專題3植物組織培養(yǎng)課題1：菊花的組織培養(yǎng)當(dāng)前1頁(yè)，總共36頁(yè)。一、基礎(chǔ)知識(shí)1、植物的組織培養(yǎng)（1）細(xì)胞的分化①概念：在個(gè)體發(fā)育中，相同細(xì)胞的后代在形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生理功能上發(fā)生穩(wěn)定性差異的過程當(dāng)前2頁(yè)，總共36頁(yè)。（3）植物組織培養(yǎng)細(xì)胞離體①必要條件：一定的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、激素和其他外界條件②原理:細(xì)胞的全能性從活植物體上切下進(jìn)行培養(yǎng)的那部分組織或器官③相關(guān)概念:外植體：當(dāng)前3頁(yè)，總共36頁(yè)。由高度分化的植物組織或細(xì)胞產(chǎn)生愈傷組織的過程。脫分化產(chǎn)生的愈傷組織繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)，又可以重新分化成根或芽等器官，這個(gè)過程叫再分化。細(xì)胞排列疏松而無(wú)規(guī)則,是高度液泡化的、成無(wú)定形狀態(tài)的薄壁細(xì)胞。愈傷組織：脫分化：再分化：當(dāng)前4頁(yè)，總共36頁(yè)。當(dāng)前5頁(yè)，總共36頁(yè)。當(dāng)前6頁(yè)，總共36頁(yè)。2、影響植物組織培養(yǎng)的因素（1）植物材料的選擇煙草和胡蘿卜的組織培養(yǎng)較為容易枸杞愈傷組織的芽誘導(dǎo)比較難同一植物材料的年齡、保存時(shí)間的長(zhǎng)短會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果菊花的組織培養(yǎng)一般選擇未開花植株的莖上部新萌生的側(cè)枝當(dāng)前7頁(yè)，總共36頁(yè)。當(dāng)前8頁(yè)，總共36頁(yè)。（2）不同的離體組織和細(xì)胞對(duì)營(yíng)養(yǎng)、環(huán)境等條件的要求相對(duì)特殊，需配置不同的培養(yǎng)基MS培養(yǎng)基主要成分包括：A、大量元素:N、P、S、K、Ca、Mg等B、微量元素:B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co等C、有機(jī)物、植物激素當(dāng)前9頁(yè)，總共36頁(yè)。討論：你能說(shuō)出各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的作用嗎？同專題2中微生物培養(yǎng)基的配方相比，MS培養(yǎng)基的配方有哪些明顯的不同？答：微量元素和大量元素提供植物細(xì)胞生活所必需的無(wú)機(jī)鹽；蔗糖提供碳源，同時(shí)能夠維持細(xì)胞的滲透壓；甘氨酸、維生素等物質(zhì)主要是為了滿足離體植物細(xì)胞對(duì)特殊營(yíng)養(yǎng)的需求。微生物培養(yǎng)基以有機(jī)營(yíng)養(yǎng)為主。與微生物的培養(yǎng)不同，MS培養(yǎng)基則需提供大量無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)。

當(dāng)前10頁(yè)，總共36頁(yè)。①常用的植物激素：生長(zhǎng)素、細(xì)胞分裂素和赤霉素生長(zhǎng)素類：2，4－二氯苯氧乙酸（2，4－D）、吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）、吲哚丁酸（IBA）細(xì)胞分裂素類：激動(dòng)素（KT）、6－芐基嘌呤（6－BA）、玉米素（ZT）赤霉素類：赤霉酸（GA3）（3）植物激素的影響當(dāng)前11頁(yè)，總共36頁(yè)。②生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素作用植物中生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素是啟動(dòng)細(xì)胞分裂、脫分化和再分化的關(guān)鍵性激素。