創(chuàng)作時間：二零二一年六月三十天生物化學實驗陳述之吉白夕凡創(chuàng)作創(chuàng)作時間：二零二一年六月三十天姓名：學號：專業(yè)年級：組別：生物化學與分子生物學實驗教課中心實驗名稱血清卵白醋酸纖維薄膜電泳及其定量實驗日期實驗地點合作者指導老師評分教師署名批他日期一、實驗目的1.1.學習醋酸纖維薄膜電泳的基根源基礎理和把持方法；1.2.認識電泳技術的一般原理；1.3.掌握電泳分別血清卵白質及其定性定量的方法.二、實驗原理2.1.血清中各樣卵白質的等電點分歧,一般都低于pH7.4.它們在pH8.6的緩沖液中均解離帶負電荷,在電場中向正極挪動.由于血清中各樣卵白質分子大年夜小、形狀及所帶的電荷量分歧,在醋酸纖維素薄膜上電泳的速度也分歧.所以能夠將它們分別為清卵創(chuàng)作時間：二零二一年六月三十天創(chuàng)作時間：二零二一年六月三十天白（Albumin)、α1-球卵白、α2-球卵白、β-球卵白、γ-球卵白5條區(qū)帶.2.2.血清中分歧卵白質的等電點、分子量及含量血清卵白質等電點分子量占總卵白的％清卵白4.6469,00057～72α1－球卵白5.06200,0002～5α2－球卵白5.06300,0004～9β－球卵白5.1290,000～150,0006.5～12γ－球卵白6.85～7.3156,000～950,00012～20緩沖液pH=8.6,pI＜pH.血清卵白帶負電荷,在電場中向正極挪動.展望血清卵白電泳區(qū)帶圖血清卵白挨次分為清卵白,球卵白的α1、α2、β、γ五個區(qū)帶2.3.①膜條經過氨基黑10B染色后顯出清楚色帶；②各色帶卵白質含量與染料聯合量基本成正比；③可將各色帶剪開,分別溶于堿性溶液中；④用分光光度法計算各樣卵白質的百分數.創(chuàng)作時間：二零二一年六月三十天創(chuàng)作時間：二零二一年六月三十天三、資料與方法：3.1.實驗資料：3.1.1.實驗試劑：①樣品：健康人血清（新鮮、無溶血）；②巴比妥-巴比妥鈉緩沖液（pH8.6,離子強度0.06mol/L）；③氨基黑10B染色液；④漂洗液；⑤洗脫液：0.4mol/NaOH溶液.3.1.2.實驗器械：①V-1100分光光度計（×1）；②恒溫水浴箱（×1）；③試管（×6）、試管架（×1）；④1000μL加樣槍（×1）、加樣槍架（×1）；⑤醋酸纖維薄膜（2cm*8cm,厚度120μm）；⑥培育皿（×5）；⑦點樣器或載玻片（×1）；⑧平頭鑷子（×2）；⑨剪刀（×1）；⑩電泳槽（×1）；?直流穩(wěn)壓電泳儀（×1）1．準備與點樣：①取2×8cm的膜條；②亞光面距一端1.5cm處取一點樣線；③充足浸透在巴比妥緩沖液中；④拿出膜條,用濾紙吸去剩余的緩沖液；⑤點樣器下端粘上薄層血清；⑥垂直點樣.點樣表示圖：注意：點樣線盡量點得細窄而平均.8cm+—小組表記點樣線m樣品表記表點樣區(qū)(粗面）2cm2.電泳：①擱置膜條（點樣面向下,點樣端置于陰極）；②膜條貼緊濾紙,拉直膜條；③均衡五分鐘；④通電（調理電壓創(chuàng)作時間：二零二一年六月三十天創(chuàng)作時間：二零二一年六月三十天120v/電流,時間：45~60min）；③封閉電源.電泳槽解剖圖：染色、漂洗：①通電完成；②拿出膜條；③浸于染色液（氨基黑10B）中,5min；④拿出膜條,浸于漂洗液；⑤頻頻漂洗2次,直至漂凈；⑥濾紙吸干薄膜.定量（洗脫比色法）（因實驗室等原由,未做）四、結果與議論：圖一染色后的膜條本次實驗獲取的圖譜只好夠清楚的看出清卵白和γ－球卵白的區(qū)帶,其他沒法差別.原由可能以下：①醋酸纖維薄膜質量缺少②薄膜過濕,樣品擴散快速,導致樣品分別不可區(qū)帶.③點樣太少,區(qū)帶顯色不顯然.④電泳時間缺少.⑤薄膜在緩沖液中浸泡的時間缺少.⑤拿出電泳后的薄膜過程中曾不慎將薄膜失意到地上.⑥染色時,由于現場雜亂,可能導致醋酸纖維薄膜不是一張一張放入染色液的,在染色固定前,薄膜與薄膜之間重疊,造成薄膜上還未固定的血清卵白相互粘連.電泳時,點樣端置于電場的正極仍是負極？為何？答：點樣端置于電場的負極.由于人體血清的卵白質會因電槽創(chuàng)作時間：二零二一年六月三十天創(chuàng)作時間：二零二一年六月三十天中溶質呈堿性而帶負電,要成功分別出各種各種卵白質,理應將點樣端置于電場的負極.電泳后各區(qū)帶應顯然分開,如分別不清或不齊整,試剖析其可能存在的原由.答：①醋酸纖維薄膜質量缺少；②薄膜過濕,樣品擴散快速,導致樣品分別不可區(qū)帶；③點樣太少,區(qū)帶顯色不顯然；④染色時,醋酸纖維薄膜不是一張一張放入染色液