化妝品微生物五項檢測第1頁/共29頁菌落總數（Aerobicbacterialcount）：化妝品檢樣經過處理，在一定條件下培養后（如培養基成分、培養溫度、培養時間、pH值、需氧性質等），1g（1mL）檢樣中所含菌落的總數。所得結果只包括一群本方法規定的條件下生長的嗜中溫的需氧性和兼性厭氧菌落總數。菌落總數檢驗菌落總數的測定便于判明樣品被細菌污染的程度，是對樣品進行衛生學總評價的綜合依據。第2頁/共29頁48小時出結果（30-300）：測試流程數據處理混合平板的制備細菌的培養檢查結果、觀察與計數供試液的制備書寫檢驗記錄單第3頁/共29頁為便于區別化妝品中的顆粒與菌落，可在每100mL卵磷脂吐溫80營養瓊脂中加入1mL

0.5％的TTC溶液，如有細菌存在，培養后菌落呈紅色，而化妝品的顆粒顏色無變化。TTC亦不可多加會抑制菌落生長第4頁/共29頁推薦了解：人員培訓能力掌握的檢驗重要指標。有條件可做視具體樣品測試結果。在膏霜類化妝品中,微生物都是吸附或附著于顆粒狀的原料中,檢測時不易洗脫下來,因此,需要驗證檢測方法的有效性。接種陽性菌計算回收率第5頁/共29頁未檢出2天，檢出3-4天耐熱大腸菌群Thermotolerantcoliformbacteria系一群需氧及兼性厭氧革蘭氏陰性無芽胞桿菌，在44.5℃培養24h—48h能發酵乳糖產酸并產氣。該菌主要來自人和溫血動物糞便，可作為糞便污染指標來評價化妝品的衛生質量,推斷化妝品中有否污染腸道致病菌的可能。耐熱大腸菌群

檢驗操作流程第6頁/共29頁產酸：黃色產氣：氣泡產酸產氣書寫檢驗記錄單不產酸不產氣增菌培養供試液的制備配培養基和稀釋液檢查結果判斷44.5±0.5℃24-48h分離培養蛋白胨水培養最終結果判斷44.5±0.5℃24±2h靛基質特征菌落36±1℃18~24h雙倍膽鹽乳糖EMB瓊脂液面玫瑰紅色紫黑色★糞大腸菌群檢查流程圖鏡檢第7頁/共29頁結果報告根據發酵乳糖產酸產氣，平板上有典型菌落，并經證實為革蘭氏陰性短桿菌，靛基質試驗陽性，則可報告被檢樣品中檢出耐熱大腸菌群。第8頁/共29頁未檢出2天，檢出4天銅綠假單胞菌（Pseudomonasaeruginosa）屬于假單胞菌屬，為革蘭氏陰性桿菌，氧化酶陽性，能產生綠膿菌素。此外還能液化明膠，還原硝酸鹽為亞硝酸鹽，在42℃±1℃條件下能生長。銅綠假單胞菌

檢驗操作流程該菌對人有致病力，可使傷處化膿，引起敗血癥等。在自然界中分布甚廣，空氣、水、土壤第9頁/共29頁最終結果判斷增菌培養供試液的制備書寫檢驗記錄單分離純化無菌落或無特征菌落配培養基和稀釋液革蘭染色、鏡檢→氧化酶試驗綠膿菌素試驗生化試驗硝酸鹽還原試驗

