第四章抗體制藥抗體？1937年Tiselius用電泳法將血清蛋白分離為白蛋白、α（甲種球蛋白）、β（乙種球蛋白）、γ球蛋白（丙種球蛋白），并證明抗體活性主要存在于γ球蛋白組分。在相當一段時間內丙種球蛋白稱為抗體的同義詞。第一節概述抗體？

抗體是指能與相應特異性結合的具有免疫功能的球蛋白（Ig）。它是機體免疫系統受抗原物質刺激后，B淋巴細胞被活化、增值和分化為漿細胞合成和分泌的球蛋白。第一節概述抗原決定簇？

是指抗原分子中決定抗原特異性的特殊化學基團，又稱表團，通常由5-7個氨基酸殘基或5-7個多糖殘基/核苷酸組成。抗原決定蔟是T細胞受體、B細胞受體和抗體識別結合的基本單位，他們之間的相互作用具有高度特異性。如：菌體抗原（O抗原）、鞭毛抗原（H抗原）等。第一節概述多克隆抗體？

病原微生物含有多種抗原決定簇的抗原物質，因此這些抗體制劑也是多種抗體的混合物，故稱多克隆抗體，會給治療和診斷帶來誤差。第一節概述單克隆抗體？1975年Kohler和Milstein首先利用B淋巴細胞雜交瘤技術制備出單克隆抗體。他們將抗體產生細胞于具有無限增殖能力的骨髓瘤細胞相融合，通過有限稀釋法及克隆化使雜交瘤細胞成為純一的單克隆細胞系，此細胞系能產生結構和特異性完全相同的高純度抗體。第一節概述單克隆抗體？由一種抗原決定簇刺激機體，由一個B淋巴細胞接受該抗原所產生的抗體。單克隆抗體具有高度特異性、均一性、來源穩定、可大量生產等特點。第一節概述以單克隆抗體作為載體的藥物可對腫瘤進行定向治療。但是，臨床應用的實踐證明，免疫導向法并沒有成功，其障礙有：①單克隆抗體均是鼠源性抗體，應用于人體內可產生人鼠抗體，加速了排斥反應，在人體內半衰期只有5~6h，難以維持有效藥物作用靶組織時間。②完整的抗體分子，即Ig的相對分子質量過大，難以穿透實體腫瘤組織，達不到有效的治療濃度。第一節概述基于上述原因，需從兩個方面對單克隆抗體加以改造：①降低單克隆抗體的免疫原性。②降低單克隆抗體的相對分子質量。利用基因工程技術制備出基因工程抗體，即可達到上述目的。第一節概述單克隆抗體藥的現狀抗體藥的銷售額97年~99年由4.68億美元增長到13億美元03年抗體類藥物總銷售額將會達到50億美元250多種抗體類藥物在臨床試驗中1/3已進入三期臨床1/4已通過臨床三期試驗美國市場上有種治療用的抗體藥物第一節概述單克隆抗體藥的現狀1994年，Centocor的Reopro一種血小板表面受體的單克隆抗體片段被批準用于臨床來預防治療血栓形成1997年批準上市的12種生物新藥中有2種是抗體藥1998年上市的12種新藥中有6種是抗體藥2000年又批準了Mylotarg用于治療急性髓細胞白血病的抗CD33單克隆抗體2001年已批準及預期會被批準的10多種生物新藥中，也有5種是屬于抗體類藥第一節概述抗體藥物市場穩步增長第一節概述第一節概述全球有超過200家上市或未上市公司正在研發用于臨床診斷和治療的單克隆抗體正在進行臨床試驗的抗體公司（38家）第一節概述當前美國治療性抗體市場第一節概述當前擋美國飲治療冰性抗俗體市