Ａ.粗糙脈胞菌次序四分子分析（雜交）

Ｂ.植物染色體組型分析遺傳學(xué)實驗專業(yè)知識專家講座第1頁Ａ.粗糙脈胞菌次序四分子分析（雜交）試驗?zāi)繕耍?.了解粗糙脈胞菌生活周期及特征；2.學(xué)習(xí)粗糙脈胞菌培養(yǎng)方法和雜交技術(shù)；3.學(xué)習(xí)次序四分子遺傳學(xué)分析方法，進行相關(guān)基因與著絲點距離計算和作圖。（第八周）遺傳學(xué)實驗專業(yè)知識專家講座第2頁粗糙脈胞菌（粗糙鏈孢霉）真菌門、子囊菌綱、球殼目、脈孢菌屬菌絲為單倍體n=7無性孢子——分生孢子有性孢子——子囊孢子遺傳學(xué)實驗專業(yè)知識專家講座第3頁粗糙脈胞菌用于遺傳分析優(yōu)點：1.體積小，易增殖，易培養(yǎng)，雜交程序簡單，一次雜交可產(chǎn)生大量后代；2.能夠經(jīng)過X射線、紫外線照射或一些化學(xué)藥品處理方法誘發(fā)產(chǎn)生各種突變體；3.能進行有性生殖，有性生殖生活史短，染色體結(jié)構(gòu)、功效類似于高等動植物；4.子囊孢子是單倍體，沒有顯、隱性復(fù)雜關(guān)系，表型直接反應(yīng)基因型；5.有性生殖產(chǎn)生次序排列子囊孢子便于進行四分子分析。遺傳學(xué)實驗專業(yè)知識專家講座第4頁遺傳學(xué)實驗專業(yè)知識專家講座第5頁粗糙脈胞霉遺傳(n=7)

有性生殖過程：

+、-接合型菌絲接合受精→在子囊果子囊菌絲細胞中形成二倍體合子(2n)→減數(shù)分裂→形成4個單倍子囊孢子(四分孢子)→有絲分裂→形成8個子囊孢子、按嚴格次序直線排列在子囊內(nèi)。脈胞菌減數(shù)分裂4個產(chǎn)物保留在一起，稱為四分子→（子囊外形狹窄，以致分裂紡錘體不能重合，只能縱立于長軸中，全部分裂后核——8個子囊孢子都從上到下次序排列）次序四分子。四分子分析：對四分孢子進行遺傳分析，經(jīng)過四分子觀察，可直接觀察其分離百分比，檢驗其有沒有連鎖。遺傳學(xué)實驗專業(yè)知識專家講座第6頁試驗材料1．粗糙鏈孢霉野生型菌株，Lys+(分生孢子粉紅色）；2．粗糙鏈孢霉賴氨酸缺點型菌株，Lys-(分生孢子白色）。遺傳學(xué)實驗專業(yè)知識專家講座第7頁試驗步驟1．菌種活化：為使菌種生長得更加好，先要進行菌種活化。把野生型和賴氨酸缺點型菌種從冰箱中取出，分別接在兩支完全培養(yǎng)基試斜面上，28℃溫箱培養(yǎng)5天左右。培養(yǎng)到菌絲上部有分生孢子產(chǎn)生。遺傳學(xué)實驗專業(yè)知識專家講座第8頁2．雜交：（１）同時在雜交培養(yǎng)基上接種兩親本菌株分生孢子或菌絲（先接缺點型，后接野生型），然后在培養(yǎng)基上放入一滅菌折疊濾紙，25℃溫箱進行混合培養(yǎng)。注意要貼上標簽，寫明親本菌株、雜交日期、自己名字。（記號筆寫在試管上）在雜交后5-7天就能看到許多棕色原子囊果出現(xiàn)，以后原子囊果變大變黑成子囊果，在約21天左右，就可在顯微鏡下觀察。試驗步驟遺傳學(xué)實驗專業(yè)知識專家講座第9頁接種環(huán)制作酒精燈燈芯制作無菌操作技術(shù)練習(xí)遺傳學(xué)實驗專業(yè)知識專家講座第10頁試驗預(yù)期結(jié)果：試驗用賴氨酸缺點型（Lys-）與野生型（Lys+）雜交，得到子囊孢子分離為4個黑色（+）和4個灰色（-）。黑色孢子是野生型，而賴氨酸缺點型孢子成熟遲，在野生型孢子成熟變黑時，還未變黑，而呈淺灰色。依據(jù)黑色孢子和灰色孢子在子囊中排列次序，可知合子在減數(shù)分裂時，基因和著絲粒之間發(fā)生交換情況。遺傳學(xué)實驗專業(yè)知識專家講座第11頁注意事項：觀察子囊孢子時，要掌握適當(dāng)時期。假如時間偏早，雖有子囊，但孢子均未成熟，不論野生型還是缺點型都顯灰色；過遲都成熟了，全為黑色，都不能分辨子囊類型；最好在子囊果發(fā)育至成熟大小，子囊殼開始變黑時，每日取幾個子囊果壓片觀察，到適當(dāng)時期置于4~5℃冰箱保留。遺傳學(xué)實驗專業(yè)知識專家講座第12頁從一個脈孢霉子囊殼來子囊照片一對等位基因（野生型和突變型）經(jīng)過減數(shù)分裂所產(chǎn)生子囊孢子分離和有序排列方式遺傳學(xué)實驗專業(yè)知識專家講座第13頁Ｂ.植物染色體組型分析試驗?zāi)繕耍?.了解染色體組型分析原理及各項參數(shù)意義；2.學(xué)習(xí)染色體組型分析方法。遺傳學(xué)實驗專業(yè)知識專家講座第14頁試驗原理：染色體組型分析（核型分析）就是分析細胞中染色體數(shù)目、大小、形態(tài)、著絲點位置以及次縊痕、隨體有沒有等形態(tài)特征，并用表格、圖示將這些特點展示出來。染色體形態(tài)以有絲分裂中期最為顯著，所以普通都分析該時期染色體。另一類是分析減數(shù)分裂（粗線期）時期染色體數(shù)目和形態(tài)，以得到染色體組型。

