概述定義分子流行病學研究進展分子流行病學在醫院感染控制中的應用2021/4/261分子流行病學定義分子流行病學是應用先進的實驗技術測量生物學標志，結合流行病學現場研究方法，從分子水平闡明疾病的病因及其相關的致病過程。2021/4/262傳統流行病學應用血清學方法對血清中各種成分（抗原、抗體、代謝產物、生化物質等）的出現和分布進行研究，闡明疾病及健康狀態在人群中的分布及其影響因素，并在采取預防控制措施后應用血清學方法來考核其效果。2021/4/263傳統流行病學

暴露疾病

揭示“黑匣子”秘密分子流行病學2021/4/264傳染性疾病耐藥性質粒、病原體變異、新傳染病慢性非傳染病–證實疾病的病因多病因、多階段、多基因、長潛隱期人群易感性--研究個體的發病差異生物個體間的遺傳和環境不同，易感性差異很大

，

傳統流行病學無法有效測量分子流行病學的產生2021/4/265分子生物學的快速發展理論突破斷裂基因，操縱子模型，限制性內切酶，DNA聚合酶等技術創新

凝膠電泳技術、核酸體外擴增、DNA測序、蛋白質測序、分子雜交等2021/4/266分子流行病學的發展軌跡1972年Kilbone博士美國傳染病學會第10次年會上首次提出1982年Perera提出“癌癥分子流行病學”1993年美國人Schulte出版了世界上第一本分子流行病學專著，即“分子流行病學”應用分子標志物或生物學測量研究致病因子與所致疾病之間的聯系。A研究方法拓展B研究范圍拓寬2021/4/267分子流行病學和傳統流行病學的關系區別點傳統流行病學分子流行病學暴露測量回憶偏倚往往難以避免；用傳統的問卷調查難于解決暴露隨時間變化，或多途徑暴露，符合暴露等。采用生物標志物則可解決這些問題暴露測量精確研究對象選擇又選擇偏倚減少錯分集體損害在損害達到相當程度時才能鑒別出采用生物標志：可提前發現機體損害有利于研究低暴露的影響個體易感性不能測量能測量觀察的終點可將觀察的終點前移可增加隊列研究終點人數2021/4/268分子流行病學與醫院感染控制

-細菌同源性分析研究在感控中的應用手術傷口感染！院內感染？導管相關性血流感染！呼吸機相關性肺炎！2021/4/269醫院感染醫院感染是當前醫療衛生的重大問題之一，由于院內感染密切關系到醫療服務質量，關系到病人的預后、病死率、住院時間、床位周轉率以及病人和國家的巨額經濟損失等。因而，院內感染的控制問題已列為國家乃至世界各國醫院管理的重要內容。2021/4/26109、人的價值，在招收誘惑的一瞬間被決定。2023/2/32023/2/3Friday,February3,202310、低頭要有勇氣，抬頭要有低氣。2023/2/32023/2/32023/2/32/3/20234:29:41PM11、人總是珍惜為得到。2023/2/32023/2/32023/2/3Feb-2303-Feb-2312、人亂于心，不寬余請。2023/2/32023/2/32023/2/3Friday,February3,202313、生氣是拿別人做錯的事來懲罰自己。2023/2/32023/2/32023/2/32023/2/32/3/202314、抱最大的希望，作最大的努力。03二月20232023/2/32023/2/32023/2/315、一個人炫耀什么，說明他內心缺少什么。。二月232023/2/32023/2/32023/2/32/3/202316、業余生活要有意義，不要越軌。2023/2/32023/2/303February202317、一個人即使已登上頂峰，也仍要自強不息。2023/2/32023/2/32023/2/32023/2/3醫院感染的常規檢測項目醫院感染病例監測醫院環境衛生學監測消毒滅菌效果監測2021/4/2612醫院感染爆發定義指在醫療機構或某科室的患者中短時間內發生3例以上同種同源感染病例的現象同一種病原體，藥敏一致2021/4/2613院內感染控制院內感染的研究中，一個很重要的問題，就是如何確定感染源和傳播途徑，只有明確病原菌的感染方式，才能采取有效的預防和控制措施。2021/4/2614臨床微生物實驗室基礎微生物檢驗學分子流行病學方法

