免疫學的實際應用第一頁，共六十五頁，2022年，8月28日特異性免疫的獲得方式第二頁，共六十五頁，2022年，8月28日第一節生物制品生物制品是指以微生物、寄生蟲、動物毒素和生物組織作為起始材料，采用生物學工藝或分離純化技術制備，并以生物學技術和分析技術控制中間產物和成品質量制成的生物活性制劑。包括：疫苗、免疫血清和診斷試劑。

第三頁，共六十五頁，2022年，8月28日根據應用對象，生物制品可以分為3類(1)用于人類的醫用生物制品(2)用于動物的動物生物制品(3)用于植物的植物生物制品。通常所說的生物制品是指醫用生物制品。第四頁，共六十五頁，2022年，8月28日一、人工自動免疫用制劑㈠疫苗：是指病原微生物、寄生蟲及其組織成分或代謝產物制成并用于人工自動免疫的生物制品。

第五頁，共六十五頁，2022年，8月28日1活苗：

病原微生物毒力逐漸減弱或喪失，但仍保持良好的免疫原性，用該種活的、變異的病原微生物制成的疫苗稱為活苗或弱毒苗。如脊髓灰質病毒、卡介苗、麻疹病毒疫苗等。優點：活苗能在體內短期繁殖，多為一次免疫，使用劑量小，免疫力強，成本低，有多種免疫途徑且不需佐劑；缺點：有排毒危險或組織反應，難以制成聯苗，運輸保存較困難，現多制成凍干苗。第六頁，共六十五頁，2022年，8月28日2滅活苗（死苗）

選用免疫原性強的細菌、病毒等經人工培養后用理化方法將其殺死（滅活）后制成的疫苗稱為滅活苗或死苗。如傷寒菌、百日咳桿菌、霍亂弧菌、鉤端螺旋體、流感病毒、狂犬病病毒、乙腦病毒疫苗均為滅活疫苗。

優點：滅活苗安全易保存，容易制成聯苗或多價苗。

缺點：不能在體內增殖，免疫期短，常需多次免疫，使用劑量大且只能注射，可能有毒性等副作用。

第七頁，共六十五頁，2022年，8月28日死疫苗和活疫苗的比較死疫苗活疫苗接種途徑多采取皮下注射多為模擬自然感染途徑、少數經皮下注射接種劑量較大較小接種次數二次或多次一般只需一次免疫效果較差可靠免疫力維持時間數月~1年長達3~5年以上疫苗保存易于保存不易保存不良反應較大較小制品類型可多種疫苗混合使用一般單獨使用第八頁，共六十五頁，2022年，8月28日常用的病毒疫苗流行性感冒Influenza—Inactivated風疹Rubella—Attenuated輪狀病毒Rotavirus—Attenuated

水痘Varicella—Attenuated甲肝HepatitisA—Inactivated

乙肝HepatitisB—Subunit脊髓灰質炎PolioInactivatedAttenuated狂犬病Rabies

firstattenuatedinactivated第九頁，共六十五頁，2022年，8月28日3類毒素

將細菌的外毒素用0.3%-0.4%甲醛溶液脫毒制成的生物制品。外毒素經脫毒后失去毒性，但保留較強的免疫原性。

類毒素常與死疫苗混合使用劇成白喉類毒素、破傷風類毒素及百日咳桿菌聯合疫苗。

第十頁，共六十五頁，2022年，8月28日第十一頁，共六十五頁，2022年，8月28日（二）新型疫苗1.聯苗與多價苗聯苗：是指不同種微生物或其代謝產物組成的疫苗。多價苗：則是指同種微生物不同型或株所制成的疫苗。

2.寄生蟲疫苗由于寄生蟲大多有復雜的生活史，其蟲體抗原極其復雜并具有高度多變性，因而至今仍無理想的寄生蟲疫苗。第十二頁，共六十五頁，2022年，8月28日3.亞單位苗利用微生物的一種或幾種亞單位或亞結構制成的疫苗稱為微生物亞單位苗或亞結構苗；由微生物的某些化學成分制成的疫苗又稱為化學苗。4.基因工程苗