遺傳學(xué)實驗專業(yè)知識專家講座第15頁核型分析通常包含兩方面內(nèi)容：A.確定一物種染色體數(shù)目B.辨析每條染色體特征遺傳學(xué)實驗專業(yè)知識專家講座第16頁染色體組型分析慣用指標：1.染色體數(shù)目：普通以體細胞染色體數(shù)目為準，最少統(tǒng)計5~10個個體、30個以上細胞染色體數(shù)目為宜，在個體出現(xiàn)不一樣數(shù)目時，則應(yīng)該如實統(tǒng)計其變異幅度和各種數(shù)目標細胞或百分比，而以眾數(shù)大于85%者為該種類染色體數(shù)目。A.確定一物種染色體數(shù)目遺傳學(xué)實驗專業(yè)知識專家講座第17頁染色體排列標準：①染色體大小（即長度）②著絲粒位置③特殊標識，如隨體有沒有B.辨析每條染色體特征遺傳學(xué)實驗專業(yè)知識專家講座第18頁用堿性染料對染色體進行染色，當(dāng)兩個臂被染色時，著絲點不著色，在光鏡下，好象染色體在此區(qū)域是中止。于是又稱著絲粒區(qū)域為主縊痕（初級縊痕）（primaryconstriction）。B-染色體次縊痕隨體B-染色體遺傳學(xué)實驗專業(yè)知識專家講座第19頁染色體組型分析慣用指標：2.染色體絕對長度：以微米表示，可在顯微鏡下經(jīng)過測微尺測量，也可在放大照片上進行，然后按下面公式計算：放大染色體長度（mm）放大倍數(shù)×1000絕對長度（μm）=絕對長度往往不穩(wěn)定！遺傳學(xué)實驗專業(yè)知識專家講座第20頁染色體組型分析慣用指標：3.相對長度：以百分數(shù)表示，即：相對長度（%）=待測單個染色體長度整套染色體組總長度×100％整套染色體組總長度=該細胞單倍體全部染色體長度（包含性染色體）之和eg:大麥2n=14,n=7遺傳學(xué)實驗專業(yè)知識專家講座第21頁染色體組型分析慣用指標：4.染色體長度比：指核型中最長染色體與最短染色體比值，即：染色體長度比=最長染色體最短染色體能夠簡寫為Lt/Ls,這一數(shù)值在核型分析中是衡量核型不對稱程度主要指標之一。遺傳學(xué)實驗專業(yè)知識專家講座第22頁染色體組型分析慣用指標：5.臂比值：指長臂和短臂長度（分別量到著絲點中部）比值，即：臂比值=長臂短臂（準確到0.01）遺傳學(xué)實驗專業(yè)知識專家講座第23頁染色體組型分析慣用指標：6.著絲點位置：依據(jù)臂比值可將染色體分成以下幾個類型：臂比值著絲點簡寫1.00正中著絲點M1.01~1.70中部著絲點區(qū)m1.71~3.00近中部著絲點區(qū)sm3.01~7.00近端部著絲點區(qū)st7.00以上端部著絲點區(qū)t∞端部著絲點T臂比值與著絲點位置關(guān)系遺傳學(xué)實驗專業(yè)知識專家講座第24頁遺傳學(xué)實驗專業(yè)知識專家講座第25頁染色體組型分析慣用指標：7.次縊痕及隨體次縊痕有沒有及位置，隨體有沒有、形狀和大小都是主要形態(tài)指標，也應(yīng)仔細觀察記載。帶隨體染色體用SAT或星號“*”標識。遺傳學(xué)實驗專業(yè)知識專家講座第26頁試驗步驟：1.將洗印好顯微攝影照片上每條染色體進行隨機編號。2.測量每一條染色體長臂、短臂長度（mm）。隨體長度可計入染色體全長，需標注帶隨體染色體編號。3.計算每一條染色體長度（放大照片上長度：mm）及臂比值。4.依據(jù)染色體長度和臂比值進行同源染色體配對。隨體是一個主要參數(shù)，正常細胞中某對同源染色體要么都帶隨體，要么都不帶隨體。遺傳學(xué)實驗專業(yè)知識專家講座第27頁試驗步驟：5.計算同源染色體中兩條染色體長、短臂及總長平均值，并把換算成相對長度，填表(P82)。6.依據(jù)長、短臂長度計算臂比值，并依據(jù)臂比值確定該染色體類型。7.依據(jù)照片上編號及同源染色體配對情況，剪下染色體，按從長到短次序排列，一對一對地短臂向上、長臂向下，各染色體著絲點在一條直線上，貼成一完整染色體組型圖。（假如染色體全長相等，在按短臂長度次序排列，長者在前。）性染色體或Ｂ染色體一律排列在最終。遺傳學(xué)實驗專業(yè)知識專家講座第28頁染色體核型分析系統(tǒng)系統(tǒng)配置：◆三目生物顯微鏡