院內感染控制目的臨床診斷基礎2021/4/261516分子分型（分子流行病學研究）從核酸分子水平上分析醫院感染的發生、發展規律及機理，更加準確有效地進行醫院感染管理控制，已成為當前國際醫院感染管理研究中的重要方向。從患者分離株到病區周圍環境株的比較分析；從外源性感染到內源性感染從某一醫院的醫院感染暴發到大范圍甚至世界范圍的感染菌株流行變遷；基因多態性分析技術已成為醫院感染監測控制的高水平研究領域。2021/4/2616微生物室在醫院感染中的作用鑒定特殊耐藥菌的檢出流行病學分型PFGE脈沖場凝膠電泳RAPD隨機擴增DNA多態性

2021/4/261718消化、釋放出DNAPFGE原理2021/4/261819Enzyme酶切PFGE原理約5～20個、長度10～800kb的大片段DNA2021/4/261920脈沖場凝膠電泳(PFGE)制備瓊脂糖栓塊消化酶切脈沖電泳結果解釋2021/4/2620PFGE原理電場不斷在兩種方向（有一定夾角，而不是相反的兩個方向）變動。DNA分子帶有負電荷，會朝正極移動。相對較小的分子在電場轉換后可以較快轉變移動方向，而較大的分子在凝膠中轉向較為困難。因此小分子向前移動的速度比大分子快可以用來分離大小從10kb到10Mb的DNA分子2021/4/262122脈沖電泳PFGE原理2021/4/262223PFGE結果判讀目測法：按美國疾病控制和預防中心(CDC)Tenover等人推薦的方法判讀。圖譜完全相同的定為一個型，彼此之間相差一個帶的定為同一型的不同亞型，相差2－3個帶的認為親緣關系密切，相差4－6個帶的認為可能相關，條帶相差7個以上的認為無親緣關系。并隨機地選擇不同的字母如A、B、C、D等的字母順序分型。聚類分析計算機輸入SPSS，做樹狀圖2021/4/2623案例一2006年7月，本市某醫院外科重癥監護病房（ICU）8例患者下呼吸道感染多重耐藥鮑曼不動桿菌2021/4/2624目標性檢測對該ICU的環境、醫療用品、醫務人員手及鼻咽拭子進行細菌學監測，共采樣107份，其中23份檢出鮑曼不動桿菌，陽性率21.3%。主要分布在醫務人員手、咽部及床頭柜、輸液泵、監護儀、治療車、地面、病人用物等環境和醫療用品。2021/4/2625院感爆發流行的控制空氣消毒15%過氧乙酸銨2g/m3用量進行蒸熏及臭氧消毒物表消毒地面、臺面0.5%過氧乙酸拖擦消毒醫療用品消毒高壓蒸汽滅菌0.5%過氧乙酸浸泡消毒感染患者隔離治療，分組護理醫務人員咽部帶菌者每日2-3次呋喃西林滴鼻，口泰嗽口2021/4/2626案例二2006年我市某院發現了一例攜帶耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌（痰，血）的患者為了防止該耐藥菌在醫院內的播散，對該病區進行目標性監測2021/4/2627四株肺炎克雷伯菌的藥敏1 2 3 4亞胺培南 >16 >16 >16 >16厄他培南 >16 >16 >16 >16頭孢西丁 >=64 >=64 >=64 >=64頭孢匹汚 >=64 >=64 >=64 >=64頭孢曲松 >=4 >=4 >=4 >=4妥布霉素 4 4 4 4頭孢他啶 >=16 >=16 >=16 >=16氨曲南 >=64 >=64 >=64 >=64頭孢他啶 >=64 >=64 >=64 >=64環丙沙星 >=64 >=64 >=64 >=64哌拉西林他唑巴坦 >=128 >=128 >=128 >=128左氧氟沙星 >=64 >=64 >=64 >=64氨芐西林 >=32 >=32 >=32 >=32氨芐西林，舒巴坦 >=32 >=32 >=32 >=32 KB(mm）

