病理檢驗技術

常規組織病理技術組織切片的染色石蠟切片HE染色石蠟切片HE染色

操作流程(使用改良

Lillie-Mayer蘇木精染液)：1.二甲苯(Ⅰ)5～10分鐘

2.二甲苯(Ⅱ)5～10分鐘

3.95%的乙醇(Ⅰ)3～5分鐘

4.95%的乙醇(Ⅱ)3～5分鐘

5.80%的乙醇1～2分鐘

6.蒸餾水1～2分鐘

7.蘇木精染液5～8分鐘

8.流水稍洗2～3秒石蠟切片HE染色

操作流程(使用改良

Lillie-Mayer蘇木精染液)：9.1%的鹽酸乙醇2～5秒

10.流水沖洗15～20分鐘

11.0.5%的伊紅水溶液2～5分鐘

12.蒸餾水稍洗1～2秒

13.80%的乙醇1～2秒14.95%的乙醇1～2秒

15.無水乙醇(Ⅰ)2～5秒

16.無水乙醇(Ⅱ)5～10秒

石蠟切片HE染色

操作流程(使用改良

Lillie-Mayer蘇木精染液)：17.無水乙醇(Ⅲ)10～30秒

18.二甲苯(Ⅰ)1～2分鐘19.二甲苯(Ⅱ)1～2分鐘

20.中性樹膠封片染色結果：細胞核藍色,細胞質、肌纖維、膠原纖維、甲狀腺膠質等呈深淺不同的紅色。紅細胞、角蛋白等呈明亮的橙紅色。石蠟切片HE染色

注意事項

：

1.切片脫蠟要干凈。2.二甲苯脫蠟后按常規是用無水乙醇洗去二甲苯。3.蘇木精染液要配好蘇木精染液配制的好壞，決定染色的優劣。蘇木精染液染色時間與染液的配方和染液的新舊有關。

Harris蘇木精液染色約需5～8分鐘，如舊液可適當延長時間。改良

Lillie-Mayer蘇木精染液配制后馬上染色需時約8分鐘，使用1周后或時間更長，染色時間為3～5分鐘即可。所用的蘇木精液應定期過濾，避免氧化膜及沉淀等污染切片。石蠟切片HE染色

注意事項

：4.1%的鹽酸-乙醇分化時間與切片厚薄、組織類別和鹽酸-乙醇的新舊有關。一般是把裝有切片的染色抽置入1%鹽酸-乙醇時提起放下1～3次，總時間約2～5秒已足夠。切片在流水沖洗后放在顯微鏡下觀察染色效果，如細胞核染色淡則可從第6步開始重染，如過深則可再置入鹽酸-乙醇分化1次。

石蠟切片HE染色

注意事項

：

5.鹽酸-乙醇分化后的流水沖洗時間要足夠，目的是把酸徹底沖洗于凈，使組織返藍，也避免切片殘留酸液使切片容易褪色，流水沖洗時間約10～20分鐘。如要縮短時間,可置入Scott促藍液或1%的碳酸鋰水溶液2～3秒即可藍化。藍化后需流水沖洗5分鐘,將堿性的促藍液除去。如果組織偏堿性會影響酸性染料伊紅染液的染色。石蠟切片HE染色

注意事項

：6.0.5%的伊紅水溶液染色時間約2～5分鐘，如染液陳舊，會著色困難。在伊紅液中再加入冰醋酸1滴，可立即恢復伊紅的染色力。但如加冰醋酸過量或反復多次加入冰酯酸，伊紅會出現沉淀，染色力就減弱。如伊紅過染，掩蓋細胞核的藍色，對比染色不理想，可將切片水洗或在80%的乙醇脫水時間延長約數秒鐘使過染的伊紅脫色。石蠟切片HE染色

注意事項

：7.第14步95%的乙醇脫水后常規是用三缸無水乙醇脫水，在用過2、3次后，尤其是在潮濕天氣，無水乙醇很快就含水，因此，把第16步的無水乙醇改為苯酚二甲苯(1:3)混合液進行脫水，可省去第17步的無水乙醇，脫水時間3～5分鐘，可徹底脫去切片水分。苯酚二甲苯脫水力強，可反復多次使用。切片殘留苯酚會使組織褪色，苯酚二甲苯脫水后，再經三缸二甲苯透明并徹底洗去苯酚。石蠟切片HE染色

注意事項

：8.苯酚別名石炭酸，為白色針狀結晶，配制苯酚二甲苯前需要將苯酚放入56℃溫箱內或水浴加熱溶解。苯酚如被氧化后會變成紅色，不能使用。9.使用一些二甲苯代替品如松節油代替二甲苯脫蠟和透明，可避免二甲苯的毒性，但脫蠟和透明效果會比二甲苯差，需要增加脫蠟和透明時間。同時，也要注意這些二甲苯代替品對各種染色是否有影響，使用一段時間后是否會變得黏稠，影響染色效果。石蠟切片HE染色

注意事項

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10.在使用全自動HE染色機時，試劑配制和染色程序可參照手工操作，