光學顯微鏡基礎知識光學顯微鏡基礎知識顯微鏡的光學原理象差顯微鏡的技術參數顯微鏡的光學部件基礎知識第二頁，共90頁。顯微鏡成像FF’物鏡第三頁，共90頁。顯微鏡成像FF’物鏡第四頁，共90頁。顯微鏡成像物鏡250mm＝明視距離FF’目鏡第五頁，共90頁。基礎知識光學顯微鏡基礎知識顯微鏡的光學原理像差顯微鏡的技術參數顯微鏡的光學部件第六頁，共90頁。理想成像點

標本投影圖像點平面平面圖形準確

相似

圖形像差第七頁，共90頁。實際圖形點

標本投影圖像虛的圓

平面彎曲的面圖形變形的圖形像差第八頁，共90頁。象差的種類球差象散慧差畸變場曲色差基礎知識第九頁，共90頁。象差球差象散慧差場曲負畸變正畸變基礎知識第十頁，共90頁。場曲基礎知識基礎知識ACHPLANACH第十一頁，共90頁。場曲

ＡＣＨＰＬ第十二頁，共90頁。色差基礎知識色差校正對照第十三頁，共90頁。色差校對無校對

校對

第十四頁，共90頁。基礎知識光學顯微鏡基礎知識顯微鏡的光學原理像差顯微鏡的技術參數顯微鏡的光學部件第十五頁，共90頁。顯微鏡的技術參數數值孔徑分辨率工作距離焦深放大倍率同焦距同軸度基礎知識第十六頁，共90頁。數值孔徑()基礎知識第十七頁，共90頁。分辨率基礎知識ΔR=kλ/NAΛ：波長NA：數值孔徑K常數:K光鏡；KFV第十八頁，共90頁。數值孔徑大分辨率高基礎知識第十九頁，共90頁。NA與焦深基礎知識第二十頁，共90頁。工作距離()基礎知識第二十一頁，共90頁。工作距離不需要蓋玻片

有蓋玻片第二十二頁，共90頁。同焦距（齊焦距離)基礎知識第二十三頁，共90頁。同軸度基礎知識比如10倍物鏡下的中心轉換到40倍是仍然幾乎是中心第二十四頁，共90頁。柯勒照明和臨界照明基礎知識第二十五頁，共90頁。臨界照明

柯勒照明基礎知識第二十六頁，共90頁。厚標本和薄標本4-5um2um基礎知識第二十七頁，共90頁。基礎知識光學顯微鏡基礎知識顯微鏡的光學原理像差顯微鏡的技術參數顯微鏡的光學部件第二十八頁，共90頁。顯微鏡的主要光學部件物鏡目鏡聚光鏡基礎知識第二十九頁，共90頁。物鏡基礎知識第三十頁，共90頁。物鏡的種類按色差和場曲校正程度分:消色差物鏡（Ach)平場消色差物鏡(PlanAch)平場半復消色差物鏡(Plan-FL或PLFL）平場復消色差物鏡（PlanApo)平場超級復消色差物鏡（PlanSApo)基礎知識第三十一頁，共90頁。VIS－

NIR范圍內優異的色差校正信噪UPLSAPO物鏡第三十二頁，共90頁。消色差Ach –藍

(486nm)和紅

(657nm)半復消色差Fluorite –蘭和紅

+(綠,紫色(437nm))復消色差Apo –437-657nm超級復消色差SuperApo –430-1000nm物鏡的色差校正軸向色差側向色差ACH第三十三頁，共90頁。消色差Ach –藍

(486nm)和紅

(657nm)半復消色差Fluorite –蘭和紅

+(綠,紫色(437nm))復消色差Apo –437-657nm超級復消色差SuperApo –430-1000nm物鏡的色差校正軸向色差側向色差ACHFL第三十四頁，共90頁。IRIR消色差Ach –藍

