獸醫流行病學劉血清流行病學第1頁/共35頁第十一章血清流行病學

用血清學（免疫學）的方法進行流行病學調查分析，以闡明疾病在群體中的分布和原因，檢驗疾病防制措施的效果。第2頁/共35頁血清可測量物質及疾病相關指標：礦物質、微量元素、酶和激素、特異抗體

第一節概述第3頁/共35頁二、用途

1、闡明疾病的分布規律特異抗體可以提供畜群是否暴露于傳染病病原體的證據。以隱性感染為主的疾病，除了進行發病分布研究外，同時檢測相應抗體或抗原進行分析研究。第4頁/共35頁2、尋找與病因相關的因素追溯診斷：收集發病早期和康復期雙份血清，抗體效價升高4倍以上。在肝癌病人血清中HBsAg和抗HBe的檢出率明顯高于對照組。血脂、膽固醇與冠心病的關系。高水平免疫球蛋白與慢性病的關系。

第5頁/共35頁3、評價防制措施的效果評價生物制品接種效果。4、疾病監測和疫情預報了解動物群體對某病易感和免疫水平的動態變化。群體中易感動物比例越大，流行強度越大。第6頁/共35頁三、方法（一）調查方法

1、短期調查確定是否存在疾病。

2、長期調查監測抗體水平和疾病流行的動態變化。第7頁/共35頁（二）檢測方法凝集試驗(HA)、血球凝集抑制試驗(HI)、葡萄球菌A蛋白(SPA)協同凝集試驗、間接血球凝集試驗(IHA)、瓊脂擴散沉淀試驗(AGP)、補體結合試驗(CF)、免疫熒光試驗(IF)、酶聯免疫吸附試驗(ELISA)、放射免疫試驗(RIA)第8頁/共35頁（三）分析方法篩檢（screening）試驗：快速簡便、早期發現可能有病動物。篩檢出的可疑或陽性病畜均需進一步確診。

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第二節血清抗體的測定一、抗體量的表示法滴度—產生試驗反應的血清最高稀釋度（陽性、陰性、陽轉）滴度的對數轉換（適合于正態分布檢驗）

對數平均滴度幾何平均滴度第10頁/共35頁第11頁/共35頁二、抗體測定單系列稀釋測定每一稀釋度測一次，抗體滴度是區間滴度

多系列稀釋測定每個稀釋度測定幾次，50%終點測定抗體滴度：50%試驗組成員產生特定后果的血清稀釋度，用半數有效量(ED50)表示第12頁/共35頁血清稀釋度Log10稀釋度細胞病變單層數完整單層數陽性比例（P)1-P1/10.0051.000.001/2-0.3051.000.001/4-0.6051.000.001/8-0.9140.800.201/16-1.2140.800.201/32-1.5320.400.601/64-1.8410.200.801/128-2.1500.001.00血清抗體50%終點測定第13頁/共35頁Spearman-K?rber法log10ED50=L-d(Σp-0.5)L=顯示全部陽性結果的最高稀釋度對數d=稀釋系數的對數∑p=從顯示全部陽性結果的最高稀釋度開始的各稀釋度試驗陽性比例總和

L=-0.6d=log102=0.3Σp=1.00+0.80+0.80+0.40+0.20=3.20ED50=1/25.1即0.1ml血清含有25.1個ED50，則1ml血清含有251個ED50。第14頁/共35頁

標準誤（e.s.e）

e.s.e(log10ED50)=n為每一組中的試驗重復數。

log10e.s.e

=0.3 =0.13因此，滴度可以表示為每0.1ml含101.4±0.13ED50，或每毫升含102.4±0.13ED50。

第15頁/共35頁三、畜群中血清抗體水平的估計和比較1、檢測抗體的存在對畜群作抽樣調查2、抗體水平的比較不同畜群的比較根據抗體存在與否比較兩個畜群，可用卡方檢驗比較兩群體中抗體的頻率分布，可用參數檢驗同一畜群不同估計值的比較第16頁/共35頁第三節血清學試驗的解釋一、精密性不同的流行菌株、毒株存在抗原差異。隨著單克隆抗體的出現，檢測病原體細微抗原差異的能力已大大提高，有助于感染起源和流行范圍的確定。第17頁/共35頁二、準確性陽性結果

