化學藥物結構確證研究的技術要求與案例分析

王玉成

中國醫學科學院

醫藥生物技術研究所目錄(一)結構確證研究的一般原則和要求(二)對不同類別藥品結構確證的要求(三)對特殊化學結構藥品結構確證的要求(四)各項波譜和測試的技術要求(案例)

1.結構確證研究的主要對象

2.結構確證研究的基本方法

3.結構確證研究的主要內容

4.結構確證研究的一般要求(一)結構確證研究的一般原則

和要求1.結構確證研究的主要對象

經化學全合成或半合成、微生物發酵以及從動、植物中提取的原料藥,包括新藥、進口藥和已有國家標準的藥品.按來源：

化學合成、半合成、天然產物中提取、發酵等;按組分：

單一組分、多組分混合物;按分子量：

小分子化合物、大分子化合物;按結構特點：

成鹽化合物和非成鹽化合物、手性化合物和非手性化合物、含結晶水/溶劑和不含結晶水/溶劑等;2.結構確證研究的基本方法

①化學方法：理化分析、元素分析、化學關聯等②物理方法：波譜方法、衍射技術

a.射頻波、微波與物質的相互作用：核磁共振、電子順磁共振等(ESP根據譜圖中吸收峰的位置、譜線的積分強度、譜線的寬度及超精細結構等信息可以鑒定自由基和過濾金屬離子等順磁粒子的結構狀態，檢測它們的濃度（可檢測到10-14摩/升）。)b.紅外、可見、紫外光與物質的相互作用：紅外光譜、紫外光譜、拉曼光譜等

c.X－射線與物質的相互作用：X－射線衍射等

d.電子與物質的相互作用：質譜、電鏡等

e.其他：熱分析、原子吸收、原子發射等3.結構確證研究的主要內容

①骨架（平面）結構：

分子中各原子之間的連接順序和方式;②構型：

分子中各原子之間的空間相對位置;③結晶水/結晶溶劑：

與水、有機溶劑通過氫鍵等結合;④晶型：

分子（或原子）在晶體中的排列方式;

骨架（平面）結構

例：氟嗎西尼骨架（平面）結構的研究方法:a.單晶X－射線衍射;b.常規方法，如元素分析（或高分辨質譜）、UV、IR、NMR（包括二維譜）、MS等組合;

應根據化合物骨架結構的特點及其復雜程度、有無對照品及參考文獻，合理選用測試項目。

構型：

幾何構型:雙鍵、環狀化合物，常用順－反（cis－trans）或Z－E表示

例：西尼地平（±）-3-（2-甲氧基乙基）-5-[3-苯基-2（E）-丙烯基]-2,6-二甲基-4-（3-硝基苯基）-1,4-二氫-3,5-吡啶二甲酸酯

例：拉米夫定

(2R-順式)-4-氨基-1-(2-羥甲基-1，3-氧硫雜環戊-5-基)-1H-嘧啶-2-酮

幾何構型的研究：

理化性質差別明顯

a.

理化常數，例如熔點等;

b.氫譜、碳譜;

c.

紅外光譜、紫外光譜等;

光學異構：由于分子的不對稱性引起，常用D-L或R-S表示。

例：那格列奈（－）－N-（反-4-異丙基環基甲酰基）-D-苯丙氨酸

例：前列腺素E1（1R，2R，3R）-3-羥基-2-[（E）-（3S）-3-羥基-1-辛烯基]-5-氧代環戊烷庚酸

光學異構的研究：a.

比旋度測定

b.手性柱色譜（HPLC、GC）

c.

核磁共振（NMR）

d.

單晶X—射線衍射（SXRD）

e.

旋光光譜（ORD）(1.決定化合物之絕對立體構造。2.決定蛋白質2級與3級構造。

)f.

圓二色譜（CD）g.

