關于動物布病診斷技術第一頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期日布魯氏菌病檢驗方法：依據標準：GB/T18646-2002

適用范圍本標準規定了動物布魯氏菌病的診斷技術。本規定的虎紅平板凝集試驗、乳牛全乳環狀試驗適用于家畜布病田間篩選試驗和乳牛場布病的監測及診斷泌乳母牛布病的初篩試驗；試管凝集試驗和補體結合試驗適用于診斷羊種、牛種和豬種布病感染的家畜。本標準規定的試管凝集試驗不適用于犬種和綿羊副睪種布病感染家畜的檢疫。第二頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期日虎紅平板凝集試驗第三頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期日材料準備抗原、標準陽性血清、陰性血清由指標單位提供，按說明用。受檢血清應新鮮，無明顯蛋白凝塊，無溶血和無腐敗氣味。準備一塊潔凈玻璃板，畫成若干個4厘米小格或虎紅平板凝集試驗卡片。吸管或移液器，適于滴加0.03ml（即300μl）液體。牙簽或火柴桿供攪拌用。第四頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期日第五頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期日操作方法

將玻璃板上各格標記受檢血清號(或在布病反映卡上操作)，然后加相應血清0.03ml。圖1.在受檢血清旁滴加抗原0.03ml。用牙簽類小棒攪動血清和抗原使之混合。圖2每次試驗應設陰性、陽性血清對照圖1圖2第六頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期日結果判定

判定結果前最好將抗原與血清混合物搖動幾下.如圖3.在陰性、陽性血清對照成立的條件下，方可對被檢血清進行判定。被檢血清在4分鐘內出現肉眼可見的凝集現象者判為陽性（+），無凝集現象，呈均勻粉紅色者判為陰性（—）。圖4.圖5每份被檢血清在規定時間內出現凝集反應者判為陽性，不出現凝集為陰性反應。圖3第七頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期日陽性陰性圖4第八頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期日陰性陽性圖5第九頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期日注意事項：

本抗原適合于大數量田間檢疫和篩選診斷試驗用。本試驗出現陽性反應的動物，需經補體結合試驗或其它輔助試驗方可定性。本抗原使用前應充分搖勻，方可使用。凡本抗原出現污染或搖不散的凝集塊者不得使用。第十頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期日布魯氏菌病乳環試管凝集試驗

第十一頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期日布病全乳環狀抗原，由指標單位提供，按說明用。

乳樣受檢乳樣須為新鮮全乳。采乳樣時應將母畜的乳房用溫水洗凈、擦干，然后將乳液擠入潔凈的器皿中。采集的乳樣夏季時應于當日內檢查；保存于2℃時，7d內仍可適用。需要器具有：水浴鍋、100μl移液器、1000μl移液器、小試管、試管架、移液器槍頭、乳環抗原等。材料準備：第十二頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期日第十三頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期日操作方法

取乳樣1ml，加于滅菌凝集試驗管內。取充分震蕩混合均勻的全乳環狀抗原1滴（約50μl）加入乳樣中充分混勻。置37℃～38℃水浴中60min。加熱后取出試管勿使震蕩，立即進行判定。第十四頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期日結果判定

強陽性反應（+++），乳柱上層乳脂形成明顯紅色環帶，乳柱白色，臨界分明；陽性反應（++），乳脂層的環帶呈紅色，但不顯著，乳柱略帶顏色；弱陽性反映（+）乳脂層的環帶顏色較淺，但比乳柱上顏色略深；疑似反映（±）乳脂層的環帶顏色不明顯，于乳柱分界不清，乳柱不褪色；陰性反映（—）乳柱上層無任何變化，乳柱顏色均勻。第十五頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期日乳環試驗陽性第十六頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期日乳環試驗陽性第十七頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期日乳環試驗陰性，乳汁顏色均勻，未見紅色乳環第十八頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期日布魯氏菌病試管凝集試驗

第十九頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期日材料準備

稀釋液：0.5%石碳酸生理鹽水。檢驗羊血清時用含0.5%石碳酸的10%鹽溶液，如果血清稀釋用含0.5%石碳酸的10%鹽溶液，抗原的稀釋亦用含0.5%石碳酸的10%鹽溶液。1.2抗原、陽性血清、陰性血清由指標單位提供，按說明書使用。1.3凝集試驗管（三分管）、試管架、吸管及溫箱等。3分是英制管道直徑長度的叫法，換算成毫米為9.525mm，這里指內徑約為10mm試管第二十頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期日操作方法