42℃生長試驗明膠液化試驗★銅綠假單胞菌檢查流程圖SCDLP培養基十六烷三甲基溴化銨瓊脂36±1℃18~24h36±1℃18~24h特征菌落灰白色、扁平、周圍有水溶性藍綠色素鏡檢第10頁/共29頁十六烷三甲基溴化銨平板SCDLP培養基黃綠色菌膜灰白色濕潤氧化酶試驗粉紅/紫紅色第11頁/共29頁綠膿菌素試驗鹽酸層呈粉紫色氯仿層呈藍綠色硝酸鹽還原產氣試驗N2明膠液化試驗明膠培養基（高層）明膠液化第12頁/共29頁被檢樣品經增菌分離培養后，經證實為革蘭氏陰性桿菌，氧化酶及綠膿菌素試驗皆為陽性者，即可報告被檢樣品中檢出銅綠假單胞菌；如綠膿菌素試驗陰性而液化明膠、硝酸鹽還原產氣和42℃生長試驗三者皆為陽性時，仍可報告被檢樣品中檢出銅綠假單胞菌。結果報告第13頁/共29頁未檢出2天，檢出3天金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）為革蘭氏陽性球菌，呈葡萄狀排列，無芽胞，無莢膜，能分解甘露醇，血漿凝固酶陽性。金黃色葡萄球菌

檢驗操作流程該菌是葡萄球菌中對人類致病力最強的一種，能引起人體局部化膿性病灶，嚴重時可導致敗血癥。第14頁/共29頁革蘭染色、鏡檢→生化試驗:血漿凝固酶試驗甘露醇發酵試驗最終結果判斷增菌培養供試品的處理書寫檢驗記錄單分離純化無菌落或無特征菌落配培養基和稀釋液36±1℃36±1℃SCDLP培養基或7.5%NaCl肉湯24±2hBairdParker’s或血瓊脂24~48h特征菌落金黃色葡萄球菌檢查流程圖鏡檢耐鹽分第15頁/共29頁BairdParker’s平板灰/黑色血漿凝固酶試驗血漿凝塊液態血漿甘露醇高鹽瓊脂第16頁/共29頁凡在上述選擇平板上有可疑菌落生長，經染色鏡檢，證明為革蘭氏陽性葡萄球菌，并能發酵甘露醇產酸，血漿凝固酶試驗陽性者，可報告被檢樣品檢出金黃色葡萄球菌。結果報告第17頁/共29頁霉菌和酵母菌數測定（Determinationofmoldsandyeastcount）化妝品檢樣在一定條件下培養后，1g或1mL化妝品中所污染的活的霉菌和酵母菌數量，以判明化妝品被霉菌和酵母菌污染程度及其一般衛生狀況。本方法根據霉菌和酵母菌特有的形態和培養特性，在虎紅培養基上，置28℃±2℃培養5d，計算所生長的霉菌和酵母菌數。（5-50）霉菌和酵母菌

檢驗操作流程第18頁/共29頁革蘭氏染色操作流程第19頁/共29頁設備：恒溫培養設備高壓滅菌器（驗證）超凈工作臺（生物安全柜）均質器(旋渦混合器)天平（0.1g）顯微鏡（可要可不要無硬性要求）保證檢驗結果正確第20頁/共29頁常規潔凈工作臺設置第21頁/共29頁目前大部分微生物實驗室布局第22頁/共29頁人員操作方面：無菌操作，避免污染；一定專業技術或工作經驗（招聘與外部審核時）相互協作；測試結果的證明。第23頁/共29頁日常維護：設備的計量與保證；超凈臺及時清潔與殺菌（操作前后半小時）；檢驗后材料的及時處理；環境衛生（沉降菌的檢測每周）。第24頁/共29頁油性樣品如何處理稀釋液生理鹽水-極性溶劑、液體石蠟-非極性溶劑、吐溫80-非離子型表面活性劑，分子一端是親水基團，一端是親油基團，常用作增溶劑和油/水乳化劑。決定了加入的順序。問題2第25頁/共29頁微生物許可檢驗項目問題3檢驗項目非特殊用途化妝品特殊用途化妝品育發類染發類燙發類脫毛類美乳類健美類除臭類祛斑類防曬類菌落總數○○

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○○耐熱大腸菌群○○

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○○金黃色葡萄球菌○○

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○○銅綠假單胞菌○○

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○○霉菌和酵母菌○○

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○○第26頁/共29頁④一個樣品包裝內有兩個以上獨立小包裝或分隔（如粉餅、眼影、腮紅等