ICS07.100.30C53中華人民共和國國家標準GB/T19915.9-2005豬鏈球菌2型溶血素基因PCR檢測方法DetectionmethodofthehemolysingeneforSireptococcussuistype2byPCR2005-09-27發布2005-11-01實施中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局發布中國國家標準化管理委員會

中華人民共和國國家標準豬鏈球菌2型溶血素基因PCR檢測方法GB/T19915.9-2005中國標準出版社出版發行北京西城區復興門外三里河北街16號郵政編碼：100045電話：63787337637874472005年12月第一版2005年12月電子版制作書號：155066·1-26848版權專有侵權必究舉報電話：（010)68533533

GB/T19915.9-2005豬鏈球菌2型是鏈球菌屬的成員，其致病菌株可致豬鏈球菌病,引起豬敗血癥、腦膜炎等。近年來隨著我國養豬業的發展.該病流行日趨嚴重.給養豬業帶來巨大損失。人可通過傷口感染該菌,并導致死亡。溶血素是豬鏈球菌2型一種重要毒力因子。通過檢測豬及其產品中分離菌林是否含有豬鏈球菌2型溶血素基因，可以作為區分豬鏈球菌2型無毒菌株與致病菌株的一個指標，特制定本標準。本標準的附錄A為規范性附錄本標準由國家標準化管理委員會提出本標準由全國動物防疫標準化技術委員會歸口本標準主要起草單位：中華人民共和國江蘇出入境檢驗檢疫局、中國檢驗檢疫科學研究院。本標準主要起草人：陳國強、唐泰山、張敬友、姜炭、王凱民、張常印、林祥梅、吳紹強、劉建、韓雪清賈廣樂、梅琳、

GB/T19915.9-2005豬鏈球菌2型溶血素基因PCR檢測方法1范圍本標準規定了豬鏈球菌2型溶血素基因PCR檢測的操作方法本標準適用于豬及其產品中分離菌株的豬鏈球菌2型溶血素基因的檢測2規范性引用文件下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件,其隨后所有的修改單(不包括勒誤的內容)或修訂版均不適用于本標準,然而，鼓勵根據本標準達成協議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標準。GB/T6682—1992分析實驗室用水規格和試驗方法術語和定義下列術語和定義適用于本標準3.1褚鏈球菌2型Srreplococcussuistype2豬鏈球菌是屬于鏈球菌屬的一種細菌,根據其莢膜多糖抗原的差異.可分為1～34及1/2共35個血清型。豬鏈球菌2型是豬鏈球菌的一個血清型.不僅對豬致病性很強，而且可以感染特定的人群.是·種重要的人畜共患病病原菌。縮略語PCRPolymerasechainreaction·聚合酶鏈式反應DNAdeoxyribonucleicacid,脫氧核糖核酸dNTPdeoxyribonucleosidetriphosphate.脫氧核苔酸三磷酸bpbasepair·堿基對5測定方法5.1方法提要以可疑細菌培養物提取的核酸,作為DNA模板進行PCR擴增，瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR產物,與標準分子量標記比較，來確定擴增產物的大小5.2試劑和材料除另有規定，所用試劑均為分析純，水為符合GB/T6682-1992的滅菌雙蒸水5.2.1豬鏈球菌2型溶血素基因PCR反應混合物：10×PCR緩沖液2.5gL、25mmol/LMgCl2.0gL、2.5mmol/LdNTP2gL、上下游引物各1gL,用雙蒸水補至20L。引物序列如下.其目的片段長度為495bp。slyl:5'CCC.AAG.TTC.A