在生長(zhǎng)素存在的情況下，細(xì)胞分裂素的作用呈現(xiàn)加強(qiáng)的趨勢(shì)使用順序?qū)嶒?yàn)結(jié)果先使用生長(zhǎng)素，后使用細(xì)胞分裂素有利于細(xì)胞分裂，但不利分化先使用細(xì)胞分裂素后使用生長(zhǎng)素細(xì)胞既分裂也分化同時(shí)使用分化頻率提高當(dāng)前12頁(yè)，總共36頁(yè)。生長(zhǎng)素細(xì)胞分裂素：>有利于根的分化生長(zhǎng)素細(xì)胞分裂素：<有利于芽的分化，抑制根的分化生長(zhǎng)素細(xì)胞分裂素：＝促進(jìn)愈傷組織生長(zhǎng)③生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素同時(shí)使用，用量的比例對(duì)植物細(xì)胞發(fā)育方向的影響（4）pH、溫度、光照pH控制在5.8左右，溫度控制在18－22。C,每日用日光燈照射12h當(dāng)前13頁(yè)，總共36頁(yè)。3、植物組織培養(yǎng)過程:植物體脫分化細(xì)胞分裂素≈生長(zhǎng)素愈傷組織芽根細(xì)胞分裂素>生長(zhǎng)素細(xì)胞分裂素<生長(zhǎng)素再分化植物細(xì)胞培養(yǎng)不需要光需要光離體組織、器官或細(xì)胞當(dāng)前14頁(yè)，總共36頁(yè)。1、培育無(wú)病毒植株2、培養(yǎng)紫草愈傷組織,提取紫草素（治療燙傷和割傷的藥物以及染料和化妝品的原料）4、基因工程中亦需用到植物組織培養(yǎng)的方法4、植物組織培養(yǎng)的應(yīng)用：3、誘導(dǎo)離體的植物組織形成具有生根發(fā)芽能力的胚狀結(jié)構(gòu)，包裹上人造種皮，制成人工種子，可以解決有些作物品種繁殖能力差，結(jié)子困難或發(fā)芽率低等問題當(dāng)前15頁(yè)，總共36頁(yè)。人工種子當(dāng)前16頁(yè)，總共36頁(yè)。二、實(shí)驗(yàn)操作（一）制備MS固體培養(yǎng)基MS培養(yǎng)基包括20多種營(yíng)養(yǎng)成分，實(shí)驗(yàn)室一般使用4℃保存配制好的培養(yǎng)基母液來(lái)制備。1、配置各種母液當(dāng)前17頁(yè)，總共36頁(yè)。①無(wú)機(jī)物中大量元素濃縮10倍，微量元素濃縮100倍，常溫保存。②激素類、維生素類以及用量較小的有機(jī)物一般可按1mg/ml的質(zhì)量濃度單獨(dú)配制成母液。③用母液配制培養(yǎng)基時(shí)，需要根據(jù)各種母液的濃縮倍數(shù)，計(jì)算用量。當(dāng)前18頁(yè)，總共36頁(yè)。2、配置培養(yǎng)基分裝到錐形瓶中，每瓶分裝50ml或100ml。①配制培養(yǎng)基（固體）②調(diào)PH③培養(yǎng)基的分裝由于菊花的莖段的組織培養(yǎng)比較容易，因此不必添加植物激素。當(dāng)前19頁(yè)，總共36頁(yè)。3、滅菌分裝好的培養(yǎng)基連同其他器械一起進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。1、選材：菊花莖段，取生長(zhǎng)旺盛的嫩枝（二）外植體消毒2、消毒①流水沖洗菊花莖段用流水沖洗后可加少許洗衣粉，用軟刷輕輕刷洗，刷洗后在流水下沖洗20min左右。當(dāng)前20頁(yè)，總共36頁(yè)。②酒精處理用無(wú)菌吸水紙吸干外植體表面的水分，放入體積分?jǐn)?shù)為70％的酒精中搖動(dòng)2－3次，持續(xù)6－7s，立即將外植體取出，在無(wú)菌水中清洗。③消毒液處理取出后用無(wú)菌吸水紙吸干外植體表面的水分，放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1％的氯化汞溶液中1－2min，取出后在無(wú)菌水中至少清洗3次，漂凈消毒液。當(dāng)前21頁(yè)，總共36頁(yè)。（三）接種污染的主要來(lái)源是空氣中的細(xì)菌和孢子，接種室消毒是至關(guān)重要的。