◆CCD攝像機

◆高性能計算機

◆圖文匯報診療軟件

◆分體式控制臺（選配）遺傳學(xué)實驗專業(yè)知識專家講座第29頁遺傳學(xué)實驗專業(yè)知識專家講座第30頁遺傳學(xué)實驗專業(yè)知識專家講座第31頁試驗結(jié)果及思索題1.完成試驗所提供植物染色體組型分析圖(大麥有絲分裂中期染色體)，包含染色體組型圖和數(shù)據(jù)表。2.為何要用相對長度來表示染色體長度？核型分析意義?3.雜交試驗注意事項?遺傳學(xué)實驗專業(yè)知識專家講座第32頁下周試驗：果蠅形態(tài)、生活周期及其喂養(yǎng)遺傳學(xué)實驗專業(yè)知識專家講座第33頁染色體組型反應(yīng)了物種染色體水平整體特征，研究和比較物種染色體組型能夠確定物種本身遺傳學(xué)特征，有利于對物種親緣關(guān)系進行判斷和分析，揭示遺傳進化過程和機制。組型分析也是分析生物染色體數(shù)目和結(jié)構(gòu)變異基本伎倆，在染色體識別與判定中也起著主要作用，植物細胞分類學(xué)、細胞地理學(xué)、遺傳育種學(xué)等都是以組型分析為基礎(chǔ)。遺傳學(xué)實驗專業(yè)知識專家講座第34頁安徽省立醫(yī)院發(fā)覺7例染色體異常核型被確認為世界首報染色體異常核型，將被錄入新版《中國人類染色體異常核型數(shù)據(jù)庫》。新華網(wǎng)長春年8月14日電，經(jīng)中國醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)國家重點試驗室確認，長春市一男性第3號和第13號染色體異常核型為全球首次發(fā)覺，將被錄入《中國人類染色體異常核型數(shù)據(jù)庫》，國際上已決定把這個病例作為攻關(guān)課題進行研究。遺傳學(xué)實驗專業(yè)知識專家講座第35頁他第3號和第13號染色體是經(jīng)過斷裂、重接而成兩個新染色體，在醫(yī)學(xué)上被稱為染色體平衡易位，屬于人類異常染色體核型。正是這對新染色體使他形成了異常精子，造成妻子自然流產(chǎn)。即使該男性為染色體平衡易位攜帶者，沒有基因丟失，外貌、智力都是正常，發(fā)育上也沒有任何缺點，不過在正常受孕條件下生育正常后代幾率僅為1／18，后代染色體異常幾率為1／18，其