XXXXX制藥有限公司培養基無菌灌裝模擬試驗再驗證方案文件編號： YZML101P-09所在車間： 凍干粉針車間起草人：日期：2009年6月25日審核人：日期：2009年7月04日批準人：日期：2009年7月05日驗證方案的起草與審批驗證方案的起草起草人部門日期驗證方案的審批審核人部門日期批準人部門日期驗證進度計劃提出完整的驗證計劃，經驗證小組批準后實施，整個驗證活動分三個階段完成。驗證過程起始日期結束日期驗證方案2009年6月1日2009年7月5日驗證過程2009年7月9日2009年7月31日驗證報告2009年8月01日2009年8月15日驗證方案目錄TOC\o"1-5"\h\z\o"CurrentDocument"第一部分:概述 4\o"CurrentDocument"1、 驗證目的 4\o"CurrentDocument"2、 驗證概述 4\o"CurrentDocument"3、 驗證領導小組分工及職責 4\o"CurrentDocument"4、 被模擬工藝 5\o"CurrentDocument"5、 模擬試驗中使用的設備設施 6\o"CurrentDocument"6、 培養基的選擇 6\o"CurrentDocument"7、 微生物培養條件 7\o"CurrentDocument"8、 工藝模擬的批量，批次 7\o"CurrentDocument"9、 灌裝體積、灌裝速度及灌裝用容器的確定 7\o"CurrentDocument"10、 驗證最差條件 711、 可接受的合格標準 8\o"CurrentDocument"第二部分:試驗實施 9\o"CurrentDocument"1、 試驗實施前的準備工作 9培養基無菌性試驗 9培養基促生長試驗 9無菌環境控制與監測 9\o"CurrentDocument"2、 試驗實施過程 11廠房、空間清潔 11試驗相關工序準備 12培養基配置、除菌過濾過程 12模擬灌裝 12模擬凍干 13\o"CurrentDocument"軋蓋 13微生物培養 13\o"CurrentDocument"3、 蓋膠塞密閉系統挑戰試驗 15\o"CurrentDocument"4、 偏差的處理 15\o"CurrentDocument"5、 試驗結果分析與評估 16\o"CurrentDocument"6、 驗證的維護 17第一部分：概述1、 驗證目的評價一個無菌工藝操作能力的最有用的方法之一是工藝模擬，其提供了一個可能影響最終產品無菌的無菌工藝操作變更進行評價的方法，它可以用于鑒別無菌操作工藝中，可以導致產品微生物污染的潛在缺陷，通過模擬無菌凍十粉針的灌裝試驗，證明凍十粉針灌裝過程中所采用的無菌灌裝工藝參數和相關的SOP對于防止微生物污染水平達到可接受的合格標準，或提供保證所生產產品的無菌性的可信限度達到可接受的合格標準的證據。無菌工藝人員的資格和保證，以及驗證生產系統的要素（包括廠房、公用系統、設備）和生產過程中工藝變化因素（物料、人員、方法）對產品質量，尤其是無菌結果影響的程度，以證明以后在正常生產條件下能生產出符合規定標準的無菌產品。2、 驗證概述凍十粉針生產線主要包括膠塞清洗機、超聲波洗瓶機、隧道烘箱、灌裝機、軋蓋機，和貼簽機。根據GMP的要求，在廠房、設施、設備均已經過全面驗證的情況下，且操作人員熟練掌握了崗位SOP后，用大豆胰蛋白胨消化肉湯培養基代替無菌原料進行了模擬灌裝培養基試驗，可以直觀、方便、準確地反映出無菌灌裝過程的污染情況及問題。本次驗證在第一次驗證通過的基礎上進行的再驗證，根據再驗證安排，車間經過六個生產后，再次考察車間的無菌保證。