實驗一

顯微鏡的使用及微生物形態的觀察實驗一顯微鏡的使用及微生物形態的觀察1．熟悉普通光學顯微鏡的構造及各部分的功能；2．學習并掌握油鏡的原理和使用方法；3．學習觀察微生物的個體形態；4．學會生物圖的繪制。一、目的要求實驗一顯微鏡的使用及微生物形態的觀察二、顯微鏡的基本構造1.物鏡轉換器2.接物鏡3.游標卡尺4.載物臺5.聚光器6.彩虹光闌7.光源8.鏡座9.電源開關10.光源滑動變阻器11.粗調螺旋12.微調螺旋13.鏡臂14.鏡筒15.目鏡16.標本移動螺旋實驗一顯微鏡的使用及微生物形態的觀察顯微鏡是由機械裝置和光學系統兩大部分組成。

1．機械裝置

鏡座（base）和鏡臂（arm）鏡座位于顯微鏡底部,呈馬蹄形，它支持全鏡。鏡臂有固定式和活動式兩種，活動式的鏡臂可改變角度。鏡臂支持鏡筒。鏡筒（bodytube）是由金屬制成的圓筒，上接目鏡，下接轉換器。鏡筒有單筒和雙筒兩種，單筒又可分為直立式和后傾式兩種。而雙筒則都是傾斜式的，傾斜式鏡筒傾斜45°。雙筒中的一個目鏡有屈光度調節裝置，以備在兩眼視力不同的情況下調節使用。

實驗一顯微鏡的使用及微生物形態的觀察轉換器（nosepiece）：為兩個金屬碟所合成的一個轉盤，其上裝3-4個物鏡,可使每個物鏡通過鏡筒與目鏡構成一個放大系統。載物臺（stage）：又稱鏡臺，為方形或圓形的盤，用以載放被檢物體，中心有一個通光孔。在載物臺上有的裝有兩個金屬壓夾稱標本夾，用以固定標本；有的裝有標本推動器，將標本固定后，能向前后左右推動。有的推動器上還有刻度，能確定標本的位置，便于找到變換的視野。調焦裝置：是調節物鏡和標本間距離的機件，有粗動螺旋（coarseadjustment）即粗調節器和微動螺旋（fineadj-ustment）即細調節器，利用它們使鏡筒或鏡臺上下移動，當物體在物鏡和目鏡焦點上時，則得到清晰的圖像。實驗一顯微鏡的使用及微生物形態的觀察2．光學系統物鏡（objective）：安裝在鏡筒下端的轉換器上，因接近被觀察的物體，故又稱接物鏡。其作用是將物體作第一次放大，是決定成像質量和分辨能力的重要部件。物鏡上通常標有數值孔徑、放大倍數、鏡筒長度、焦距等主要參數。如10×/0.25；160/0.17，其中“10×”表示放大倍數，“0.25”表示數值孔徑（numericalaperture），“160/0.17”分別表示鏡筒長度和所需蓋玻片厚度（mm）。目鏡（coularlens）：裝于鏡筒上端，由兩塊透鏡組成。目鏡把物鏡造成的像再次放大，不增加分辨力，上面一般標有4×、10×、16×等放大倍數，可根據需要選用。一般可按與物鏡放大倍數的乘積為物鏡數值孔徑的500-700倍，最大也不能超過1000倍的選擇。目鏡的放大倍數過大，反而影響觀察效果。實驗一顯微鏡的使用及微生物形態的觀察聚光器（condenser）：光源射出的光線通過聚光器匯聚成光錐照射標本，增強明度和造成適宜的光錐角度，提高物鏡的分辨力。聚光器由聚光鏡和虹彩光圈（irisdiaphragm）組成，聚光鏡由透鏡組成。虹彩光圈由簿金屬片組成，中心形成圓孔，推動把手可隨意調整透進光的強弱。調節聚光鏡的高度和虹彩光圈的大小，可得到適當的光照和清晰的圖像。光源（lightsource）：較新式的顯微鏡其光源通常是安裝在顯微鏡的鏡座內，通過按扭開關來控制；老式的顯微鏡大多是采用附著在鏡臂上的反光鏡，反光鏡是一個兩面鏡子，一面是平面，另一面是凹面。在使用低倍和高倍鏡觀察時，用平面反光鏡；使用油鏡或光線弱時可用凹面反光鏡。濾光片（filter）：可見光是各種顏色的光組成的，不同顏色的光線波長不同。如只需某一波長的光線時，就要用濾光片。選用適當的濾光片，可以提高分辨力，增加影像的反差和清晰度。濾光片有紫、青、藍、綠、黃、橙、紅等各種顏色的，分別透過不同波長的可見光，可根據標本本身的顏色，在聚光器下加相應的濾光片。