真陽性—確定遭受該病病原體的感染

交叉反應，同一群病原體或相關病原體之間的交叉反應假陽性雙重感染，而其中只有一種是臨床發病的病原體

非特異性反應，非特異抑制劑、非特異凝集素技術誤差第18頁/共35頁陰性結果真陰性—確定未遭受該病病原體的感染

標本采集時間不當試驗選用不當假陰性抗生素誘導的抗體產生受到抑制不完全或封閉抗體存在自然或誘發的免疫耐受技術誤差

第19頁/共35頁三、敏感性和特異性敏感性：實際感染而按診斷標準被判定為感染的百分率。特異性：實際未感染而按診斷標準被判定為未感染的百分率。第20頁/共35頁敏感性和特異性的關系第21頁/共35頁檢測抗原和抗體的試驗的相對敏感性方法近似敏感性(每dl)用雙縮或折射儀測定血清總蛋白質100mg血清蛋白質電泳(區帶電泳)100mg分析性超速離心100mg免疫電泳5～10mg免疫結合5～10mg單向輻射擴散<1～2mg瓊脂雙擴散<1mg電泳免疫擴散(火箭電泳)<0.5mg一維雙電泳免疫擴散(對流免疫電泳)<0.1mg濁度計0.1mg補體結合試驗1μg凝集試驗1μg酶免疫測定（ELISA）<1μg定量免疫熒光<1pg放射免疫測定<1pg第22頁/共35頁

平行（并聯）試驗當漏掉一個病例后果嚴重或再進行篩檢比較困難時，要盡量減少漏診率。試驗1試驗2判斷結果++++-+-++---幾個指標中有一個陽性即診斷為陽性。靈敏度提高，但特異度降低。第23頁/共35頁例如流產奶牛布魯氏菌病檢查陰道拭子細菌培養、血清的虎紅平板試驗和乳汁環狀試驗，任一試驗陽性就認為感染。在發生疫情要求迅速作出判定時，常常采用平行試驗。

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系列（串聯）試驗當誤診會造成嚴重后果時，幾個指標均為陽性才能診斷。提高了特異度，可以減少誤診率，但卻增加了漏診率。試驗1試驗2判斷結果++++---+----第25頁/共35頁疾病根除計劃常采用系列試驗從群體中淘汰陽性動物。最初篩檢試驗是有病的動物，再經進一步試驗加以證實，從而排除假陽性。第26頁/共35頁四、預測值PT=真陽性+假陽性=P×敏感性+（1-P）×（1-特異性）

假定P=0.01，敏感性=0.99，特異性=0.99則：PT=0.01×0.99+(1-0.01)×(1-0.99)=0.02

實際患病率是0.01，而估計的患病率是0.02。第27頁/共35頁如果知道試驗的敏感性和特異性，則可以通過下式得到真正患病率P的正確估計值：

P=第28頁/共35頁陽性預測值—試驗陽性動物實際也是陽性的概率陰性預測值—試驗陰性動物實際也是陰性的概率陽性預測值=a/a+b=

陰性預測值=d/c+d=第29頁/共35頁陽性預測值低—試驗陽性，但難以作出有病診斷；陰性預測值低—試驗陰性，但難以排除無病。一種篩檢方法應用于不同患病率的畜群，陽性（或陰性）結果所表示的意義不同。判斷篩檢方法的診斷價值，需要參考畜群的患病率。預測值的意義第30頁/共35頁不同患病率水平牛群陽性結果預測值

（布魯氏菌病試管凝集試驗敏感性62%