液相出峰異常解決方法

制作人：李濤制作日期：2006年9月15日(一)保留時間變化可能的原因:解決方法

1.柱溫變化:柱恒溫

2.等度與梯度間未能充分平衡:至少用10倍柱體積的流動相平衡柱

3.緩沖液容量不夠:用>25mmol/L的緩沖液

4.柱污染:每天沖洗柱

5.柱內(nèi)條件變化:穩(wěn)定進樣條件,調(diào)節(jié)流動相

6.柱快達到壽命:采用保護柱

二)保留時間縮短

可能的原因:解決方法

1.流速增加:檢查泵,重新設(shè)定流速

2.樣品超載:降低樣品量

3.鍵合相流失:流動相PH值保持在3~7.5檢查柱的方向

4.流動相組成變化:防止流動相蒸發(fā)或沉淀

5.溫度增加:柱恒溫

(三)保留時間延長

可能的原因:解決方法

1.流速下降:管路泄漏,更換泵密封圈,排除泵內(nèi)氣泡

2.硅膠柱上活性點變化:用流動相改性劑,如加三乙胺,或采用堿至鈍化柱

3.鍵合相流失:流動相PH值保持在3~7.5檢查柱的方向

4.流動相組成變化:

防止流動相蒸發(fā)或沉淀

5.溫度降低:柱恒溫

(四)出現(xiàn)肩峰或分叉

可能的原因:解決方法

1.樣品體積過大:用流動相配樣,總的樣品體積小于第一峰的15%

2.樣品溶劑過強:采用較弱的樣品溶劑

3.柱塌陷或形成短路通道:更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件

4.柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效:更換燒結(jié)不銹鋼,加在線過濾器,過濾樣品

5.進樣器損壞:更換進樣器轉(zhuǎn)子(五)鬼峰

可能的原因:解決方法

1.進樣閥殘余峰:每次用后用強溶劑清洗閥,改進閥和樣品的清洗

2.樣品中未知物:處理樣品

3.柱未平衡:重新平衡柱,用流動相作樣品溶劑(尤其是離子對色譜)

4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽譜):每天新配,用抗氧化劑

5.水污染(反相):通過變化平衡時間檢查水質(zhì)量，用HPLC級的水(六)基線噪聲

可能的原因:解決方法

1.氣泡(尖銳峰):流動相脫氣,加柱后背壓

2.污染(隨機噪聲):清洗柱,凈化樣品,用HPLC級試劑

3.檢測器燈連續(xù)噪聲:更換氘燈

4.電干擾(偶然噪聲):采用穩(wěn)壓電源,檢查干擾的來源(如水浴等)

5.檢測器中有氣泡:流動相脫氣,加柱后背壓(七)峰拖尾

可能的原因:解決方法

1.柱超載:降低樣品量,增加柱直徑采用較高容量的固定相

2.峰干擾:清潔樣品,調(diào)整流動相

3.硅羥基作用加三乙胺,用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動相PH值,鈍化樣品

4.柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效:更換燒結(jié)不銹鋼,加在線過濾器,過濾樣品

5.柱塌陷或形成短路通道:更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件

6.死體積或柱外體積過大:連接點降至最低,對所有連接點作合適調(diào)整,盡可能采用細(xì)內(nèi)徑的連接管

7.柱效下降:用較低腐蝕條件,更換柱,采用保護柱(八)峰展寬

可能的原因:解決方法

1.進樣體積過大:用流動相配樣,總的樣品體積小于第一峰的15%

2.在進樣閥中造成峰擴展:進樣前后排出氣泡以降低擴散

3.數(shù)據(jù)系統(tǒng)采樣速率太慢:設(shè)定速率應(yīng)是每峰大于10點

4.檢測器時間常數(shù)過大:設(shè)定時間常數(shù)為感興趣第一峰半寬的10%

5.流動相粘度過高:增加柱溫,采用低粘度流動相

6.檢測池體積過大:用小體積池,卸下熱交換器