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三、基本原理

1、細菌的個體形態是指細菌細胞的大小，形狀等特征，利用觀察個體形態對細菌進行初步識別和鑒定。實驗一顯微鏡的使用及微生物形態的觀察實驗一顯微鏡的使用及微生物形態的觀察2、放線菌是指能形成分枝絲狀體或菌絲體的一類革蘭氏陽性細菌。常見放線菌大多能形成菌絲體，緊貼培養基表面或深入培養基內生長的叫基內菌絲，基絲生長到一定階段還能向空氣中生長出氣生菌絲，并進一步分化產生孢子絲及孢子。實驗一顯微鏡的使用及微生物形態的觀察實驗一顯微鏡的使用及微生物形態的觀察3、霉菌可產生復合分枝的菌絲體，分基內菌絲和氣生菌絲，氣生菌絲生長到一定階段分化產生繁殖菌絲，由繁殖菌絲產生孢子。霉菌菌絲體(尤其是繁殖菌絲)及孢子的形態特征是識別不同種類霉菌的重要依據。實驗一顯微鏡的使用及微生物形態的觀察毛霉與根霉實驗一顯微鏡的使用及微生物形態的觀察青霉分生孢子分生孢子梗小梗梗基附枝實驗一顯微鏡的使用及微生物形態的觀察曲霉分生孢子次生小梗初生小梗頂囊分生孢子梗足細胞實驗一顯微鏡的使用及微生物形態的觀察顯微鏡、細菌三型涂片、霉菌和放線菌的永久玻片等。四、器材實驗一顯微鏡的使用及微生物形態的觀察五、操作步驟

（1）置顯微鏡于平穩的實驗臺上，鏡座距實驗臺邊沿約3-4㎝，鏡檢者姿勢要端正，一般用左眼觀察，右眼便于繪圖或記錄，兩眼必須同時睜開，以減少疲勞，亦可練習左右眼均能觀察。

（2）調節光源、光線較強的天然光源宜用平面鏡；光線較弱的天然光源或人工光源宜用凹面鏡。

實驗一顯微鏡的使用及微生物形態的觀察實驗一顯微鏡的使用及微生物形態的觀察（3）低倍鏡觀察檢查的標本需先用低倍鏡觀察，因為低倍鏡視野較大，易發現目標和確定檢查的位置。將三型涂片玻片標本置鏡臺上，用標本夾夾住，移動推動器，使觀察對象處在物鏡正下方，轉動粗調節器，物鏡降至距標本約0.5cm處，由目鏡觀察，此時可適當地縮小光圈，否則視野中只見光亮一片，難見到目的物，同時用粗調節器慢慢升起鏡筒，直至物像出現后再用細調節器調節到物像清楚時為止，然后移動標本，認真觀察標本各部位，找到合適的目的物，并將其移至視野中心，準備用高倍鏡觀察。實驗一顯微鏡的使用及微生物形態的觀察（4）高倍鏡觀察

將高倍鏡轉至正下方，在轉換物鏡時，需用眼睛在側面觀察，避免鏡頭與玻片相撞。如果高倍鏡觸及載玻片應立即停止旋動，說明原來低倍鏡就沒有調準焦距，目的物并沒找到，要用低倍鏡重調，如果調對了，換高倍鏡時基本可以看到目的物，若有點模糊，用細調節器調就清晰可見。找到最適宜觀察的部位后，將此部位移至視野中心，準備用油鏡觀察。實驗一顯微鏡的使用及微生物形態的觀察（5）油鏡觀察

①用粗調節器將鏡筒提起約2㎝，將油鏡轉至正下方。②在玻片標本的鏡檢部位滴上一滴香柏油，切勿加多。③從側面注視，用粗調節器將鏡筒小心地降下，使油鏡浸在香柏油中，其鏡頭幾乎與標本相接，應特別注意不能壓在標本上，更不可用力過猛，否則不僅壓碎玻片，也會損壞鏡頭。④標本觀察完畢后，轉動粗調節器將鏡筒升起，取下標本玻片。立即用擦鏡紙將鏡頭上的香柏油擦凈，然后用擦鏡紙蘸少許二甲苯擦去鏡頭上殘留的油跡，最后再用干凈的擦鏡紙擦去殘留的二甲苯。

實驗一顯微鏡的使用及微生物形態的觀察（6）觀察后的處理工作擦完后，把物鏡轉離光軸，把反光鏡轉到與載物臺垂直的方向，以減少灰塵粘落上面，而后罩上鏡套，小心的放回鏡箱內，保存備用。

注意：微生物標本片，多用涂片法制成，觀察完畢，不能用力擦去玻片上的鏡油，只能用擦鏡紙輕輕壓吸或滴一滴二