2163 2193 2085 2011多粘菌素B 20 20 21 20美羅培南 15 15 15 15頭孢哌酮舒巴坦 6 6 6 62021/4/2628耐藥菌的基因型分析1.為陽性對照（KPC-2)2.肺克（患者痰）3.肺克（患者血）4.肺克（隔壁床患者痰）5.肺克（病房拖把）6.為陰性對照Mark2021/4/2629聚類分析2021/4/2630院感及時控制因素及時發現醫務人員的重視ICU環境因素(單房間,單獨護理)環境的消毒措施有效半年內未出現耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌2021/4/2631KPC酶水解亞胺培南或美羅培南（是目前臨床上控制革蘭陰性菌感染的最有效的抗菌藥物）的一類β內酰胺酶屬于功能分類法的2f組，A類，可被克拉維酸抑制，不被乙二胺四乙酸（EDTA）所抑制現已報道的KPC亞型共12種亞型在中國主要見于浙江2021/4/2632產KPC酶耐藥菌的傳播研究認為，blaKPC位于一種新型的Tn3型的轉座子Tn4401上，其轉座子的結構是KPC基因轉移的原因這種新型的轉座子結構可以使blaKPC從其原始位置轉移至各類不同的質粒同時認為轉座子Tn4401是一個復合轉座子，由2次序列插入形成2021/4/2633產KPC酶耐藥菌有限的DNA指紋和脈沖凝膠電泳資料顯示產KPC酶的腸桿菌科細菌易發生醫院感染的暴發流行最早在美國、特別在美國的東北部各州蔓延，并造成局部地區暴發流行以后幾年再世界各地都有報告2021/4/2634脈沖場凝膠電泳（PFGE)對基因組的DNA酶切片段多態性進行同源性分析，是短期院內感染爆發流行判斷的金標準是一種分離大分子DNA的方法2021/4/2635耐碳青酶烯腸桿菌科細菌2007年下半年零星出現(肺克)2010年1-8月收集到18株.包括肺克克雷伯菌（15）大腸埃希菌（1）陰溝腸桿菌（1）枸櫞酸桿菌（1）2021/4/2636產KPC-2肺克同源性分析(2010.1-8)2021/4/2637流行病學分析A型傳播源頭:患者來自上海某醫院，轉至我院重癥監護室，入院次日做痰培養，檢出亞胺培南耐藥的肺克。后轉入康復科，耐藥菌一直被檢測到。A型患者分布于重癥監護室，康復科，血液科。B型和C型的七名患者住我院某外科。B型的五名患者在分離出該耐藥菌前未使用過碳青霉烯類抗生素，推測是院內環境感染所致C型的兩名患者，源頭的患者住院時間長達121天，在分離出該菌之前，美羅培南使用時間近二十天，推測C型可能是抗生素篩選的結果。2021/4/2638PFGE的局限性無法判斷2006年產KPC酶肺克的小范圍流行與2010年出現的15株產KPC酶的肺克A,B,C,三個克隆間有無同源性不同實驗室間的分型結果不能進行比較2021/4/2639多位點序列分型

(Multilocussequencetyping,MLST一種基于核酸序列測定的細菌分型方法通過PCR擴增管家基因內部片段測定其序列，分析菌株的變異2021/4/2640MLST的原理一般測定6~10個管家基因內部400~600bp的核苷酸序列，每個位點的序列根據其發現的時間順序賦予一個等位基因編號，每一株菌的等位基因編號按照指定的順序排列就是它的等位基因譜，也即是這株菌的序列型（sequencetype,ST）。這樣得到的每個ST均代表一組單獨的核苷酸序列信息。2021/4/2641序列型（ST)序列型（Sequence-typying,STs）等同于MLEE得出的電泳型(Electrophoretictype,ET）通過比較ST可以發現菌株的相關性,即密切相關菌株具有相同的ST或僅有極個別基因位點不同的ST,而不相關菌株的ST至少有3個或3個以上基因位點不同2021/4/2642MLST的分析方法MLST技術針對看家基因設計引物對其進行PCR擴增和測序,得出每個菌株各個位點的等位基因數值然后進行等位基因圖譜(allelicprofile)或序列類型(sequencetypes,STs)鑒定再根據等位基因圖譜使用配對差異矩陣(matrixpair-wisedifferences)等方法構建系統樹圖進行聚類分析2021/4/2643謝謝

qadchhyahoo2021/4/26449、人的價值，在招收誘惑的一瞬間被決定。03-2月-2303-2月-23Friday,February3,202310、低頭要有勇氣，抬頭要有低氣。***2/3/20234:29:41PM11、人總是珍惜為得到。03-2月-23**Feb-2303-Feb-2312、人亂于心，不寬余請。***Friday,February3,202313、生氣是拿別人做錯的事來懲罰自己。03-2月-2303-2月-23**03February202314、抱最大的希望，作最大的努力。03二月2023**