其他方法對照品法——根據對照品的構型推定化學關聯法——利用合成工藝分析

例如，左旋西替利嗪的構型確證：手性柱色譜定位（與對照品對比)、比旋度數據、光學純度分析晶型的研究:

晶型

是化合物一個重要特性;對于多晶型藥物,因晶格結構不同,某些理化性質(如熔點、溶解度、穩定性)可能不同;而且在不同條件下,同一化合物的各晶型之間可能會發生相互轉化。對于難溶性固體口服制劑,其原料藥晶型可能影響藥物的溶解度、穩定性、藥代動力學性質進而可能影響藥效。所以對于已有文獻報道的多晶型化合物應明確其晶型,晶型的一致性;對于創新藥也應注意積累相關研究資料觀察有無多晶型現象。晶型的研究:

a.粉末X-射線衍射法

b.紅外光譜法、拉曼光譜法

c.熔點法

d.熱分析

e.光學顯微鏡法

無對照品和文獻報道：考察不同結晶條件下（溶劑、溫度、結晶速率等）制備樣品的熔點、紅外光譜、粉末X－射線衍射等;

有對照品:

對比自制藥物與已上市藥物的熔點、紅外光譜圖、粉末X－射線衍射圖譜等;

有文獻報道:

對文獻資料進行分析，選取能夠準確反映產品晶型的測試項目;結晶水/結晶溶劑的研究:

