液相色譜法：以液體為流動(dòng)相的色譜法稱～。經(jīng)典液相色譜：固定相顆粒較大且不均勻常壓下輸送流動(dòng)相柱效較低分析周期長(zhǎng)現(xiàn)代液相色譜：固定相顆粒小且均勻高壓下輸送流動(dòng)相柱效較高分析周期短經(jīng)典液相色譜法一、液-固吸附色譜（一）分離原理（二）常用吸附劑（三）吸附劑和流動(dòng)相的選擇（一）分離原理

各組分與流動(dòng)相分子爭(zhēng)奪吸附劑表面活性中心

利用吸附劑表面的活性吸附中心對(duì)不同組分的

吸附能力差異而實(shí)現(xiàn)分離（二）常用吸附劑：多孔、微粒狀物質(zhì)

1.硅膠

2.氧化鋁

3.聚酰胺1.硅膠（SiO2·nH2O）結(jié)構(gòu)：內(nèi)部——硅氧交聯(lián)結(jié)構(gòu)→多孔結(jié)構(gòu)表面——有硅醇基→氫鍵作用→吸附活性中心

特性：

1）吸附活性次序：含水量越多，級(jí)數(shù)越高，吸附能力越弱

2）與極性物質(zhì)或不飽和化合物形成氫鍵物質(zhì)極性↑，吸附能力↑→強(qiáng)極性吸附中心，不易洗脫

3）吸水→失活

→105～110OC烘干30分鐘(可逆失水)→吸附力最大

→500OC烘干(不可逆失水)→活性喪失，無(wú)吸附力適用：分析酸性或中性物質(zhì)

續(xù)前2.氧化鋁堿性氧化鋁pH9～10適于分析堿性、中性物質(zhì)中性氧化鋁pH＞7.5適于分析酸性堿性和中性物質(zhì)酸性氧化鋁pH4～5適于分析酸性、中性物質(zhì)3.聚酰胺氫鍵作用氫鍵能力↑強(qiáng)，組分越后出柱（三）吸附劑和流動(dòng)相的選擇：

依據(jù)被測(cè)組分、吸附劑和流動(dòng)相的性質(zhì)1.被測(cè)組分性質(zhì)（極性大?。?/p>

烴＜

--------＜羧酸，醇2.吸附劑的活性：吸附劑的活性↑大，對(duì)被測(cè)組分的吸附能力↑強(qiáng)

強(qiáng)極性物質(zhì)——選擇弱吸附劑弱極性物質(zhì)——選擇強(qiáng)吸附劑3.流動(dòng)相的極性：流動(dòng)相極性↑大，對(duì)被測(cè)組分的洗脫能力↑大

“相似相溶”原則：根據(jù)組分性質(zhì)、吸附劑的活性，選擇適當(dāng)極性的流動(dòng)相續(xù)前4.三者關(guān)系圖示：組分吸附劑流動(dòng)相極性活性小極性非(弱)極性活性大

非極性或弱極性二、柱色譜法將固定相裝在柱中、試樣沿一個(gè)方向移動(dòng)而進(jìn)行分離的色譜法稱為柱色譜法。固定相色譜柱←人參二醇←人參三醇捻金中人參二醇和人參三醇的鑒別三、薄層色譜法（一）概述（二）定性參數(shù)（三）吸附劑的選擇（四）展開劑的選擇（五）薄層板的制備（六）定性與定量分析（一）概述1．定義：將固定相均勻涂布在表面光滑的平板上，形成薄層而進(jìn)行色譜分離和分析的方法2．操作過(guò)程：見圖示鋪板→活化

→點(diǎn)樣

→

展開

→定位(定性)/洗脫(定量)3．分離機(jī)制：吸附（分配，空間排阻）4．特點(diǎn)：分析快速、靈敏、顯色方便5．應(yīng)用：藥物雜質(zhì)檢查、純度測(cè)定next圖示圖示L0L1L2（二）定性參數(shù)1.比移值Rf續(xù)前討論

Rf與K有關(guān)，即與組分性質(zhì)（溶解度）以及薄層板和展開劑的性質(zhì)有關(guān)色譜條件一定，Rf只與組分性質(zhì)有關(guān)，是薄層色譜基本定性參數(shù)，說(shuō)明組分的色譜保留行為續(xù)前

1）K↑大，Rf↓小

2）薄層板一定，對(duì)于極性組分展開劑極性↑大，Rf↑大（容易洗脫）展開劑極性↓小，Rf↓?。ú蝗菀紫疵摚?/p>

3）Rf范圍：0<Rf

<1

（組分遷移速度和距離小于展開劑遷移速度和距離）

Rf=0.2——0.8（常用）

0.3——0.5（最佳）續(xù)前2.相對(duì)比移值Rr

討論參考物與被測(cè)組分在完全相同條件下展開可以消除系統(tǒng)誤差，大大提高重現(xiàn)性和可靠性；參考物可以是后加入純物質(zhì)，也可是樣品中已知組分相對(duì)比移值Rr與組分、參考物性質(zhì)及色譜條件有關(guān)，范圍可以大于或小于1（三）吸附劑的選擇

根據(jù)被測(cè)物極性和吸附劑的吸附能力

被測(cè)物極性強(qiáng)——弱極性吸附劑

被測(cè)物極性弱——強(qiáng)極性吸附劑（四）展開劑的選擇（同液固吸附色譜流動(dòng)相的選擇）根據(jù)被測(cè)組分、吸附劑和展開劑本身的極性展開劑：?jiǎn)我?、二元、多元展開劑展開劑的選擇：組分極性強(qiáng),吸附劑活性低,強(qiáng)極性洗脫劑展開；組分極性弱,吸附劑活性高,弱極性洗脫劑展開。常用溶劑的極性強(qiáng)弱順序：水＞酸＞吡啶＞甲醇＞乙醇＞正丙醇＞丙酮＞乙酸乙酯＞乙醚＞氯仿＞二氯甲烷＞甲苯＞苯＞三氯乙烷＞四氯化碳>環(huán)己烷>石油醚。

混合溶劑先用單一溶劑展開，若Rf值太小，則加入一定量極性強(qiáng)的溶劑，如乙醇、丙酮等，如果Rf值太大，則加入適量極性弱的溶劑(如環(huán)己烷、石油醚等)，以降低極性。可加入一定比例的酸或堿,使斑點(diǎn)集中。（五）薄層板的制備定性分析——窄條定量分析——10×20cm（六）定性與定量分析定性分析——日光，紫外光，顯色定量分析——洗脫法，薄層掃描法硅膠G——自含粘和劑硅膠H——不含粘和劑，鋪板時(shí)另加入CMC硅膠FH254——含熒光劑，254nm紫外光照發(fā)綠光硅膠FH365——含熒光劑，365nm紫外光照發(fā)光四、紙色譜法將固定相放在紙上，以紙做載體進(jìn)行點(diǎn)樣、展開、定性、和定量的液-液分配色譜法固定相：紙纖維吸附