3、 驗證領導小組分工及職責公司成立驗證領導小組，負責所有驗證工作的領導和組織，負責審批驗證方案和驗證報告。驗證領導小組針對每一個具體驗證項目成立專門驗證工作小組，負責該驗證項目的驗證方案起草、實施、組織與協調，負責驗證結果記錄與評定，負責完成驗證報告。3.1驗證小組成員姓名部門及職務驗證工作中職責車間主任負責組織本驗證方案的實施工作車間技術員負責起草驗證方案、報告，驗證過程中的技術監控生產部長負責協調本驗證方案的實施工作質量部長負責審核驗證方案、報告設備部長負責執行驗證中設備工程部的各項工作化驗室主任負責生產檢驗工作，出具檢驗報告單QA負責生產過程中的監控3.2驗證小組職責負責驗證方案的制定和實施。負責驗證工作的組織與協調。負責驗證數據的搜集和結果評定。3.3生產技術部職責負責進行生產，進行驗證的實施。負責起草標準操作規程。負責擬訂監測項目及驗證周期。3.4設備安全部職責負責起草設備標準操作規程。協助起草維修保養標準規程。協助生產技術部進行設備的操作。協助擬訂監測項目及驗證周期。3.5質量管理部職責負責起草驗證項目的合格標準、檢驗規程。負責有關驗證項目的檢驗，并根據檢驗結果出具檢驗報告單。負責驗證方案和驗證報告的審核。負責審核監測項目及驗證周期。4、被模擬工藝本方案被模擬的工藝為注射用凍干粉針生產工藝過程，該工藝過程包含的步驟如下：洗瓶、洗膠塞滅菌、配制、除菌過濾、灌裝、凍干、軋蓋。在該工藝中，主藥為固體粉末，通過配液變為液體，經除菌過濾后直接灌裝，灌裝使用管制注射劑瓶盛裝，半加凍十用膠塞后進行凍干，凍干完成，全壓膠塞出箱，通過輸送帶轉運至軋蓋進行軋蓋操作。5、模擬試驗中使用的設備設施5.1設施萬級非無菌區（一）、萬級非無菌區（二）、萬級無菌區的全部房間5.2灌裝生產線被模擬工藝生產使用的生產線共計一條，該生產線的平均線速度約為180瓶/分鐘，在該生產線中，關鍵設備灌裝機共計1臺，該生產線的全部設備詳見清單如下：編號設備名稱規格型號數量生產能力t-LrN岡位備注材質1超聲波洗瓶機KZCX一臺300瓶/分鐘洗瓶不銹鋼2全自動膠塞清洗機KJCS-8D一臺80000只/箱膠塞不銹鋼3紅外線隧道烘箱SH-3一臺30000瓶/時火菌不銹鋼4高速液體灌裝機SYG-240一臺240瓶/分鐘灌裝不銹鋼5灌裝機KBG一臺120?140瓶/分灌裝不銹鋼6軋蓋機KGL120瓶/分鐘軋蓋不銹鋼7自動貼簽機KK-91615000瓶/小時包裝不銹鋼8熱風循環烘箱RXH系列一臺2萬只/次烘鋁蓋不銹鋼9洗衣機XGB-15E30套/柜洗衣不銹鋼10自動干衣機GDZ-15E30套/柜洗衣不銹鋼11濃配罐316L200L一臺200L/次配料不銹鋼12稀配罐316L250L一臺250L/次配料不銹鋼13真空冷凍干燥機LYO-13一臺27000支/箱凍十不銹鋼14真空冷凍干燥機LYO-20一臺40000支/箱凍十不銹鋼6、 培養基的選擇在日常的環境監測以及產品的無菌監測中沒有發現確定的厭氧菌，故無需考慮模擬實驗的厭氧條件，所以培養基選擇大豆胰蛋白胨消化肉湯培養基。7、 微生物培養條件培養溫度：20-35°C培養時間：14天（20?25C,7天；30?35C,7天）?在整個培養周期內，溫度可控制，并被監測。8、 工藝模擬的批量、批次常規批產量在100000?3000瓶之間，模擬產量應盡可能的接近批產量，在此基礎上，車間的實際常規生產批量為27000瓶、40000瓶，據此選擇批模擬產量15000瓶作為該實驗的批產量，共3批。