藥物分子通過氫鍵等和水、有機溶劑結合形成水合物/溶劑化物,含有不同數量結晶水/結晶溶劑的化合物可能具有不同的物理性質,進而可能影響藥物的生物利用度,因此對于原料藥應明確其所含的結晶水/溶劑的情況。結晶水/結晶溶劑促的研究:a.元素分析b.熱分析c.干燥失重養、水分檢沙查d.單晶X-射線衍吊射創新藥案：在干燥失絞重、水分憶測定研究情的基礎上套，通過熱怕分析、元扒素分析等撫確證樣品錘分子中結動晶水/結晶溶劑病的數量;已上市上的藥品依：采取合雀適的分封析方法對對樣品鉤進行分便析，以俱確證其罵結晶水/結晶溶擱劑的情傳況與已曾上市產狡品一致;小結：在審評過接程中專家徑評價的關歐注點一般讓包括:結構確伍證方案牙設計的偶合理性,是否對化巡壽合物所有絹要素進行林了考慮;研究內揮容設置家的全面浮性,所有的結伯構特征是刊否已被確練證;分析方法珍選擇的正息確性,所用方法評能否針對亭性地解決完結構問題嬸。研發者揀在進行汁結構確冊證研究押時,測試項目痕的選擇要碌依據化合單物結構特域點、需要晴解決的結程構問題、導各種方法珍所能解決線的結構問鍵題等綜合專考慮。①對測試樣初品和對照叼樣品的要控求：測試樣品:a.精制方帖法測試樣捷品要采鬼用和原伴料藥制蕩備工藝處中相同環的精制步方法、或工藝條峰件進行云精制；攻對于進喉行晶型毒分析、摧結晶水/結晶溶斗劑分析般時尤其很需要注喬意，因熊為不同傷的精制述方法和跑工藝條佛件可能倚產生不努同的晶捏型、結帖晶水/溶劑。b.純度要牢求大于99.蒙0%，雜質含緊量應小于0.5符%；對栗于手性脹藥物，筒應增加躬對對映螺體、非候對映體惜純度要軍求，一冠般不篇低于99.5祥%。注意點臘：仿制藥追物：相楚關物質臂大于或服等于0.1%，要進膀行結構糊確證（晌注意響弦應因子緞）創新藥物荷：除了與領仿制藥物耗一樣之外另，盡可能睬多的羅列紹所有可能曬雜質，要債與中間體同關聯，特溫別注意手翅性問題！對照品:a.合法來源她證明購得的室標準品(已有國爆家標準載的藥品)市售原料猜藥市售制劑念中提取得圾到的原料傭藥從正規試鎮劑公司購咬得的試劑泡等（有的申報買資料中，座未選擇上吊市原料藥肉或其他合敘法對照品晌，而是采濁用自己單循位精制的敲產品，這辦種“自身瞞”對照的貧數據和圖低譜對于結凡構確證沒葉有任何幫柔助。）b.精制方法襪：對于用于乏晶型、結蝴晶水等信爪息確證的科對照品，幣不應采用瘡處理后原寫料藥或制善劑中提取需物作為對療照品，因親為原料藥祥和制劑在紀不同溶媒林處理后，處會對樣品瘡真實的晶番型和結晶倘水產生影身響，造成分誤判。c.純度檢查勉：對照品蒜的純度速檢查：話申報資合料中應泳提供對業照品的恥純度檢以查結果撿。一般奸來說，梨對照品輝純度應回不低于本精制品匆純度，識以保證靠對照品巖對藥物冊結構確淹證的支帖持力度籃。4.結構確烈證研究倆的一般乘要求②對圖譜、訪數據的要節求附圖應為駁原圖的復紡印件或照館片;圖譜及線圖譜上評的標記測、數據勾應清晰血，并有液完整的蘿檢測日瘦期、各勺項參數墳、測試特條件、切儀器型園號及樣茄品編號貓等記錄棗。各項檢它測數據床應按規團定列表珠說明，仆注明其展順序。肝有對照極品的應森將測試添品和對脈照品同惠一波譜閃的數據程在一個袋表中對似比列出從。如有斑可作參舊照的文禿獻數據趣，也可你列在同造一表中敞。質譜泰應附離亞子裂解炸圖。(二)對不同類估別藥品結切構確證的粘要求未知結嬌構的化料合物：址推論結邪構已知結構炒的化合物側：驗證結讓構①未在國證內外上第市銷售謹的原料噸藥按全新化靠學單體要濕求：推論殼結構a.完成必歇要的各壇項測試;b.應提供充躁分的試驗墊圖譜和數賴據;c.按新化隱合物要政求進行釣圖譜解肉析和綜伴合解析;如有參考詞文獻資料斑，可提供施作參考。②已在國武外上市思銷售但辰尚未在吧國內銷辣售的原元料藥或沾已有國研家標準綿的原料昌藥按已知縫化學結渠構的藥釀物：驗阿證結構可以使敘用對照途品可以參塘考文獻a.有合格梨對照品賞的化合團物：提供測試攀樣品和對糕照品在完韻全相同條壓件和同一糞儀器上測債得的各項蕉圖譜和數惱據，完成前所需的各燒項目測試諸，若二者曲完全相同激，并對重乎要的波譜期訊號和測叔試數據進網行了正確撇解析，即乎可得出二荒者化學結光構一致的握結論。b.有詳細卡文獻數鉛據的化筑合物：可對結吸構確證繼研究的父內容、疑方法提距供線索塘，并為統解析提嚇供參考溉，但是格不能作柱為結構綿確證研醉究的充票分證據峰，仍需典要進行畢較為詳數盡的圖娛譜解析演和綜合霧解析。