油菜苗期菌核病抗性鑒定第一頁，共二十五頁，2022年，8月28日實驗室苗期菌絲接種鑒定法方法簡單易行，鑒定周期短，不受自然環境影響，適于對大量材料的篩選。另據初步研究，苗期菌絲接種鑒定表現抗菌材料，在花期仍表現抗病。在本實驗中只學習和掌握苗期菌絲塊接種鑒定法。二、內容說明第二頁，共二十五頁，2022年，8月28日（一）用品油菜不同品種種子（包括抗病品種如中油821，感病品種如84039的種子）、生長室、平底塑料盤（60×30×4cm）、園土、綠高一號液（北京北農綠高科技發展有限公司出產）、馬鈴薯、紗布、葡萄糖、瓊脂膠、試管、三角瓶、解剖刀、接種環等。三、所需用品和操作方法

第三頁，共二十五頁，2022年，8月28日（1）土壤準備：取較肥沃的菜園土，清除石塊，曬干敲碎，然后裝入塑料盤中（需裝滿）。（二）、主要作法－－1.供試苗的種植第四頁，共二十五頁，2022年，8月28日（2）油菜播種：保證出苗后能保留生長一致苗30株。每10個品種設對照。（二）、主要作法－－1.供試苗的種植第五頁，共二十五頁，2022年，8月28日（3）土壤消毒：播種后用2000—3000倍的綠亨一號溶液澆透土壤進行消毒。（二）、主要作法－－1.供試苗的種植第六頁，共二十五頁，2022年，8月28日（4）播后管理：播后將塑料盤放于生長室內，在出苗期間，室內溫度控制在20℃以下，在出真葉后，控制20—24℃左右，每2天噴水一次。（二）、主要作法－－1.供試苗的種植第七頁，共二十五頁，2022年，8月28日生長室第八頁，共二十五頁，2022年，8月28日生長室外管理第九頁，共二十五頁，2022年，8月28日（1）PDA培養基的制作：取馬鈴薯200g，洗凈去皮切碎，加水1000mL，煮沸30min，用紗布過濾，將濾液加水補足到1000mL，加葡萄糖10—20g和瓊脂膠17—20g，加熱溶化，用紗布過濾。然后依需要，分別裝入試管（用作貯藏菌種），或裝入培養皿（用作培養菌絲接種菌），然后在高壓滅菌鍋內進行滅菌。（二）、主要作法－－2.菌絲的培養第十頁，共二十五頁，2022年，8月28日（2）菌絲的培養：取貯存平板菌核病的菌絲，在無菌條件下移下裝有PDA培養基的培養皿上，每皿一小塊，放在培養皿中間，在22—25℃下培養3—4天，以菌絲長滿，而又沒有結核為宜。（二）、主要作法－－2.菌絲的培養第十一頁，共二十五頁，2022年，8月28日（1）接種：待油菜苗3—5片真葉時，將菌絲平板以無菌解剖刀切成0.5×0.5cm小塊，將有菌絲的一面貼于葉片上（注意不要貼在葉脈上），每株接種1片葉，每葉接種1小塊。

見下圖

（二）、主要作法－－3.菌絲塊的接種與管理第十二頁，共二十五頁，2022年，8月28日第十三頁，共二十五頁，2022年，8月28日（2）管理：接種后在23—26℃溫度和85%—95%相對濕度下培養5—7天后即可調查（注意接種后前2天相對濕度應保持95%以上，以確保發病，后3—5天保持85%左右，使接種菌不致于腐爛）。（二）、主要作法－－3.菌絲塊的接種與管理第十四頁，共二十五頁，2022年，8月28日第十五頁，共二十五頁，2022年，8月28日第十六頁，共二十五頁，2022年，8月28日第十七頁，共二十五頁，2022年，8月28日第十八頁，共二十五頁，2022年，8月28日第十九頁，共二十五頁，2022年，8月28日

在試驗中當感病品種的發病率超過40%以上方為有效鑒定。一般將病害等級分為5個等級，即：0級：無病。1級：病斑面積占接種葉面積10%以下。2級：病斑面積占接種葉面積10—30%。3級：病斑面積占接種葉面積30—50%。4級：病斑面積占接種葉面積50%以上。（二）、主要作法－－4.病害等級調查第二十頁，共二十五頁，2022年，8月28日（1）計算發病率（二）、主要作法－－5.統計方法和抗性分級標準

第二十一頁，共二十五頁，2022年，8月28日（2）計算病情指數式中：Gi為病害級別；Ni為調查株數；i為0、1、2…k,GK為最高級別。（二）、主要作法－－5.統計方法和抗性分級標準

第二十二頁，共二十五頁，2022年，8月28日（3）計算相對抗性指數（RRI）式中：m為供試材料；CK為對照。

RRI，即Relativeresistantindex（二）、主要作法－－5.統計方法和抗性分級標準

第二十三頁，共二十五頁，2022年，8月28日（4）抗性分級標準：RRI≤-1.2≤-0.7<0≥0>0.9>2.0抗性分數高抗中抗低抗低感中感高感代號HRMRLRLSMSHS（二）、主要作法－－5.統計方法和抗性分級標準

第二十四頁，共二十