漿場第一解節聾概默述中國網抗體列研究過現狀第一給節績概慰述第二近節份單克蠅隆抗催體及雪其制葉備一、臂抗原拖與動趟物免攝疫二、伴細胞礙融合躍與雜鄰交瘤殿細胞震的選瞞擇三、纏篩選趕陽性壇克隆射與克共隆化四、釀雜交奇瘤細健胞抗恨體形手狀的嶺鑒定五、嘉單克甜隆抗該體的縱大量辟制備六、閑單克臉隆抗陜體的城純化第二買節蘇單克協隆抗秋體及董其制鑄備設計唐方案鉆：一個B淋巴立細胞--筍--只分蜻泌一秒種特熱異性母抗體小鼠枕骨髓胖瘤細究胞--宵--能無丸限增妻殖雜種捆細胞第二嬸節臉單克忠隆抗似體及順其制囑備第二結節街單克留隆抗現體及蒜其制穿備㈠雜交蔽瘤技是術產裂生的3個技籌術關老鍵1.淡B淋巴孔細胞占與骨莊髓瘤瓦細胞富的特栗性：B淋巴財細胞更（B糊ly虎mp乎ho品cy針te蛛s）：接受梨抗原宵刺激榴后，級能分母泌針過對該珍抗原甘的特魄異性熔抗體，絞在體剃液免史疫中挖具有呀重要四功能貞。B淋巴寇細胞晃本身知是一泡種終撇末分第化細較胞，總通常醫不再進行樓細胞處分裂膀，存餐活一滿點時怕間后蝦便會鮮死亡--縱--割-短命細胞第二定節僻單克配隆抗庸體及叫其制魯備骨髓安瘤細竭胞（my處el問om歲ace沖ll各s）：惡性廁增殖預的轉某化細忠胞，腎只要娘營養千條件云適合苗可永石遠分裂延和存鄰活--懲--塘-長命許細胞。經篩危選與帽馴化足，現顧已建枯立多忍種骨才髓瘤丘細胞--鋼--孔-沒有抗辭體分印泌物。第二攏節華單克嫩隆抗糕體及米其制乓備2.細胞坦融合謹技術舊：第二詞節訂單克暗隆抗碧體及爪其制輛備3.雜交憲瘤細負胞的囑篩選廢：第二阿節外單克桐隆抗釋體及肚其制右備第二封節望單克釘隆抗轎體及籍其制郊備第二丸節散單克飽隆抗繡體及多其制蛇備第二禾節推單克曉隆抗息體及腰其制商備第二水節撲單克佛隆抗上體及餓其制卵備一、爽抗原徹與動相物免藝疫第二體節耍單克軌隆抗撞體及陵其制福備第二游節濕單克漢隆抗性體及悅其制悲備1.抗原動物臟體內抗體特異叉性差煎、純撿度低廣產量違低，簽反應吐不夠狀靈敏2.抗原動物蒼體內抗體抗原闖不純抗體菌不純篩選雖單一彩效應B細胞不能賄增殖昆，產仔生大齊量抗嘩體刺激效應B刺激效應B第二難節呀單克御隆抗鑄體及償其制艙備動物撕免疫:特定目標多抗原動物脾臟慚中B淋巴典細胞B淋巴葉細胞大量鉗繁殖免疫刺激能分檔泌針視對于芹該抗司原的特異葵性抗富體目的壘：在細無胞融劣合后賞獲得盡扇可能雙多的圓分泌針鼠對于胸該目該標抗原宋的特壯異性醬抗體的語雜交敗瘤細勢胞第二臺節浸單克瞎隆抗規體及貍其制么備常用街免疫伏方法文：常規弦免疫壁法“穩武妥；直優勢初克隆侮”脾內暫一次健性免濤疫法“省趁時；煉省抗今原”短程復免疫碗法“省齒時”體外拿免疫畜法“操藥作繁陳瑣”免疫宗途徑辱：皮下榴注射腹腔魔注射靜脈沒注射第二申節通單克掛隆抗模體及美其制杠備常規槽免疫渾法：第二膽節暖單克穴隆抗美體及沙其制近備脾內過免疫畢法：脾內獵免疫初法即姿在麻唇醉條躬件下產直接盜把0.角1~創0.爬2ml的抗粘原注視入脾兩臟進姥行免妨疫。制脾內棟免疫鎖法可追提高小唐鼠對繞抗原散的免混疫反涉應，致節省潛抗原換用量搏，細胞抗打原只猛需105個左妄右，是可溶耍性抗棗原只鎮需10μg左右導。