c.無對照將品和文緒獻數據特的化合啟物：除了目鄭標化合功物的結澇構外，絲式缺乏其稱他支持座性資料鋤，因此污原則上怠應按全最新化學塞單體要蓋求進行暑全面的逢研究，耀提供充毀分的試志驗圖譜帖和數據歪，可結反合其它請研究工恭作（例釋如合成略工藝路攪線的確漸定）以覽進一步紅推論化往合物的羽結構。(三)對特殊化崖學結構藥右品結構確賺證的要求1.立體異構殿體藥物立體異廟構體：①光柱學異構兼體a.對映異效構體b.非對映勉異構體②幾克何異構派體（順撐、反異銜構體）手性藥鈔物----絕對構揮型和相患對構型a.單一對映嬸體----絕對構寬型比旋度測蛛定手性柱識色譜(手性HPL國C和GC)核磁共盜振單晶X-衍射圓二色譜旋光光償譜b.消旋體---息-有多個早手性中轟心時要靈求確定糕相對構戴型;c.立體異構杯混合物---規-確定異構增體的組成唐和比例;“手性藥物瓜申報資料鏡及審評要商點”(藥審中秩心)①應注意哪確證產問品的立困體構型功。可根模據手性班中心的五多少、莫文獻數妻據是否荷充足、挪對照品否的有無科來選擇虛合適的徒確證的坦方法，月必要時囑可采用嘗單晶X－射線衍龜射進行確饒證。②比旋斬度是必須耕的檢測項獵目之一，膠已知的起基始原料的丘構型和化犁學合成方馳法的立體謙選擇性也辛可作為依嘉據之一。2.具有多晶狹型的藥物晶型:是指結晶跳物質晶格殼內分子的飛排列形式移。多晶型身物質晶量格內部讓分子間彩力的差象異可能泛引起藥行物各種弊理化性士質的變震化，瞞主要對陵熔點、皮溶解度沙及溶出慨速率、袋穩定性喬、有效柴性的影事響。重點：以適宜候的方法嫩獲得藥漠物晶型偏的數據奸。常用方法生：粉末X-衍射法紅外吸憶收光譜攔法熔點熱分析光學顯攀微鏡①創新藥肢物a.不同結途晶條件繁下（溶孩劑、溫谷度、結健晶速率拔等）晶蘋型的一疤致性；b.不同晶制型是否戶影響藥掩物活性歇和毒性畝等;②結構已知坐的仿制藥戰品a.力求與被嗚仿制品保尚持一致；特別是被宣仿制藥為起晶型選擇撥性藥物，基且各晶型匹的理化性謎質及生物釣藥劑學性只質有明顯保差異的仿榴制藥品，咳要重點確績定與被仿激制品種晶劃型的完全令一致性（毛熔點、紅逼外吸收光覺譜、粉末X—射線衍射雪圖等)。b.重點關注壓難溶性固彼體口服制兇劑晶型的帳研究；3.合成多體肽類藥廟物氨基酸磁分析（證明膚多肽的快組成是首否正確轟）；質譜測位定（提供相流對分子閃質量及覆序列的共信息）粒；序列分析渴以及肽圖漸測繪等；紫外：對具有生靈色團結構宴的小肽有臺一定的測密試意義；紅外：適用于始小肽（伸含三個窗氨基酸霉的肽）林、擬肽皂等；核磁共振嫁：可對小挽肽的結仿構提供疲部分信供息；其他方養法：HPL齒C、比旋度肥測定等。藥物結構令中有半胱白氨酸，應壁明確其狀爆態（氧化零態或還原炊態）；藥物結構吐中存在二莫硫鍵，應江明確二硫仰鍵的正確過連接點；結合合聾成工藝褲對中間埋體的研耀究，對勻終產品物的結構香進行確口證。4.多糖類藥旗物多糖結構肯的描述包白括:①多糖的分吵子量范圍織；②多糖賀的單糖蹤蝶組分；③單糖傻的連接叔點類型旅；④單糖予和糖苷貧鍵的構之型；⑤重復圍單位;確證方透法：單糖的分獄離、鑒定鉛：紙色譜華法、TLC、HPL判C、氣-質聯用技誘術等；多糖的譽相對分紀子量及暮分子量宿分布測腿定：凝膠色譜擋法；糖苷鍵壁的連接紙方式及蜘糖苷鍵盈的位置天：紅外、疲核磁共獻振、化弦學反應聯后產物桶的分析事等；5.多組分藥系物明確各組能分的組成色比例，對請影響藥效繪和毒性的主要成分進行結獨構確證專。可使用殃經典的芝提取方和法或其惹它分離裂技術，欣如制備宋色譜（TLC，HPL即C），分離并得到主要緞藥效成分舌單體，按貌單體項目笛要求進行宗化學結構明確證。在組分多洲，含量少乎，難于得伐到單體時眼，可使用速聯機分析傻技術，如引氣一質聯疏用（GC—MS），液—質聯用扯（LC—MS），氣—付利葉納紅外聯雕用（GC—FTI奴R），質—質聯用（MS—MS），輔擴助組分協結構的粉驗證及羨定量分鞭析。6.不含金屬理元素的有停機鹽類或停復合物應同時嗓提供成鹽前含后的兩套剪波譜和斥試驗數拴據。對于某些赴波譜測定鏟有困難或柱不易說明細其結構的臘鹽或復合甘物，可測率定藥物酸傲根或堿基鐵的波譜，露并結合其悲他試驗項毯目進行確揚證。7.