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文檔簡介

標記物制備與鑒定125I-125I或125I+125I-標記物（混合物）Ch-T、LPO氧化取代反應直接標記法化學或酶促反應，將放射性負電碘離子氧化成碘原子或正電碘離子，通過取代反應置換被標記物分子中酪氨酸或酪胺殘基以及組胺殘基上的氫原子。使用無還原劑的高比放射性碘源被標記物用量要少ch-T用量要低控制總反應體積<200μl反應時間1-2分鐘弱堿性反應條件bolton-Hunter間接標記法聯接標記(bolton-Hunter)預先將125I用ch-T法標記琥珀酰胺酯，制成的125I化脂功能基團可與蛋白分子上的氨基酸殘基反應，從而使待標記物被碘化。聚合、損傷物標記蛋白游離125I125碘-標記物的制備－純化

凝膠過濾法離子交換層析法聚丙烯酰胺凝膠電泳高效液相色譜法125碘-標記物的制備－鑒定

放射化學純度單位標記物中結合于被標記物上的放射性占總放射性的百分率應大于95%免疫活性標記物與抗體結合的能力標記物與過量抗體反應百分比該值越大,標記物免疫活性好結果準，測定復雜比放射活性單位化學量標記物中含的放射性強度單位：Ci/gmCi/mgCi/mmol比放射性過高，將影響標記物免疫活性計算法：依據標記反應中放射性核素的利用率（標記率）來計算標記物的比放射性.自身置換法：比較標記抗原與標準抗原的免疫活性來測定標記物的比放射性

結果欠準，計算簡便比放射性－計算法

自身置換曲線

反應系統：限量Ab和遞增劑量(cpm)的標記抗原標記抗原的結合率(B/T%)隨標記抗原總量的增加而減少兩條曲線平行,若標記抗原與標準品抗原具有相同的免疫活性標準曲線

反應系統:抗體（限量）、標記抗原（定量）和劑量遞增的標準抗原組成標記抗原與抗體的結合率(B/T%)隨標準抗原的增加而競爭抑制性減少比放射性=自身置換法比放射性－自身置換法

標準曲線與自身置換曲線平行表明在相同的放射性結合水平上，二實驗中抗體上結合的抗原物質總量相同計算置換曲線平行段某結合率的放射性強度(cpm/ml換算為nCi/ml)計算標準曲線平行段相應結合率對應的標準抗原化學量(ng

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