(486nm)和紅

(657nm)半復消色差Fluorite –蘭和紅

+(綠,紫色(437nm))復消色差Apo –437-657nm

超級復消色差SuperApo –430-1000nm物鏡的色差校正軸向色差側向色差ACHFLApo第三十五頁，共90頁。消色差Ach –藍

(486nm)和紅

(657nm)；綠球差半復消色差Fluorite –蘭和紅

+(綠,紫色(437nm))；綠、蘭球差復消色差Apo –437-657nm，綠、蘭、深蘭球差超級復消色差 –430-1000nmSuperApo物鏡的色差校正軸向色差側向色差ACHFLSApoIRIRApo第三十六頁，共90頁。消色差物鏡基礎知識復消色差物鏡半復消色差物鏡第三十七頁，共90頁。傳統物鏡的符號基礎知識第三十八頁，共90頁。新物鏡的符號基礎知識第三十九頁，共90頁。其它物鏡基礎知識浮雕相稱物鏡無應力偏光物鏡相稱物鏡超低倍物鏡第四十頁，共90頁。帶校正環物鏡基礎知識第四十一頁，共90頁。對載波片和蓋玻片厚度的要求基礎知識載玻片:0.9-1.4mm蓋玻片:0.17mm第四十二頁，共90頁。無蓋片物鏡基礎知識第四十三頁，共90頁。物鏡光闌的運用光闌全開啟光闌適當關小——熒光觀察中應用第四十四頁，共90頁。目鏡基礎知識第四十五頁，共90頁。目鏡的視場基礎知識F.N.22第四十六頁，共90頁。標本的視場直徑標本的視場直徑=目鏡視場數/物鏡倍率

例:WH10X目鏡視場數為22物鏡為UPLFL40X視場直徑基礎知識第四十七頁，共90頁。聚光鏡第四十八頁，共90頁。顯微鏡的調節瞳距調節屈光度調節光路轉換聚光鏡中心孔徑光欄設置第四十九頁，共90頁。瞳距調節第五十頁，共90頁。屈光度調節調節第五十一頁，共90頁。光路轉換100%80%20%100%第五十二頁，共90頁。聚光鏡中心調節⑤光軸中心調節螺釘③視場光闌③孔徑光闌②10X物鏡①標本④聚光鏡升降旋鈕第五十三頁，共90頁。孔徑光欄調節N.A聚=(0.6-0.8)N.A物第五十四頁，共90頁。孔徑光欄開度與圖象100%70%30%HRLCHCLRMRMC第五十五頁，共90頁。孔徑光欄的運用第五十六頁，共90頁。孔徑光欄的運用對比度調節第五十七頁，共90頁。奧林巴斯顯微鏡無限遠光學系統——UIS第五十八頁，共90頁。顯微鏡無限遠光學系統——UIS

有限遠無限遠UIS光學系統第五十九頁，共90頁。MeritoftheInfinitysystem

物鏡

D/M重影平行光線結像透鏡第六十頁，共90頁。第六十一頁，共90頁。UIS系統

Universal

Infinity

System————萬能無限遠系統1.完美結合分辨率和對比度

-明場高分辨率 -高對比度、高亮度圖像 -清晰的

DIC圖像 -更敏感的偏光觀察 -清晰、色彩明亮的相襯第六十二頁，共90頁。UIS系統Universal

Infinity

System2.系統靈活性 -無限遠校正光學系統 -物鏡和結像透鏡完全校正3.物鏡萬能性更強 -AsingleuniversalobjectivelensperformsverywellinFluorescence,NomarskiDIC,Phasecontrast,Polarizedlightand,ofcourse,Brightfield -HighUVtransmission,Strain-free,PerfectcorrectionofChromaticaberrationandotheropticalaberrations