金屬鹽挎類和絡短合物除通常喪要求的役各項測扛試外，悠還應提微供確證檢分子中厚金屬元解素的種邀類、存簡在形式冰和含量截的有關磨圖譜和墨分析數蟲據。不適于或鐮不能測試煩金屬鹽本邊身的項目同，可以用倉成鹽前的惜酸分子或隸配位體的神相應測試曾結果進行誼佐證。8.半合成化免合物分子母享核的結洪構為已委知并可退以確證擠其原分醫子母核訂結構在儲合成過飼程中未普發生改奏變的，左可適當退簡化對藝母核部劉分結構如的確證厲工作。胸重點對新引入遙基團進行結構牽確證，可貸以結合原巨料結構和忽合成路線咳進行論證寇和說明。如涉及縣構型確蟻證，若脊母核手姜性中心軌構型沒吐有改變繪時，重炭點在于禿側鏈和咽取代基中中新引累入手性氣中心的號構型確捷定。綜合解徑析舉例FABM蠢S22資muM+HM+Na1236457891011121314151236457891011121314CHCH2OCH3123645789101112131412a2b34591011131478612a2b34591011131478612a386452b971110141312364578910111213141512a2b345910111314786申報資黨料的格昨式和內鑒容一.新藥的者化學結瞇構式、復分子式受及分子兵量二.供確認化綠學結構用伯供試品的肯純度及檢摩查純度的扣方法三.確證化學敞結構的方賄法理化常數元素分析四.各項波輔譜和測朝試的技綿術要求紫外吸收咽光譜紅外吸收曬光譜核磁共拴振氫譜核磁共駁振碳譜質譜差熱分析X-射線衍坡射譜綜合解襖析五.參考文遙獻一.新藥的箏化學結侵構式、圍分子式研及分子煩量二.供確認釋化學結謠構用供竿試品的膛純度及杠檢查純寶度的方農法三.確證化拖學結構尾的方法2元素分勾析①主要應用敵：確定元鞠素組成鴨、分子債式;除氧元騎素外，妹其余各逢種元素造一般均指能準確犁測定其孕含量。可以反映稈結晶水/結晶溶事劑、成賠鹽化合雜物的酸吉根和堿扭基等。C、H、N元素可烘采用自唯動元素落分析儀材測定，村其他元舌素可采猜用適宜鳥的物理贈或化學捉方法測木定。②技術要求湊：a.應詳細說戒明使用儀稼器、測定少方法及條餃件。特別用是對測試泄樣品的預蔽處理方法砍、條件。b.同一樣品范測定兩次瓣，兩次實述驗數據同糧時列出，拴不取平均擴值。c.應給出藏計算理比論值所棋依據的備分子式距，包括傘結晶水搖（或結礦晶溶劑)。列表比較實測次值與理論嗎值（一般釘要求誤差逮不超過0.3％），竹初步判盒定供試轎品與目巴標化合旨物的分報子組成稠是否一脂致。d.附測試鍛報告單翁的復印孔件。儀器型鹿號與測延定條件儀器：Car峰lo-凳Erb傍a1臺106元素分休析儀(意大利)測定條加件：105字0℃催化燃燒拘載氣遍：N2氧瓶法密測定測定結果他與解析測定結筍果：樣刺品測定浩結果與幻玉對照品區測定結殊果見附黑表1。結果解析車：樣品與汁對照品的欺實測值同療理論計算株值基本相蟻符，C、H、N、的誤差哲均在千分獻之五以內路，同含5個結晶水銹的鹽酸大云觀霉素分偽子式C14傳H24甲ClN皇2O7?2HCl?5H2O符合。表1樣品（0207捐08）與對萬照品（DJS）的元素咽分析數據CHN樣品（020708）(%)33.667.285.6433.767.375.67對照品（DJS）(%)33.657.305.6733.627.295.68理論計算值(%)33.957.335.66(四)各項波牌譜和測漠試的技窄術要求1.紅外吸收蔥光譜(IR)①基本原效理：分子中化澆學鍵振動恨能級的躍泊遷。②主要娘應用：a.鑒定化拐合物的示結構——有對照品湖、標準圖您譜b.推測化合感物的結構——確定特挖征官能關團、區古分晶型勵等③技術要求羨：a.按藥典規粘定方法校扭正和檢定季儀器；b.正確選摔擇測試山方法和岔條件固體樣禽品首選呆溴化鉀哪壓片法罵；離子交訴換----猴-氯化鉀噴壓片；晶型變化----通-糊法；c.準確、拍合理、凝充分的嗓圖譜解對析;d.按要求格姥式列表和持撰寫資料;儀器型號格與測試儀器：Nico流let勢Impa基ct-4克00型紅外分鐮光光度計儀器測試抽：用聚苯每乙烯膜儀器的測侄定條件測定條克件：樣谷品測定信用溴化距鉀壓片暑法測定圖譜弓：圖1、2附圖3：聚苯喚乙烯膜紅糠外吸收光勞譜。④資料撰寫怒格式儀器測試條愉件儀器校正攏和檢定數據表解析吸收峰(cm-1)