9、 灌裝體積、灌裝速度及灌裝用容器的確定?在被模擬的上產線上，灌裝體積有以下幾種規格：1ml、2ml、2.5ml、2.8ml、3ml，在分析受污染幾率上，3ml的灌裝體積無疑是幾率最大的一個，故選擇為3ml作為模擬試驗灌裝體積。?在正常生產中，該灌裝生產線使用的瓶子規格有7ml、10ml，，在使用者兩種情況下，灌裝機由于適應性原因，其設定有所不同，在本試驗中，三次驗證中的兩次選用10ml瓶子，一次選用選用7ml瓶子作為本次驗證所使用灌裝容器。?本生產線的線速度在80?220瓶/分鐘之間，在模擬試驗時，灌裝速度應設置在灌裝速度范圍的低端，增加灌裝時間，增大收污染的幾率。10、 驗證最差條件10.1最差條件選擇原理根據以上的敘述，總結最差條件設置的原理：在最長的灌裝時間、使用的容器具、容器超出正常的最長存放時間、無菌關鍵控制區域內操作人員數量超出正常數量以及不正常干擾來造成最差的工作狀態，以最慢的灌裝速度增加瓶子、膠塞暴露時間來增加無菌操作污染的幾率。10.2最差狀態條件：?灌裝最長時間6h?灌裝時干擾次數，100次（灌裝時倒瓶：20次、跳膠塞：25次、設備故障：20次、人員影響：35次）灌裝速度，以7ml、10ml瓶子、灌裝體積：3ml計，60支/分鐘。?灌裝批量：15000支。兩臺凍十機，每臺放三層。?灌裝時人員數量：8人。?模擬凍干過程：6小時，溫度在20-25C時抽真空大于1000毫帕。

11、可接受的合格標準11.1培養基灌裝試驗合格標準（允許的最大污染率）如下表:BatchsizeResultevaluation<5000如有1瓶污染，調查并再驗證500010000如有1瓶污染，調查并重復培養基灌裝>10000如有1瓶污染，進行調查11.2關鍵區域沉降菌、浮游菌監測合格標準級別浮游菌Cfu/m3沉降菌（90mm）Cfu/4小時表面微生物接觸碟（55mm）Cfu/碟5指手套Cfu/手套A級<1<1<1<1B級10555C級1005025-D級20010050-11.3懸浮粒子監測潔凈級別懸浮粒子最大允許數/立方米靜態動態N0.5PmN5MmN0.5PmN5MmA級3500135001B級350013500002000C級3500002000350000020000D級350000020000不作規定不作規定11.4表面菌落監測項目標準操作人員于手套全部檢查出菌落＜2個，操作者雙臂、前胸3個取樣點檢查出菌落數之和＜10個。設備表面膠塞振蕩器、料液桶和灌裝機零部件均不得有菌生長。墻壁、門墻壁、門細菌數^10個，霉菌數^2個。瓶子中轉轉盤、灌裝機外表面和輸送帶細菌、霉菌數^1個。第二部分：試驗實施1、試驗實施前的準備工作1.1培養基無菌性試驗本試驗在培養時同步進行，用于本測試使用的培養單元在使用前經過與灌裝試驗用單元的工藝步驟相同的處理。處理完畢，在無菌環境下，取20支已滅菌瓶子，倒入適量用于無菌灌裝試驗的已滅菌培養基溶液，其中10支于30?35°C，另10支于20?25°C，培養14天，逐日觀察，各試管均應無任何微生物生長。培養基無菌性試驗記錄一-----------一天數項目 -123456789101112131430?35C20?25C檢測人： 日期： 復核人： 日期:1.2培養基促生長試驗本試驗在培養時同步進行，用于本測試使用的培養單元在使用前經過與灌裝試驗用單元的工藝步驟相同的處理。處理完畢，在無菌環境下，取20支已滅菌瓶子，倒入適量用于無菌灌裝試驗的已滅菌培養基溶液，接種在日常監測中分離出的微生物，其中10支于30?35C，另10支于20?25C培養48小時，逐日觀察，各試管對微生物生長應無抑制。培養基促生長試驗記錄-...項目天數■■■-1234567891030?35C24h48h20?25C24h48h檢測人： 日期： 復核人： 日期:1.3無菌環境控制與監測1.3.1操作人員微生物控制與監測模擬灌裝試驗及正常灌裝生產時應對操作人員的無菌服、手套、眼鏡、胸前、前臂等部位的微生物數量進行監測，手套全部檢查出菌落＜2個，操作者雙臂、前胸3個取樣點檢查出菌落數之和＜10個。

