標(biāo)準(zhǔn)解讀

《GB/T 31802-2015 番茄斑萎病毒檢疫鑒定方法》是一項(xiàng)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，旨在為檢測(cè)番茄斑萎病毒提供一套科學(xué)、準(zhǔn)確的操作指南。該標(biāo)準(zhǔn)詳細(xì)描述了從樣品采集到最終結(jié)果分析的一系列步驟和技術(shù)要求，適用于進(jìn)出口植物及其產(chǎn)品中番茄斑萎病毒的檢疫鑒定工作。

標(biāo)準(zhǔn)首先明確了適用范圍，即用于國(guó)際貿(mào)易過(guò)程中對(duì)疑似攜帶番茄斑萎病毒的植物材料進(jìn)行快速準(zhǔn)確地識(shí)別與確認(rèn)。接著介紹了所需的主要儀器設(shè)備及試劑耗材，包括但不限于RT-PCR儀、電泳系統(tǒng)等實(shí)驗(yàn)室常用工具以及特定引物探針設(shè)計(jì)。

在操作流程部分，《GB/T 31802-2015》規(guī)定了完整的實(shí)驗(yàn)方案：從樣本準(zhǔn)備開(kāi)始，通過(guò)研磨、離心等物理方法提取總RNA；然后利用反轉(zhuǎn)錄酶將RNA轉(zhuǎn)化為cDNA；接下來(lái)使用特異性引物對(duì)目標(biāo)序列進(jìn)行擴(kuò)增；最后通過(guò)凝膠電泳或熒光定量PCR技術(shù)來(lái)觀察并記錄結(jié)果。此外，還提供了陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照設(shè)置指導(dǎo)以確保實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性。

對(duì)于數(shù)據(jù)處理與結(jié)果判斷，《GB/T 31802-2015》給出了明確的標(biāo)準(zhǔn)，比如如何根據(jù)電泳條帶位置大小或者Ct值來(lái)判定樣品是否感染了番茄斑萎病毒。同時(shí)強(qiáng)調(diào)了質(zhì)量控制的重要性，建議定期參加能力驗(yàn)證活動(dòng)，并采取措施避免交叉污染等問(wèn)題發(fā)生。


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  • 現(xiàn)行
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  • 2015-07-03 頒布
  • 2015-11-20 實(shí)施
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文檔簡(jiǎn)介

ICS6502001

B16..

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T31802—2015

番茄斑萎病毒檢疫鑒定方法

DetectionandidentificationofTomatospottedwiltvirus

2015-07-03發(fā)布2015-11-20實(shí)施

中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布

中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

中華人民共和國(guó)

國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

番茄斑萎病毒檢疫鑒定方法

GB/T31802—2015

*

中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社出版發(fā)行

北京市朝陽(yáng)區(qū)和平里西街甲號(hào)

2(100029)

北京市西城區(qū)三里河北街號(hào)

16(100045)

網(wǎng)址

:

服務(wù)熱線

:400-168-0010

年月第一版

20158

*

書(shū)號(hào)

:155066·1-49517

版權(quán)專有侵權(quán)必究

GB/T31802—2015

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)植物檢疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)提出并歸口

(SAC/TC271)。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院中華人民共和國(guó)遼寧出入境檢驗(yàn)檢疫局

:、。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人李桂芬魯潔馬潔孔君王秀芬杜智欣張永江魏梅生

:、、、、、、、。

Ⅰ

GB/T31802—2015

番茄斑萎病毒檢疫鑒定方法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了植物檢疫中番茄斑萎病毒的檢疫鑒定方法

。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于植物種子苗木等繁殖材料中番茄斑萎病毒的檢疫鑒定

、。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

進(jìn)出境植物及植物產(chǎn)品檢疫抽樣

SN/T2122

3儀器設(shè)備及試劑

31儀器設(shè)備

.

酶標(biāo)儀天平感量計(jì)微量榨汁機(jī)儀實(shí)時(shí)熒光儀電泳儀電泳槽

、(1/10000g)、pH、、PCR、PCR、、、

凝膠成像系統(tǒng)隔離溫室恒溫水浴低溫冰箱等

、、、。

微量移液器酶聯(lián)板研缽離心管花盆滅菌

(2μL,10μL,20μL,100μL,200μL,1000μL)、、、、、

土等

。

32試劑

.

酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑見(jiàn)附錄檢測(cè)試劑見(jiàn)附錄實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)試劑見(jiàn)

B,RT-PCRC,RT-PCR

附錄生物學(xué)測(cè)定試劑參見(jiàn)附錄

D,E。

4抽樣與樣品制備

41抽樣

.

抽樣按照的規(guī)定進(jìn)行

SN/T2122。

42種子樣品制備

.

將種子重點(diǎn)挑取畸形不成熟的種子播于滅菌土中于生長(zhǎng)并進(jìn)行癥狀觀察待長(zhǎng)出片

(、),25℃。3~

片葉后將表現(xiàn)癥狀的植株編號(hào)未表現(xiàn)癥狀的植株分組株為一組并編號(hào)采集葉片用于酶聯(lián)免疫

4,,(10)。

測(cè)定檢測(cè)實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)及生物學(xué)測(cè)定

、RT-PCR、RT-PCR。

43苗木樣品制備

.

將苗木種植于隔離溫室中于生長(zhǎng)并進(jìn)行癥狀觀察有癥狀的苗木單獨(dú)檢測(cè)沒(méi)有癥狀的分

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