強度振動類型基團2.紫外吸收嬌光譜(UV)①基本原理簽：電子躍理遷②主要恨應用：甘推測共融軛體系排的骨架及結構（艇發色團探、助色慘團）紫外光譜——定性吸收系表數——定量③技術要求a.按藥典世規定方臨法校正商和檢定巴儀器；b.通常要銜求三種虹溶劑：饒中性、0.1N鉆HCl、0.1劣NN盤aOH；c.要求定量愛，準確計夏算摩爾吸勵收系數；d.歸屬主舅要吸收吼譜帶；e.數據列均表說明胃；④資料撰嶼寫格式儀器測試條嚇件儀器校受正和檢宴定數據表解析

溶劑λmax

ε值基團和吸收帶溶劑λmaxnmAbs水194.80200.00210,002.06232.28060.82090.1mol/L鹽酸200.00204.00210.002.05892.26251.2121三乙胺198.00203.00210.002.00952.27111.33163.核磁共振腸氫譜(1H-N炕MR)①基本原木理：利用原歷子核的組核自旋路現象，桃通過一蟻定振動彩頻率的野電磁波永照射時賊，原子疊核吸收溪電磁波氏從低能眨態向高政能態躍奔遷，即蜘核磁共魂振。②主要應司用可提供態供試品拾中氫原橋子數目圣、周圍前化學環境、相登互間關系健、空間排閘列等信息亦。③技術要求a.應使用200編MHz以上高分歌辨NMR儀。b.對各項水測試條峰件應有設明確、槍詳盡的未說明，定如儀器舊型號、凡規格、吸溶劑、努內標。c.對分子中偵全部H原子均封要有明憤確的解沾析和歸團屬。d.對復雜結剛構化合物接，應考慮足采用合適榜的其它技旬術加以佐遺證。④資料撰寫寄格式儀器溶劑、搬內標給出原子警編號的分乓子結構式數據表(如有對照做品或文獻怪數據可以惰對比列入禮表中)解析原子序號化學位移質子數多重性J值相應質子4.核磁共振右碳譜(13C-N墊MR)①基本原衛理：利用原子墳核的核自倒旋現象，逐通過一定在振動頻覆率的電磁烤波照射時膊，原子核鏟吸收電磁波從低求能態向高褲能態躍遷戚，即核磁建共振。②主要應棕用:可提供陶供試品碑中碳原污子的數棍目、所邊處的不同化學褲環境信息喚。③技術要鋤求a.對各項測菠試條件應變有明確、齒詳盡的說他明，如儀未器型號、薦規格、溶瘡劑、內標幟。b.在圖譜凈復雜時鏡，應使誦用質子腸噪聲去睬偶或偏南共振去騎偶技術湊，使圖攝譜簡化添。c.對分子梨中全部C原子均瘡要有明攔確的解危析和歸少屬。d.對復雜正結構化懶合物，冠可與類敘似結構吳化合物倒的化學獻位移進辦行計算蔥比較，胖確定合桃理結構未。④資料撰跌寫格式儀器溶劑給出碳原遼子編號的愧分子結構著式數據表(如有對鞠照品或拉文獻數飯據可以運對比列牲入表中)解析

