標準解讀

《NY/T 679-2003 豬繁殖與呼吸綜合癥免疫酶試驗方法》是一項農業行業標準，主要針對豬繁殖與呼吸綜合癥（PRRS）的檢測提供了一種基于免疫酶技術的方法。該標準詳細規定了從樣本采集、處理到最終結果判斷的整個實驗流程。

標準中首先明確了適用范圍，指出此方法適用于豬繁殖與呼吸綜合癥病毒抗體的定性檢測。接著，對所需的主要試劑和材料進行了列舉，包括但不限于特異性抗原、酶標記二抗、底物溶液等，并強調所有試劑需按照說明書或實驗室驗證條件正確使用。

在樣品準備部分，標準指出了血清樣本的收集方式及保存要求，確保樣本質量符合后續分析需求。對于具體的操作步驟，則是從包被板的選擇開始介紹，通過一系列固定化抗原、封閉非特異位點、加入待測血清稀釋液、洗滌去除未結合成分、添加酶標二抗、再次洗滌后顯色反應直至終止反應的過程來完成。

此外，還提供了如何設置對照組以及陽性、陰性對照的具體指導，以保證每次實驗的有效性和可重復性。關于結果判讀，標準給出了明確的標準曲線制作方法及臨界值確定原則，幫助實驗人員準確區分陽性與陰性樣本。

最后，文檔也提及了一些注意事項，比如實驗過程中應嚴格遵守無菌操作規程，避免交叉污染；同時提醒使用者注意個人防護措施，防止生物安全事故發生。


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  • 現行
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  • 2003-07-30 頒布
  • 2003-10-01 實施
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文檔簡介

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犅４１

中華人民共和國農業行業標準

犖犢／犜６７９—２００３

豬繁殖與呼吸綜合癥免疫酶試驗方法

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２００３０７３０發布２００３１００１實施

中華人民共和國農業部發布

書

犖犢／犜６７９—２００３

前言

本標準的附錄Ａ為規范性附錄。

本標準由農業部畜牧獸醫局提出并歸口。

本標準起草單位：農業部獸醫診斷中心。

本標準主要起草人：王宏偉、王傳彬、陳西釗、田克恭。

Ⅰ

書

犖犢／犜６７９—２００３

豬繁殖與呼吸綜合癥免疫酶試驗方法

１范圍

本標準規定了豬繁殖與呼吸綜合癥（ＰＲＲＳ）免疫酶試驗和免疫酶組織化學方法。

本標準適用于檢測豬血清中的豬繁殖與呼吸綜合癥病毒（ＰＲＲＳＶ）抗體和組織中的ＰＲＲＳＶ抗原。

２免疫酶試驗

２．１材料準備

２．１．１試劑

２．１．１．１磷酸鹽緩沖液（ＰＢＳ）：配制見第Ａ．１章。

２．１．１．２抗原涂片的制備：ＰＲＲＳＶ接種于生長至７０％～８０％單層的Ｍａｒｃ１４５細胞。接種后３ｄ～

４ｄ，病變達５０％～７５％時，用胰蛋白酶消化分散感染的細胞單層，ＰＢＳ洗滌三次后，稀釋至１×１０６個細

胞／ｍＬ。取印有１０個～４０個小孔的室玻片，每孔滴加１０μＬ。室溫自然干燥后，冷丙酮（４℃）固定

１０ｍｉｎ。密封包裝，置－２０℃備用。

２．１．１．３標準陽性血清：ＰＲＲＳＶ試驗感染豬制備的血清。

２．１．１．４標準陰性血清：無ＰＲＲＳＶ感染、未經免疫的豬血清。

２．１．１．５酶結合物：辣根過氧化物酶（ＨＲＰ）標記的葡萄球菌Ａ蛋白（ＳＰＡ）。

２．１．１．６底物溶液：配制見第Ａ．２章。

２．１．２器材

ａ）普通光學顯微鏡；

ｂ）印有１０個～４０個小孔的室玻片；

ｃ）微量加樣器，容量５μＬ～５０μＬ；

ｄ）３７℃恒溫培養箱或水浴箱。

２．１．３樣品

采集被檢豬血液，分離血清。血清應新鮮、透明、不溶血、無污染，密裝于滅菌小瓶內，４℃或－３０℃

保存或立即送檢。試驗前將被檢血清統一編號，并用ＰＢＳ作１０倍稀釋。

２．２操作方法

２．２．１取出抗原涂片，室溫干燥后，滴加１０倍稀釋的待檢血清和標準陰性血清、標準陽性血清，每份血

清加兩個病毒細胞孔和一個正常細胞孔，置濕盒內，３７℃３０ｍｉｎ。

２．２．２ＰＢＳ漂洗三次，每次５ｍｉｎ，室溫干燥。

２．２．３滴加適當稀釋的酶結合物，置濕盒內，３７℃３０ｍｉｎ。

２．２．４ＰＢＳ漂洗三次，每次５ｍｉｎ。

２．２．５將室玻片放入底物溶液中，室溫下顯色５ｍｉｎ～１０ｍｉｎ。ＰＢＳ漂洗兩次，再用蒸餾水漂洗—次。

２．２．６吹干后，在普通光學顯微鏡下觀察，判定結果。

２．３結果判定

２．３．１在陰性血清對照、陽性血清對照成立的情況下：即陰性血清與正常細胞和病毒感染細胞反應均

無色；陽性血清與正常細胞反應無色，與病毒感染細胞反應呈棕黃色至棕褐色，即可判定結果；否則應

重試。

２．３．２待檢血清與正常細胞和病毒感染細胞反應均呈無色，即可判為

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