第六十三頁，共90頁。Competitioncomparison

F:FullyPrimaryCorrectioninobjective&tubelens

Tc:Tube-lensCompensation第六十四頁，共90頁。奧林巴斯顯微鏡無限遠光學系統——UIS增加附件，光路不變，倍率不變，F.N.不變中間附件設計更簡單，不需增加透鏡物鏡單獨完成象差校正，象差校正更高，不需目鏡補償更高鏡像亮度，熒光效果更好（結象透鏡校正）接視頻效果更好，不需增加照相目鏡第六十五頁，共90頁。第六十六頁，共90頁。相差觀察方式1原理利用被檢物體的光程（折射率x厚度）差進行鏡檢，即利用干涉現象，將相位差變為人眼可以分辨的振幅差共軛面：吸收光線，直射光通過補償面：相位推遲，衍射光通過物鏡相板聚光鏡環狀光闌第六十七頁，共90頁。相差觀察方式2特點鑒定活體細胞最實用、最經濟的方法3缺點需要光強高切片不能太厚(2~10um)蓋片、載片需符合標準最好配用單色濾光鏡操作較麻煩熒光效果不如明場物鏡第六十八頁，共90頁。相差觀察方式4應用：

無色透明活體標本的細微結構，檢查,鑒定活體細胞(培養細胞,分離細胞)第六十九頁，共90頁。相差觀察方式5調節：柯勒照明調節將相差物鏡及附件轉入光路（物鏡－聚光鏡相襯環型號匹配）對樣品聚焦取下目鏡，裝上CT望遠鏡，調節CT焦距看到清晰的相差環調節聚光鏡上定位螺絲，使環狀光闌象與相板共軛面重合第七十頁，共90頁。熒光觀察方法第七十一頁，共90頁。什么是熒光?物質中的電子吸收光的能量由低能狀態轉變為高能狀態，再回到低能狀態時釋放出的光，是非溫度輻射光——冷光。即：物質吸收短波光，發射出的長波光。顯微鏡熒光利用光源激發——光化熒光第七十二頁，共90頁。熒光顯微鏡的作用原理寬譜線發射光（汞燈）濾掉其他光，透過激發光激發濾色片吸收濾色片濾掉激發光，透過熒光標本受激發產生熒光向四周發散激發光受反射、折射或衍射向四周發散第七十三頁，共90頁。熒光的性質吸收光，必需有激發光源熒光波長＞激發波長（損失熱能）熒光強度極小于激發光的強度有不同程度的衰減熒光強度取決于激發光強度、被檢物濃度、熒光效率第七十四頁，共90頁。熒光顯微鏡的優點和用途優點：檢出能力高（放大作用）對細胞的刺激小（可以活體染色）能進行多重染色用途：物體構造的觀察——熒光素熒光的有無、色調比較進行物質判別——抗體熒光等發熒光量的測定對物質定性、定量分析第七十五頁，共90頁。熒光顯微鏡的主要部件

透射式吸收濾色鏡暗場聚光鏡激發濾色鏡汞燈光源 落射式吸收濾色鏡分光鏡激發濾色鏡汞燈光源第七十六頁，共90頁。落射熒光顯微鏡的構造吸收濾色鏡激發濾色鏡第七十七頁，共90頁。落射熒光顯微鏡的構造第七十八頁，共90頁。熒光顯微鏡光源

汞燈光源:提供激發光(U、V、B、G)

氙燈光源：高峰值更寬，更穩定第七十九頁，共90頁。熒光顯微鏡激發透鏡組

激發濾色鏡:激發波長選擇

激發透鏡組（激發塊）:

T%nmBANDPASS入射光發射光激發濾色鏡分光濾色鏡吸收濾色鏡第八十頁，共90頁。落射熒光顯微鏡各部件特性和作用吸收濾色鏡:熒光透過,阻擋雜光分色鏡:反射激發光,熒光透過＞A透過A＜A反射B＞B透過＜B阻擋nmnmT%T%A第八十一頁，共90頁。濾色鏡的選擇熒光素的特性濾色鏡的特性激發分色吸收第八十二頁，共90頁。帶寬對圖象的影響SWB:BP420-480WB:BP450-480WIB:BP460-490NB:B