人和肽素(CPP)酶聯免疫檢測試劑盒使用說明書使用前仔細閱讀本說明書。本酶聯免疫試劑盒是基于生物素雙抗體夾心技術原理，來檢測人和肽素(CPP)),只能用于研究用途，不得用于醫學診斷。用途：用于人血清、血漿及相關液體樣本中和肽素(CPP)的測定。工作原理本試劑盒采用的是生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法(ELISA)測定樣品中人和肽素(CPP)的水平。向預先包被了人和肽素(CPP)單克隆抗體的酶標孔中加入和肽素(CPP),溫育;溫育后，加入生物素標記的抗CPP抗體，再與鏈霉親和素-HRP結合，形成免疫復合物，再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶，然后加入底物A、B，產生藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺與樣品中人和肽素(CPP)的濃度呈正相關。試劑盒組成1標準品(1600ng/L)0.5ml7顯色劑A液3ml2標準品稀釋液3ml8顯色劑B液3ml3酶標包被板12孔X4條9終止液3ml4鏈霉親和素-HRP3ml10說明書1份520倍濃縮洗滌液20ml11封板膜2張6生物素標記的抗-CPP抗體1ml12密封袋1個需要而未提供的試劑和器材37°C恒溫箱。2．標準規格酶標儀。精密移液器及一次性吸頭蒸餾水，一次性試管吸水紙注意事項從2-8C取出的試劑盒，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。為避免交叉污染，要避免重復使用手中的吸頭和封板膜。不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。洗板方法手工洗板方法：甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內，浸泡1-2分鐘。根據需要，重復此過程數次。自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。標本要求1.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。2．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20°C保存，但應避免反復凍融操作程序1.標準品的稀釋：（本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶請按照說明自行在小試管中倍比稀釋）：800ng/L（5號標準品）120卩1的原倍標準品加入120卩1的標準品稀釋液400ng/L（4號標準品）120卩1的5號標準品加入120卩1的標準品稀釋液200ng/L（3號標準品）120卩1的4號標準品加入120卩1的標準品稀釋液100ng/L（2號標準品）120卩1的3號標準品加入120卩1的標準品稀釋液50ng/L（1號標準品）120卩1的2號標準品加入120卩1的標準品稀釋液2.根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。加樣：1）空白孔：空白對照孔不加樣品，生物素標記的抗CPF抗體,鏈霉親和素HKP,只加顯色劑A&〃和終止液，其余各步操作相同；）標準品孔：加入標準品50皿,鏈霉素-HRP50M（標準品中已事先整合好生物素抗體，故不加）3）待測樣品孔:加入樣本4血1,然后各加入抗■CPP抗體10訕、鏈酶親和素HRP50M，蓋上封板膜，輕輕振蕩混勻，37C溫育60分鐘。配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。顯色：每孔先加入顯色劑A50卩1,再加入顯色劑B50卩1,輕輕震蕩混勻，37C避光顯色10分鐘。終止：每孔加終止液50卩1，終止反應（此時藍色立轉黃色）。測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液后10分鐘以內進行。根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據樣品的OD值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。也可以使用各種應用軟件來計算。操作程序總結：準備試劑，樣品和標