犐犆犛１１．２２０

犅４１

中華人民共和國國家標準

犌犅／犜１８０８９—２００８

代替ＧＢ／Ｔ１８０８９—２０００

藍舌病病毒分離、鑒定及血清中和

抗體檢測技術

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２００８１２３１發布２００９０５０１實施

中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局

發布

中國國家標準化管理委員會

書

犌犅／犜１８０８９—２００８

前言

本標準代替ＧＢ／Ｔ１８０８９—２０００《藍舌病微量血清中和試驗及病毒分離和鑒定方法》。

本標準與ＧＢ／Ｔ１８０８９—２０００相比主要變化如下：

———對標準名稱進行了修改；

———刪除了藍舌病病毒鑒定中的病毒中和試驗部分；

———增加了病毒鑒定中ＲＴＰＣＲ方法的鑒定。

本標準的附錄Ａ為規范性附錄。

本標準由中華人民共和國農業部提出。

本標準由全國動物防疫標準化技術委員會歸口。

本標準起草單位：中華人民共和國云南出入境檢驗檢疫局、中華人民共和國深圳出入境檢驗檢

疫局。

本標準主要起草人：周曉黎、楊建明、艾軍、花群義、楊曉花、張其艷、嚴樹發、董俊、葉玲玲、徐維加。

本標準所代替標準的歷次版本發布情況為：

———ＧＢ／Ｔ１８０８９—２０００。

Ⅰ

書

犌犅／犜１８０８９—２００８

藍舌病病毒分離、鑒定及血清中和

抗體檢測技術

１范圍

本標準規定了藍舌病病毒分離、鑒定及血清中和抗體檢測的技術。

本標準適用于藍舌病病毒的分離、鑒定及動物感染藍舌病病毒后血清中和抗體的檢測。

２符號和縮略語

下列符號和縮略語適用于本標準。

ＢＨＫ２１———幼倉鼠腎細胞株；

ＢＬＰ———乳糖蛋白胨緩沖肉湯；

ＢＴ———藍舌?。?/p>

ｂｐ———堿基對；

ＣＰＥ———致細胞病變作用；

Ｃ６／３６———蚊子細胞株；

ＤＥＰＣ———焦碳酸二乙酯；

ＳＰＦ———無特定病原體；

ＴＣＩＤ５０———半數組織培養感染量；

Ｖｅｒｏ———非洲綠猴腎細胞株。

３藍舌病病毒分離

３．１材料

１０日齡～１１日齡ＳＰＦ雞胚。

３．２設備與器材

雞胚開孔器、照蛋燈或照蛋箱、乳缽或組織搗碎器、倒置顯微鏡。

３．３試驗程序

３．３．１樣品

肝素抗凝血（每５ｍＬ血液用１０ＩＵ肝素）、臟器（脾、肝、腎、淋巴結）、精液、庫蠓。用于病毒分離的

樣品應置冷藏容器中保存，在２４ｈ內送到實驗室，并立即進行處理。

３．３．２血液樣品制備

取肝素抗凝血５ｍＬ，用磷酸鹽緩沖液（ＰＢＳ，配方見附錄Ａ）洗滌血樣３次～４次，每次２０００ｒ／ｍｉｎ

離心１０ｍｉｎ，棄上清液后加入倍量ＢＬＰ（配方見附錄Ａ），置冰浴中用超聲波處理（４０μＡ、１ｍｉｎ）。經處

理的樣品當天使用，使用前置４℃保存，剩余樣品置－７０℃保存備用。

３．３．３組織樣品制備

無菌采集動物脾、淋巴結、肝、腎各５ｇ，剪碎后加入ＢＬＰ１０ｍＬ（含青霉素２０００ＩＵ／ｍＬ、鏈霉素

２０００μｇ／ｍＬ），置乳缽中研磨，４℃冰箱中浸提４ｈ，取上清液５ｍＬ用超聲波裂解處理（１００μＡ、１ｍｉｎ～

２ｍｉｎ）或凍融三次，３０００ｒ／ｍｉｎ離心２０ｍｉｎ，取上清液使用，使用前置４℃保存，剩