ICS.11.220B41中華人民共和國國家標準GB/T18647—2002動物球蟲病診斷技術Diagnostictechniquesforanimalcoccidiosis2002-02-19發布2002-05-01實施中華人民共和國發布國家質量監督檢驗檢疫總局

GB/T18647-2002球蟲病(coccidiosis)是多種動物的一種重要寄生蟲病，對家畜、家禽、魚類和野生動物等均有不同程度的危害，各國均有發生。本病對家禽和免危害較大，急性暴發的死亡率可超過30%；其次是豬、牛、羊等大家畜，急性感染常引起下痛,生長嚴重受阻;也偶有魚類和野生動物發生球蟲病的報道。特別在集約化的養殖中.若控制不嚴，會造成重大的經濟損失。本病的病原為孢子蟲綱(Sporozoa）,球蟲亞綱(Coccidia）,艾美耳科（Eimeriidae）中的艾美耳屬（Eimueria）、等孢屬(Lsospora)、泰澤屬(Tysceria）、溫揚屬(Wenyonella)的球蟲。每種動物都有各自特有的球蟲種，文獻記錄畜禽和野生動物的球蟲種已達1340種。國內外對球蟲病診斷的經典方法是病原檢查，并結合臨床癥狀和病理部檢進行綜合診斷。盡管國內外學者建立了多種免疫學和血清學技術.如色素試驗法、子孢子制動反應、間接血凝試驗、免疫熒光抗體試驗、酶聯免疫吸附試驗(ELISA)、免疫細胞化學技術、隨機引物擴增多態性DNA(RAPD)等，但由于這些方法檢出的準確性和操作復雜等問題，尚不能代替現有方法。最常用的方法仍是病原檢查和綜合診斷技術。病原檢查簡單、易行,既可定量、又可定性,既可用于發病前、又可用于發病后.以確定動物或動物群感染球蟲的程度。綜合診斷主要用于發病或死亡后的診斷，確定動物或動物群是否因感染球蟲而發病或死亡。病原檢查可廣泛用于流行病學調查、防治藥物的篩選和臨床驗證、進出口檢疫、無本病健康動物群的建立等、為了規范球蟲與球蟲病的檢疫方法·使得檢出結果客觀、準確、一致,以保證《中華人民共和國動物防疫法》的實施，特制定本標準。本標準的附錄A、附錄B為標準的附錄，附錄C為提示的附錄.本標準由中華人民共和國農業部提出。本標準由全國動物檢疫標準化技術委員會歸口本標準起草單位：中國農業科學院上海家畜寄生蟲病研究所、中國農業科學院蘭州獸醫研究所本標準主要起草人：黃兵、陳兆國、白啟

中華人民共和國國家標準GB/T18647-2002動物球蟲病診斷技術Diagnostictechniquesforanimalcoccidiosis適用范圍本標準規定了動物球蟲病的病原檢查和綜合診斷技術本標準適用于禽類和免的球蟲病(感染)的診斷。病原檢查21材料準備2.1.1飽和鹽水.配制方法見附錄A(標準的附錄）2.1.260目銅絲網或尼龍網、100mL量杯、50mL和100mL燒杯、5mL玻璃瓶、吸管、攝子、天平、離心機、麥氏蟲卵計數板、載玻片、蓋玻片、顯微鏡等。2.1.3被檢動物或動物群的新鮮糞便不少于200g。2.2操作方法2.2.1定性檢查2.2.1.1取被檢動物或動物群的新鮮糞便10g.放入50mL燒杯中，加入適量水2.2.1.2輕輕攪勺，經60目銅絲網或尼龍網過濾。2.2.1.3將濾液移人4支10mL～15mL試管,2500r/min離心10min。2.2.1.4傾去上清液,各管沉淀物中加入少量飽和鹽水.混勾。各管的沉淀物混懸液移入一個5mL玻璃瓶。2.2.1.5用飽和鹽水(見附錄A)加滿·蓋上蓋玻片(蓋玻片須能與液面接觸）,靜置10min2.2.1.6取下蓋玻片.放在載玻片上。2.2.1.7暨載玻片于顯微鏡臺上.用10×10或10×40的倍數進行檢查2.2.1.8判定：a）發現球蟲卵囊,判為陽性，說明該動物(群)已感染球蟲，并可根據附錄C(提示的附錄)卵囊形態特征·初步確定為哪一屬的球蟲；b）未發現球蟲卵囊，需重復檢查5次,仍未見球蟲卵囊，本糞樣可判為陰性。只有連續檢查糞便7d～10d,均未發現球蟲卵囊，方可說明該動物(群)未感染球蟲。2.2.2定量檢查2.2.2.1對定性檢查中呈陽性的糞樣，要進行定量檢查2.2.2.2取待檢糞樣2g·放入50mL燒杯。2.2.2.3加入少量自來水攪勾.經60目銅絲網或尼龍網過濾,并用自來水沖洗幾次濾網2.2.2.4濾液經2500r/min離心10min。2.2.2.5用少量飽和鹽水將沉淀物攪勾，移入100mL量杯·加飽和鹽水至60mL處·充分混勾2.2.2.6用吸管吸取混懸液注滿麥氏蟲卵計數板，靜置5mi