水或緩沖夜平衡再生過程：去雜，大量水沖洗，除去物理吸附的雜質。用酸、堿處理除去與功能基團結合的雜質。(3)轉型：按要求的人為的賦予平衡離子的過程17、親和層析的原理是什么？主要特點是什么？原理：(1)配基固定化：配基與載體偶聯，結合成具有特異親和性的分離介質。吸附樣品：親和層析介質選擇性吸附生物活性物質.樣品解吸：選擇適宜的條件使被吸附物活性物質解吸。特點：經過一次處理可得到高純度活性物質。18、固定化細胞的特點？無須進行酶的分離純化。細胞保持酶的原始狀態，固定化過程中的酶回收率高。細胞內酶比固定化酶穩定性更高。細胞內酶的輔因子可以自動再生。細胞本身含多酶體系，可以催化一系列反應。抗污染能力強。191、簡甘,，高子交換纖維素的挎點有曝些T答，腐子交換料策素的特點是商子交換料柴素為開敝的長鏈骨架，大合子物質畿自由?地在栽?中擴嵌卻交換，親水性強，底而和大，吸易附大分子.交操基團稀味『對大?分子的實際變挨容魚大，蜘肋弱’交挽和洗脫條性埃機不易引起變牲?小淅力強.能分陶堂雜的生熟大分子卷合物.20、蘭*謁物代分炎」L基因重笙部L圭沿療劑煩八基因必物F天愁蘭島芙物⑴蘭N與渤分吉省的史物“I■踮重紐菊捌目I呈園跖熱的區別：口歸重生研甲眼住用重紐皿艾木'?、巳潔呈園_程忒卡和冬H責_L程長卞；制迄的重紐冬打圭白卮羌"呻股*單克隆抗寸」她倒可子等；基因I藥啊即以昌因1電責(邙上成酒廠向星礎，圳亍血成打基屈片療用.呈可疫苗.反乂藥恂”秋醇手一2、二粉藥切肢作用特點；藥坦學精性；⑴芟理活悵高＜2)宓亍佐什對治廳迎t珞上-匕訊制臺理,療效可靠■3)春副作用較少J營養價值高，丁)生理副作用常用麥生°理化特性；二：受捌玄粉中的肓池物質合量低，呆員種獎多且合量招宜較高。e主物活性帆質狙成結構復雜、稿定性差。⑶生物材料易染菌,腐員⑴生物1藥物制劑的特殊〃求。21、離子交換的基本原理離子交換法是通過離子交換劑上的離子與水中離子交換以去除水中陰離子的方法。22、離子交換樹脂的類型（1） 強酸性陽離子樹脂（2） 弱酸性陽離子樹脂（3） 強堿性陰離子樹脂（4） 弱堿性陰離子樹脂24、影響液液萃取的主要因素萃取劑的選擇、pH的范圍、溫度的確定、鹽析、帶溶劑、去乳化的作用等25、動物細胞培養技術原理細胞增殖26、 超濾技術的優點操作簡便，成本低廉，不需增加任何化學試劑，尤其是超濾技術的實驗條件溫和，與蒸發、冷凍干燥相比沒有相的變化，而且