標準解讀
《GB/T 27540-2011 豬瘟病毒實時熒光RT-PCR檢測方法》是一項國家標準，旨在提供一種基于實時熒光定量逆轉錄聚合酶鏈反應（RT-PCR）技術的豬瘟病毒檢測方法。該標準適用于疑似感染豬瘟病毒樣本中豬瘟病毒核酸的定性和定量分析。
根據此標準，整個檢測過程包括但不限于樣品采集、保存與運輸、RNA提取、反轉錄以及熒光定量PCR擴增等步驟。在具體操作上，首先需要從待測動物體內采集合適的生物材料作為檢測樣本；隨后按照指定條件對這些樣本進行處理以提取其中可能存在的豬瘟病毒RNA；接著利用特定引物和探針對提取到的目標RNA序列進行反轉錄并進行后續的PCR擴增反應，在此過程中通過監測熒光信號強度變化來判斷是否存在目標病原體及其含量水平。
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- 現行
- 正在執行有效
- 2011-11-21 頒布
- 2012-03-01 實施
文檔簡介
ICS11220
B41.
中華人民共和國國家標準
GB/T27540—2011
豬瘟病毒實時熒光RT-PCR檢測方法
Methodofthereal-timeRT-PCRforthedetectionof
classicalswinefevervirus
2011-11-21發布2012-03-01實施
中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局發布
中國國家標準化管理委員會
GB/T27540—2011
前言
本標準按照給出的規則起草
GB/T1.1—2009。
本標準由中華人民共和國農業部提出
。
本標準由全國動物防疫標準化技術委員會歸口
(SAC/TC181)。
本標準起草單位中國獸醫藥品監察所
:。
本標準主要起草人王琴王泰健徐璐范學政劉俊蔣春燕趙啟祖寧宜寶鄒興啟
:、、、、、、、、。
Ⅰ
GB/T27540—2011
豬瘟病毒實時熒光RT-PCR檢測方法
1范圍
本標準規定了豬瘟病毒實時熒光檢測方法
(Classicalswinefevervirus,CSFV)RT-PCR。
本標準適用于豬瘟的診斷和監測適用于豬活體及其臟器血液排泄物和細胞培養物中核
,、、CSFV
酸的檢測
。
2規范性引用文件
下列文件對于本文件的應用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文
。,
件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件
。,()。
中華人民共和國農業部公告第號獸醫實驗室生物安全技術管理規范
302
3縮略語
下列縮略語適用于本文件
。
豬瘟病毒
CSFV:(Classicalswinefevervirus)
值達到閾值的循環數
Ct:(cyclethreshold)
焦碳酸二乙酯
DEPC:(diethylpyrocarbonate)
酶熱啟動聚合酶
HSTaq:TaqDNA(HSTaqDNApolymerase)
核糖核酸
RNA:(ribonucleicacid)
熒光熒光逆轉錄聚合酶鏈式反應
RT-PCR:(realtimefluorescentquantitativereverse
transcriptionpolymerasechainreaction)
4試劑和材料
除另有說明所用試劑均為分析純所有試劑均用無酶的容器分裝
,;RNA。
41抽提試劑外觀為粉紅色分裝至棕色瓶中于保存
.Trizol:RNA,,,4℃~8℃。
42氯仿預冷
.:4℃。
43異丙醇預冷
.:4℃。
44乙醇用新開啟的無水乙醇和水配制預冷
.75%:DEPC,-20℃。
45水去離子水中加入作用高壓滅菌
.DEPC:0.1%DEPC,37℃1h,(121±2)℃,15min。
46酶抑制劑
.RNA(30U/μL)。
47
.10×PCRbuffer(10mmol/LpH8.3Tris-HCl,50mmol/LKCl,1.5mmol/LMgCl2)。
48
.dNTP(2.5mmol/L)。
49用于反應的引物濃度為探針濃度為其序列如下
.RT-PCR
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