操作人員微生物控制與監測墻壁、門、設備表面的微生物檢驗（操作者較易觸摸的區域）。?灌裝前、后對接觸藥粉的灌裝機零部件進行擦拭取樣。?模擬灌裝過程中，分別對墻壁、門、設備表面、膠塞振蕩器、輸送帶和料液桶進行擦拭取樣。?取樣面積：100cm2/點。?取樣點：灌裝機外表面每臺2個，灌裝間門2個，墻壁2個，膠塞振蕩器每臺機1個，輸送帶3個，料液桶3個。?其中膠塞振蕩器、原料桶和灌裝機零部件按無菌檢驗操作，其它按微生物限度檢查操作。做細菌、霉菌檢查分別在兩個鄰近取樣點取樣。?合格標準：膠塞振蕩器、料液桶和灌裝機零部件均不得有菌生長。墻壁、門細菌數^10個，霉菌數^2個。瓶子中轉轉盤、灌裝機外表面和輸送帶細菌、霉菌數^1個。取樣點編號位置編號灌裝機（灌裝前）GQ-1GQ-2膠塞振蕩器ZD-1ZD-2輸送帶SSD-1SSD-2SSD-3料液桶LYT-1LYT-2LYT-3灌裝機（灌裝后）GH-1GH-2墻壁QB-1QB-2門M-1M-2設備表面微生物控制與監測記錄批號:編號監控結果批號:編號監控結果GQ-1ZD-1SSD-1SSD-3LYT-2GH-1QB-1M-1編號監控結果GQ-2ZD-2SSD-2LYT-1LYT-3GH-2QB-2M-2檢測人： 日期： 復核人： 日期:沉降菌監測（模擬灌裝過程同時進行）為評估無菌操作區的微生物狀況，應對微生物進行動態監測。檢測方法采用沉降碟法，在模擬灌裝過程同時進行，監測結果記錄附在批生產記錄之后。膠塞、玻璃瓶的無菌性檢驗：在模擬試驗進行中，每一小時在灌裝機的振蕩器內取膠塞5只，隧道烘箱出口的轉盤中取玻璃瓶5只，做細菌和霉菌檢查，均應不長菌。膠塞、玻璃瓶的無菌性檢驗記錄批號瓶子膠塞檢測人： 日期： 復核人： 日期：2、 試驗實施過程2.1廠房、空間清潔按清潔規程對潔凈區設備和空間進行清潔衛生，按《潔凈區臭氧消毒標準操作規程》對潔凈區消毒。清潔消毒后，動態檢查潔凈區主要操作間的沉降菌。其結果符合相應潔凈級別的標準。2.2試驗相關工序準備模擬灌裝試驗中使用的瓶子、膠塞的清洗、滅菌，灌裝設備的清洗、消毒及產品接觸的灌裝設備部件的清潔、滅菌、安裝過程均應遵循標準操作規程。參加模擬灌裝的操作人員應經過GMP、無菌操作、無菌更衣技術培訓。2.3培養基配制、除菌過濾過程?除菌過濾器用2%NaOH溶液浸泡半小時以上，注射用水洗滌三遍后，將濾膜（起泡點試驗合格的0.22um微孔濾膜）與過濾器裝好，也放于膠塞清洗間的新華高壓蒸汽滅菌柜中121°C、30min滅菌后備用。?濃配罐、稀配罐需純蒸汽滅菌。121C、30min備用；?配置量、原料量計算：按照大豆胰蛋白胨消化肉湯培養基配置標準每30g加注射用水1000ml的要求，配置45L，需要培養基十粉1325g，配制完成培養基濃度為3%。?配制步驟一：稱量1325g培養基十粉至粗配罐中，向罐中加注射用水30000ml，加熱攪拌至使其溶解。?配制步驟二：停止攪拌，打開輸送泵將營養液輸送至稀配罐中，加注射用水定溶至45L，除菌過濾：將滅菌好的兩個濾盤（經過起跑點試驗合格）串聯連接好，進行除菌過濾。