標準解讀

《NY/T 547-2002 兔粘液瘤病瓊脂凝膠免疫擴散試驗方法》是一項農業行業標準，主要用于指導實驗室通過瓊脂凝膠免疫擴散技術來檢測兔粘液瘤病毒抗體或抗原。該標準詳細規定了實驗所需材料、試劑制備方法、操作步驟及結果判斷等關鍵環節。

在準備階段，首先需要準備好所有必要的材料和試劑，包括但不限于特異性抗血清（針對兔粘液瘤病毒）、待測樣品（如疑似感染動物的血清或其他體液樣本）、以及用于制作瓊脂板的基礎成分——瓊脂糖。此外，還需確保實驗室環境符合生物安全要求，并采取適當措施防止交叉污染。

接下來是瓊脂凝膠板的制備過程。將適量的瓊脂糖溶解于蒸餾水中加熱至完全溶解后冷卻至約60°C左右，然后倒入預先清潔并干燥好的玻璃培養皿內形成均勻薄層，待其自然冷卻固化即可得到所需的瓊脂凝膠板。

隨后，在已固化的瓊脂凝膠板上按照預定模式打孔，通常采用圓形排列方式。將特異性抗血清加入中心孔中，而待測樣品則分別加至周圍的小孔里。放置好所有液體后，需輕輕敲擊培養皿底部使溶液充分滲入凝膠孔洞內部。

完成上述步驟后，將整個裝置置于濕潤環境中（例如濕度箱）保持恒定溫度（一般為37℃），讓其靜置足夠時間（至少24小時）。期間，若存在相應抗體與抗原，則會在兩者之間形成沉淀線，這是由于免疫復合物形成的緣故。

最后一步是對實驗結果進行觀察分析。根據沉淀線出現的位置、數量及其清晰度等因素綜合判斷待測樣品是否含有兔粘液瘤病毒相關的抗體或抗原。需要注意的是，正確解讀沉淀線形態對于獲得準確結論至關重要，因此建議由經驗豐富的技術人員執行此任務。


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  • 2002-08-27 頒布
  • 2002-12-01 實施
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ICS.11.220NYB41中華人民共和國農業行業標準NY/T547-2002免粘液瘤病瓊脂凝膠免疫擴散試驗方法Agargelimmunodiffusionforrabbitmyxoma2002-08-27發布2002-12-01實施中華人民共和國農業部發布

NY/T547-2002前免粘液瘤是免的病毒性致死性傳染病，世界動物衛生組織World（rganizationforAnimalHealth（英）,OfficeintentionaldesEpizootic(法),OIE和我國分別將之列為B類或二類動物疫病。本標準是依據OIE《診斷試驗和疫苗標準手冊》（2000版）（"ManualofStandardsforDiagnostieTestsandVaccines”,2000）第2.2.1章制定的。本標準與該章的差異是-本標準只采用了該章規定的最實用的抗體抗原兼測的瓊脂凝膠免疫擴散試驗(液體法)技術·此項技術已可滿尼我國對內和對外診斷及檢疫的需要；-本標準基于該章的原則性規定，根據我國的研究與實踐經驗規定了具體的操作程序本標準的附錄A為規范性附錄。本標準由農業部畜牧獸醫局提出。本標準由全國動物檢疫標準化技術委員會歸口。本標準起草單位：農業部動物檢疫所。本標準主要起草人：杜元釗、朱萬光、劉佩蘭、吳延功。

NY/T547-2002免粘液瘤病瓊脂凝膠免疫擴散試驗方法1范圍本標準規定了免粘液瘤病瓊脂凝膠免疫擴散試驗的技術要求本標準適用于免粘液瘤病毒特異抗體和可溶性抗原的檢測.也可用于兔粘液瘤病的流行病學調查，拉驗方法2.1材料2.1.1器材與試劑：a）孔器：內徑6mmib）家脂樓：三羥甲基氮基甲燒（Tris）10%故酸;乙二胺四乙酸(EDTA)。2.1.2瓊脂擴散抗原，按說明書使用2.1.3標準陽性血清，按說明書使用。2.1.4被檢血消：按常規方法采血分離血清,4℃保存10d內檢測有效；一20℃凍結保存，一年有效。2.1.5瓊脂糖平板制備方法見附錄A。2.2操作方法2.2.1在瓊脂糖平血上,按坐標紙上畫好的梅花型(見圖1)打孔，其孔徑為6mm.孔距為4mm;孔內瓊脂糖用針頭小心挑出，勿破壞周圍瓊脂。打孔后用酒精燈加熱封底。圖1梅花型打孔示意圖2.2.2加樣:滴加抗原和血清于梅花型孔中，中央孔(7孔）加抗原（Ag)，1、3.5孔加標準陽性血清,2、4、6孔加被檢血清，每孔均以加滿不溢出為度。2.2.3反應：加樣完畢后.靜置10min.然后放入帶蓋的濕盒中置37C反應,24h觀察結果，48h判定結果。陰性或可疑的結果于72h再判定一次。2.3結果判定2.3.1判定標準檢測血清中可溶性抗原或抗體出現的沉淀線：a）加被檢血清中含有可溶性抗原，則被檢血消與陽性血清之間形成沉淀線，并與陽性血清和抗原形成的沉淀線

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