碳原子序號

化學位移

碳原子類型5.其他核磁溫共振譜DEPT譜:可區分歲碳原子撕的類型;1H－1Hco添sy:可以顯示舟相隔2～3鍵相互之付間存在偶遙合的質子寬對信息;C-鐵Hco役sy類(HM車QC膝,異核多暢量子相腿關譜):可以了解預分子中C-H聯結情況;HSQ話C(異核單量產子相關譜):用于測定1H-13C相關信巖息，可柳以直接撓明確C、H之間的連等接關系;HMB駐C(異核多重賄鍵相關譜):可以顯艷示1H、13C之間遠去程偶合誓的信息戰，即相寶隔二鍵淹和三鍵差的1H、13C之間相源關信號;解析化程合物中景存在的姥結構單機元，推車測化合掃物中各擴官能團餡、結構調單元之態間的連針接關系;19F、31P等:可提供芹相應元飯素的種民類及數劉目、在施分子中什所處的曲化學環遠境等信諸息;常用的傻二維核酸磁共振蠢測試包蛇括H-H川cos檔y（H-H差Corr投elat殖eds姜pect稀rosc壤opy）、HMB扒C（1H-土det辮ect展ed斬mul鋼tip吵le-樸bon撐dh粱ete撕ron童ucl括ear屈mu腳lti瀉ple芬-qu路ant胃um嚴coh研ere鏈nce）、HMQC（1H-d理etec條ted扛hete蟲ronu袍clea及rmu沸ltip稿le-q逆uant醒umc捎oher來ence）等，屈對于結激構復雜販或用一尼般NMR方法難以煩進行結構稀確證的化楚合物，進桶行二維譜未測試可更集有效地確自證藥物的夸結構。碳譜注意瘋點：1.碳信號數般目比實際剩的少，原洲因可能為萌信號重疊繞，或有些弟季碳信號尾弱，或隱究藏在溶劑盛信號內；2.碳信號榴數目比區實際的圍多，原蠶因可能奸是某些宣化合物安存在構年象異構遷。分子式：C44六H69魚NO1郊2.H升2O結構式慢為C44H關69NO瘦12，在其13C全去偶譜林中應顯示44個峰，但撇實際顯示轎多達83個峰，足這是因震為在溶責劑中有器兩種構鍵像,一種為巷優勢一標種為劣啞勢，（恥文獻報浩道在氯李仿中比夜例為3:1）6.質譜(MS)①基本原影理：將氣體嗓分子經轟電子流洞轟擊,使分子會中的電領子成為緞帶正電骨荷的分吹子離子,而后裂抬解成一享系列的濱碎片離華子,再通過潤磁場使胸不同質歉荷比的旁正離子映分離并暗記錄其費相對強缸度,畫出質嘆譜圖。②主要應原用：提供分鞋子離子欣峰、碎口片峰、錢豐度等婚信息，應可以確范定分子打量、分缺子式以互及推測參部分結產構單元面。對含有懂同位素拉元素(如Cl、Br等)的藥物,利用同位厘素簇的豐槐度比，可扯推斷藥物仁中部分元司素的種類吐、數量，兄乃至分子昂式、裂解娛方式等。③技術要求:a.應盡量設叮法獲得化陶合物分子往離子峰。穗當用EI法不能夜出現分冒子離子米峰時，通可試用毯其它電掙離源，例如CI，FAB，FI，FD，ESI等。b.所獲數據哄按規定列辜表，并對濕重要的碎子片離子峰盲的產生進甜行解釋，貢提供離子鍋裂解圖。c.高分辨鉤質譜不窄能反映洋藥品的鎮純度和寬結晶水摔，結晶木溶劑，泛殘留溶圈劑的情齊況。④資料撰寫凍格式儀器測試條猶件數據表裂解圖解析M/Z

相對豐度

碎片離子7.熱分析①基本原襖理：采用程斯序控溫筒下，精狀確記錄悟待測物待質理化眼性質與允溫度的剝關系，改研究其字受熱過歪程中晶搜型轉變凍、熔融孫、升華綁等物理衡變化和傘脫水、掙熱分解窩、氧化述、還原京等化學啟變化。②主要應拆用：差示掃描學量熱法（DSC)訊:測定熔點這、結晶水/結晶溶劑值、考察晶暖型等。熱重法撤（TGA噸):測定結晶袖水、吸附替水和結晶識溶劑、分波解溫度等途。③技術要求慎：a.應說明使暢用儀器型摘號、參數闖設定值，伐包括升溫銳度速度、晉樣品重量侍、溫度范誤圍。b.供試品良與對照丑品應在撈同一儀落器、相啦同條件跑下測定肌。c.差熱分猜析曲線政表達：均縱坐標熱為熱流刑率（dp/d餐t），橫坐匹標為溫度吃（℃）。飼氣體一般烈為氮氣，灰流速為40ml硬/min。熱重分反析曲線卡表達：夜縱坐標小為重量如（mg