將過濾后的料液進行取樣，送生測室進行無菌檢查。2.4模擬灌裝2.4.1灌裝前準備工作要求?操作人員經過GMP、無菌操作、無菌更衣技術培訓，并經考核合格。?室內操作人數與正常生產相比較多出一人。?玻璃瓶、膠塞、鋁蓋、無菌衣等按正常生產洗滌滅菌。潔凈區全面清潔，將頂棚、四壁、門、機器、臺面、地面用專用絲光毛巾醮消毒液，按以上順序清潔，空調系統運行24小時后可進入潔凈區從事生產操作。操作人員必須按規定的洗手更衣程序進入潔凈區，百級應戴無菌手套，不準進行裸手直接接觸藥品的操作。?所用玻璃容器、玻璃棒、量筒、硅膠管、不銹鋼桶、灌裝頭等，在使用前用0.5mol/LNaOH溶液浸泡半小時以上，再用純化水沖洗至PH值為7-7.5,然后用注射用水淋洗三遍。?每天生產批量15000支，連續生產3批次。2.4.2灌裝過程?按《灌裝機標準操作規程》調試好設備，待瓶子送到時調整裝量，使每瓶灌裝量在3ml。?調整灌裝速度至60瓶/分鐘；?灌裝過程中所有的正常操作必須包含，如調整裝量，取樣、檢查裝量差異，半蓋膠塞。另外按照方案設計，在灌裝過程中增加人為干擾因素，如：停機，調整設備、維修設備等操作。2.5模擬凍干將灌裝后的灌裝品盛裝于無菌不銹鋼盤中，傳至凍十箱擱板，每臺凍十機擺放三層，關閉箱門，進行制品凍十模擬試驗。凍干溫度5。溫度在20-25^時抽真空大于2000毫帕，注意觀察，防止培養基沸騰造成試驗失敗，和影響活菌的微生物培養。整個凍十模擬時間約6小時。2.6軋蓋模擬凍干結束啟動凍干機液壓系統，對制品進行全壓塞，并出箱將制品傳至通往軋蓋室的轉運轉盤。軋蓋后，檢出外觀不合格品并計算批灌裝量，以保證最后能得到15000支用于微生物培養。2.7微生物培養2.7.1陰性對照:模擬灌裝過程，取10個無菌玻璃瓶，按無菌操作法，裝入滅菌后的培養基，在30?35。培養7天，作為陰性對照。2.7.2陰性對照結果記錄檢測人： 日期： 復核人： 日期:2.7.3陽性對照:模擬灌裝過程，隨機取出40支已灌裝的玻璃瓶，10支接種濃度＜100個微生物/1ml的枯草芽孢桿菌，10支接種濃度＜100個微生物/1ml的白色念珠菌，

10支接種濃度＜100個微生物/1ml的金葡菌。分別在30?35°C和20?25°C下培養7天，接種玻璃瓶的培養基中應有明顯的接種微生物生長，并以此作陽性對照。陽性對照結果記錄批號:天數項目1234567891011121314枯草芽孢桿白色念珠菌金色葡萄球菌黑曲霉菌檢測人： 日期： 復核人： 日期:2.7.4試驗樣品培養：?試驗樣品培養采用人工讀數倒轉后培養的方法進行，操作為在軋蓋后人工計數，同時將每支樣品旋轉180o。?樣品先在20?25C下培養7天，檢查培養基中微生物的生長情況，再在30?35C下培養7天。再檢查全部樣品的微生物生長情況。若發現有微生物生長，明確記錄瓶號、瓶數，同時檢查瓶體的破裂及鋁蓋、膠塞的密封情況。若有破損應記錄破損數并檢查其破損原因。對于有微生物生長的樣品，應監別其菌落、細胞學形態學及革蘭氏染色特性等。?試驗樣品培養所在的區域溫濕度應該可控，并每天兩次。微生物培養間溫濕度記錄3、 蓋膠塞密閉系統挑戰試驗?配制一定量的營養肉湯培養基經滅菌后，將此培養基倒入已滅菌的容器中，再將此培養基于35°c下接種大腸桿菌并在30?35°C下培養48h,當培養基出現渾濁時，測定大腸桿菌在培養基中的濃度。?灌裝蓋塞軋蓋后，隨即取50支將其倒置成水平狀浸入上述菌液中，再在該溫度下培養14天，然后將供試品升高脫離菌液，分別用水及消