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第第頁125I標記單克隆抗體技術125I標記單克隆抗體技術

同位素標記是一種重要的抗體標記技術，牨977年Yalow等在放射免疫測定法所作突出貢獻而獲得醫學和生理學諾貝爾獎。McAb標記同位素后除應用于放射免疫測定外，還可用于競爭結合試驗、體內腫瘤定位等。

一原理

氯胺桾即對甲苯碘氯胺鈉，在水溶液中生成次氯酸，為一種溫柔氧化劑，當加入到有蛋白質和碘的弱堿水溶液中，可將I２氧化為I＋并結合到氨基酸上。如標記條件溫柔，標記后的McAb仍具有良好的結合活性，通過放射性同位素強度的測定可反映相應抗原的含量。

二方法

在細胞凍存管內加入純化的McAb100g／100l，

再加入10l0.05M磷酸緩沖液

再加入10l含1mCi125I

加入10l氯胺-T5mg／ml溶于0.05M

磷酸鹽緩沖液，孵育時間不超過30秒

加入100l偏重亞硫酸鈉1.2mg／ml溶于

0.05M磷酸緩沖液

加入200lKI溶液少許結晶KI溶于0.05M

磷酸緩沖液＋4％牛血清白蛋白

用PD10柱SephadexG25除去游離125I

用4％BSAPBS洗脫

分部收集，0.5ml／管

每管取5l進行計數，計算標記抗體的比活性和標記率

結合于McAb１２５I放射性強度cpm

標記率％＝───────────────────

總放射性強度cpm

結合于某一管McAb上的放射性強度

比活性Ci／gMcAb＝────────────────

某一管McAb總量

三試劑器材

1.純化后的McAb

2.0.05M磷酸緩沖液，氯胺桾，偏重亞硫酸鈉，KI，BSA

3.125I

4.有通風裝置的超凈臺，計數儀

5.PD10柱SephadexG25

四留意事項

1.嚴防同位素污染，工作人員必需穿著工作衣，戴口罩、帽子、手套。必需在嚴密的通風櫥或通風超凈臺中操作。操作前后對試驗室環境進行監測。所用12

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