1.按常規方法采血分離血清。2.運送和保存血清樣品時防止凍結和受熱，以免影響凝集價。若3d內不能送檢，按每9ml血清加1ml5%石碳酸生理鹽水防腐，也可冷藏方法運送血清。3.被檢血清的稀釋以羊和豬為例，每份血清用4支凝集試管。3.1第1管標記檢驗編碼后加1.15mL稀釋液。3.2第2～4管各加入0.5mL稀釋液。3.3然后向第1管內加入0.1mL被檢血清，并混合均勻。充分混勻后棄去混合液0.25mL。第二十一頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期日3.4取0.5ml混合液加入第2管，混合均勻。3.5再吸第2管混合液0.5mL至第3管，如此倍比稀釋至第4管，從第4管棄去混勻液0.5mL。3.6稀釋完畢，從第1至第4管的血清稀釋度分別為1:12.5、1:25、1:50和1:100。3.7牛、馬、鹿、駱駝血清稀釋法與上述基本一致，差異是第1管加1.2mL稀釋液和0.05mL被檢血清。第二十二頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期日3.8將0.5mL稀釋好（具體稀釋倍數參照試劑生產廠家的要求，一般是1：10）的抗原加入已稀釋好的各血清管中，并振搖均勻，羊和豬的血清稀釋則依次變為1:25、1:50、1:100和1:200，牛、馬和駱駝的血清稀釋度則依次變為1:50、1:100、1:200和1:400。大規模檢疫時也可只用2個稀釋度，即牛、馬、鹿、駱駝用1：50和1：100，豬、山羊、綿羊和狗用1:25和1:50。第二十三頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期日布魯氏菌病試管凝集反應試驗（羊、豬）

1號管2

號管

3號管

4號管....................

n0.5%石炭酸10%鹽水1.150.50.50.5....................最后一管棄去0.5ml

被檢血清或陽陰性血清對照加0.1ml血清，混勻后棄去0.25ml最后體積為1ml0.50.50.5....................試管中加抗原以前液體量0.50.50.50.50.50.5加抗原液（1：10稀釋好的）

0.50.50.50.50.50.5血清稀釋度1:251:501:1001:200....................充分混勻37℃18-24小時溫育

結果判定

++++++++++--吸0.5ml第二十四頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期日布魯氏菌病試管凝集反應試驗（牛）

12

3

4....................

n0.5%石炭酸鹽水1.20.50.50.5....................最后一管棄去0.5ml

被檢血清或陽陰性血清對照加0.05ml血清，混勻后棄去0.25ml最后體積為1ml0.50.50.5....................試管中加抗原以前液體量0.50.50.50.50.50.5加抗原液（1：10稀釋好的）

0.50.50.50.50.50.5血清稀釋度1:501:1001:2001:400....................充分混勻37℃18-24小時溫育

結果判定

++++++++++--吸0.5ml第二十五頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期日3.9每次試驗均應設陽性血清、陰性血清和抗原對照，a)陰性血清對照：陰性血清的稀釋和加抗原的方法與被檢血清相同。b)陽性血清對照：陽性血清須稀釋到原有滴度，加抗原的方法與被檢血清相同。c)抗原對照：稀釋好的抗原液0.5ml,再加0.5ml稀釋液，觀察抗原是否有自凝現象。3.10將稀釋好各管置37℃～40℃溫箱24小時，取出檢查并記錄結果。第二十六頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期日結果判定

1供判定參照比濁管制備方法略2結果判定2.1凝集成度分為：參照比濁管，按各試管上層液體清亮度判讀⑴＋＋＋＋菌體完全凝集，100%下沉，上層液體100%清亮；⑵＋＋＋菌體幾乎完全凝集，上層液體75%清亮；⑶＋＋菌體凝集顯著，液體50%清亮；⑷＋凝集物有沉淀，液體25%清亮；⑸－凝集物無沉淀，液體均勻混濁。第二十七頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期日2.2牛、馬、鹿、駱駝1：100血清稀釋，豬、山羊、綿羊和狗1：50血清稀釋，出現“＋＋”以上凝集現象時，被檢血清判定為陽性。2.3牛、馬、鹿、駱駝1：50血清稀釋，豬、山羊、綿羊、狗1：25血清稀釋，出現“＋＋”以上凝集現象時，被檢血清判定為可疑反應。可疑反應家畜經3～4周后重檢，如果仍為可疑，該牛、羊判為陽性。豬和馬經重檢仍保持可疑水平，而農場的牲畜沒有臨床癥狀和大批陽性患畜出現，該畜被判為陰性。第二十八頁，共三十三頁，編輯于2023