第二波節裝單克劫隆抗鋸體及膠其制己備體外往免疫于法：體外洞免疫戴法的危優點證很多明，所勵需抗猜原量混少，具一般尼只需冒幾微糟克，耕免疫蹦期短炕，僅4~自5天，藝干擾因素蘋少，潔已成俘功的休制備友出針閱對多巨抗原能的單毫克隆抗校體，務但融賄合后遇產生棵的雜剝交瘤花細胞竭株不由夠穩定。第二逼節碗單克騎隆抗李體及濾其制暮備二、卻細胞甲融合睬與雜惠交瘤記細胞軋的選鴉擇細胞盯融合宣方法遷：病毒痕介導悅的細贊胞融乳合PE戒G介導堆細胞是融合電極倦融合第二臣節聯單克霧隆抗前體及棉其制覽備細胞便懸液仇的制風備與軋融合⑴脾細震胞懸壯液的采制備展：最后會一次市免疫掀后第3天制備⑵骨髓菌瘤細執胞懸淋液的盆制備青：于對旨數生黎長期突制備⑶福細胞旋融合覺：5%會P旗EG（10暖00果~4婦00隔0），pH按8.駕0，38℃，1m旨in第二嫂節何單克眉隆抗狗體及獵其制盟備2.或H四AT培養驅基的欠篩選融合基后細報胞混誰合液HA務T培養您基HT培養系基正常夫培養公基2確we圣ek桌s棋la叉te礎r1閉we厭ek趕l浮at齡er第二聽節久單克祝隆抗吐體及尺其制矛備三、文篩選依陽性打克隆他與克仆隆化常用沃方法征：要求棕：簡便棋、快輝速、蒜敏感溫；在短構時間脖能檢津測大池量樣艦品酶聯棚免疫歌吸附毅法（en模zy量me折-l知in稈ke儲dim訴mu驚no妥so燙rb倚en夾tas米sa繭y，EL悄IS巷A）間接沸免疫啄熒光欺法（In輩di器re扣ctim勇mu昆no內fl木uo滅re糞sc栽en躍ce，IF翅A）放射旋免疫遇法（ra時di揪oi僵mm刊un玩oa述ss胡ay，RI紀A）雙向吸擴散快法第二捐節隆單克巷隆抗哥體及還其制蒜備酶聯散免疫儉吸附腔法（EL次IS愿A）技術脖原理煩：第二謀節燙單克藏隆抗孔體及曠其制洽備四、聰克隆懂化常用稿克隆明化方遼法：有限意稀釋始法軟瓊祝脂平短板法顯微驅操作種法80個細/9漿6孔飼養期細胞期（fe添ed敬er天c湯el屢ls）EL南IS購A法檢蹈測單殃克隆懶雜交蕩瘤細穿胞的陽培養宿上清聞，選出籠分泌達特異匪性抗負體的事陽性短孔，穩所分皆泌抗冒體即妙為單克棒隆抗匯體。第二黃節胞單克投隆抗錄體及蕉其制大備單克立隆抗囑體（mo傭no零cl悉on陶al隆a羨nt爹ib岸od朱y，MA材b）由單券一克籍隆的藏雜交側瘤細乞胞分邁泌的猾抗體先，只畫針對糾于一漸個抗原震決定嗎簇--投--單克耳隆抗丸體（mo癥no險cl下on譽al宴a開nt藝ib脆od雄y，MA更b）單克醫隆抗是體優娃點：高度納純一高度瘦專一應用貍：疾病酒的論違斷和永治療（生凱物導州彈）生物柔大分項子的跳鑒定注、定瘋位和墾分離若純化細胞滾器的租鑒定憑、定鞏位和老分離特定牽細胞轟或病元毒的臭鑒定勾、定義位很蘭分離第二柱節騙單克礙隆抗燒體及憲其制名備五、慰單克矩隆抗環體的哨大量顆制備常用拼的大徐規模皺培養頑方法宰：動物倘接種粘法轉瓶欄培養射法細胞荒培養千罐法第二辨節徐單克臨隆抗輪體及極其制宰備五、達單克屯隆抗侄體的銷大量殲