用70％的酒精噴霧使空氣消毒，酒精或新潔爾滅擦洗工作臺(tái)并用紫外線照射20分鐘。1、接種室消毒2、無(wú)菌操作要求操作要在酒精燈火焰旁完成，每次使用器械后，都需要用火焰灼燒滅菌，接種后立即蓋好瓶蓋。3、材料的切取和接種當(dāng)前22頁(yè)，總共36頁(yè)。當(dāng)前23頁(yè)，總共36頁(yè)。4、接種注意事項(xiàng)①每接種一塊外植體前，鑷子需放入體積分?jǐn)?shù)為75％的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精燈火焰上燒一遍，冷卻后再接種。②外植體在培養(yǎng)基中要分布均勻，放置外植體數(shù)量根據(jù)錐形瓶的大小確定，每瓶接種6－8塊外植體。③插入時(shí)應(yīng)注意方向，不要倒插。當(dāng)前24頁(yè)，總共36頁(yè)。思考：你打算做幾組重復(fù)？你打算設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)嗎？答：每種材料或配方至少要做一組以上的重復(fù)。設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)可以取用一個(gè)經(jīng)過滅菌的裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，與接種操作后的錐形瓶一同培養(yǎng)，用以說(shuō)明培養(yǎng)基制作合格，沒有被雜菌污染。當(dāng)前25頁(yè)，總共36頁(yè)。（四）培養(yǎng)接種后的錐形瓶最好放在無(wú)菌箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)期間應(yīng)定期消毒。培養(yǎng)溫度控制在18-22℃，并且每日用日光燈光照12小時(shí)。當(dāng)前26頁(yè)，總共36頁(yè)。（五）移栽移栽生根的菊花試管苗之前，應(yīng)先打開培養(yǎng)瓶的封口膜，讓試管苗在培養(yǎng)間生長(zhǎng)幾日。1、打開封口膜2、清洗轉(zhuǎn)移用流水清洗根部的培養(yǎng)基，將幼苗移植到消過毒的蛭石或珍珠巖等環(huán)境下生活一段時(shí)間。當(dāng)前27頁(yè)，總共36頁(yè)。（六）栽培3、移栽珍珠巖：固體基質(zhì)型，含水量高、蓄水性強(qiáng)、透性好，適合栽培。幼苗長(zhǎng)壯后，移栽到土壤中。幼苗移栽后，每天觀察并記錄幼苗的生長(zhǎng)情況，適時(shí)澆水、施肥，直至開花。當(dāng)前28頁(yè)，總共36頁(yè)。當(dāng)前29頁(yè)，總共36頁(yè)。三、課題延伸1、一般來(lái)說(shuō)，容易進(jìn)行無(wú)性繁殖的植物，也容易進(jìn)行組織培養(yǎng)。2、實(shí)例：蘆薈、豆瓣綠、秋海棠、月季當(dāng)前30頁(yè)，總共36頁(yè)。當(dāng)前31頁(yè)，總共36頁(yè)。基礎(chǔ)知識(shí)（一）植物組織培養(yǎng)的基本過程植物的組織培養(yǎng)技術(shù)當(dāng)前32頁(yè)，總共36頁(yè)。不同的植物組織同一植物的不同材料營(yíng)養(yǎng)、環(huán)境條件植物激素（二）影響植物組織培養(yǎng)的因素當(dāng)前33頁(yè)，總共36頁(yè)。制備MS固體培養(yǎng)基

1、配制母液2、配制培養(yǎng)基3、滅菌外植體消毒接種培養(yǎng)移栽栽培實(shí)驗(yàn)操作當(dāng)前34頁(yè)，總共36頁(yè)。結(jié)果分析與評(píng)價(jià)（一）對(duì)接種操作中污染情況的分析（二）是否完成了對(duì)植物組織的脫分化和再分化（三）是否進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)、對(duì)照與記錄（四）生根苗的移栽是否合格當(dāng)前35頁(yè)，總共36頁(yè)。課后習(xí)題：1、F2代紫色甜玉米的基因型組成可能為Aasusu或AAsusu。如果運(yùn)用常規(guī)育種方法，將F2代中的紫色甜玉米分別自交，分別收獲紫色甜玉米種子后再