是以辣病毒、皰疹病毒為載體，將目的基因插入此種病毒基因組的特定位置上，使載體病毒獲得表達外源基因新特性的重組體疫苗，又稱為重組活毒疫苗。

第十三頁，共六十五頁，2022年，8月28日(四）疫苗制造的基本程序1.疫苗的菌種與毒種（1）菌種、毒種的一般要求①來源清楚，資料完整②生物學特性比較典型③血清型相符④遺傳性狀穩定第十四頁，共六十五頁，2022年，8月28日(2)滅活、滅活劑與佐劑①滅活與滅活劑滅活：是指破壞微生物的生物學特性，但盡可能避免影響其免疫原性。②佐劑

佐劑：單獨使用一般無免疫原性，而與抗原物質合用能增強后者的免疫原性和機體的免疫應答，或改變機體免疫應答類型的物質稱為佐劑。第十五頁，共六十五頁，2022年，8月28日雞胚培養細胞大量突變病毒原代猴腎細胞減毒繁殖快，生長迅速脊髓灰質炎減毒活疫苗的制備生長迅速，無毒性，只在非神經組織中生長(腎)，不在CNS生長。脊髓灰質炎病毒傳代病毒于其他宿主脊髓灰質炎疫苗第十六頁，共六十五頁，2022年，8月28日牛分支桿菌13年卡介苗（BCG）BacillusCalmette-Guerin在膽汁中適應性生長，充分減毒成為預防肺結核的疫苗。卡介苗的制備置于含膽汁的培養基，逐漸增加膽汁的濃度。最早由法國科學家卡爾梅特(Calmette)和介朗(Guérin)研制成功的疫苗。即將有毒力的牛型結核分枝桿菌在甘油膽汁馬鈴薯培養基上長期培養傳代，得到減毒菌株，可用于預防結核菌感染。第十七頁，共六十五頁，2022年，8月28日第十八頁，共六十五頁，2022年，8月28日二、人工被動免疫用制劑動物經反復多次注射同一種病原微生物等抗原后，機體體液中產生大量抗該抗原的抗體，由此分離所得的血清稱為免疫血清、高免血清或抗血清。此種免疫持續時間短，只適用于治療與緊急預防，屬人工被動免疫。

第十九頁，共六十五頁，2022年，8月28日用于人工被動免疫的制劑有3類：（1）特異性免疫球蛋白制劑，如抗毒素和抗病毒血清等。（2）混合的免疫球蛋白制劑，如丙種球蛋白制劑；（3）提高細胞免疫功能的制劑，如致敏淋巴細胞，轉移因子，白細胞介素，免疫核糖核酸，胸腺素等。第二十頁，共六十五頁，2022年，8月28日人工自動免疫與人工被動免疫的比較人工自動免疫人工被動免疫產生免疫力的物質抗原（疫苗、類毒素、瘤苗等）抗體、活化的淋巴細胞、細胞因子等發揮作用的潛伏期較長，約12~4周短，無需誘導期、立即發揮作用免疫力維持時間較長，約半年~數年較短，數周~數月主要用途預防傳染性疾病治療腫瘤傳染性疾病的治療或緊急預防，調節機體免疫功能，治療腫瘤第二十一頁，共六十五頁，2022年，8月28日計劃免疫就是根據疫情監測和人群免疫狀況分析，按照國家規定的免疫程序，有計劃地利用疫苗進行人群預防接種，以提高人群免疫水平，達到控制以至最終消滅相應傳染病的目的。計劃免疫工作是當前我國衛生防疫工作的主要組成部分，其主要內容是“接種五苗防七病”，即：按照免疫程序，對7周歲以下兒童有計劃地進行卡介苗（BCG）、脊髓灰質炎減毒活疫苗（TOPV）、百白破三聯混合制劑（DPT）、麻疹疫苗（MV）和乙肝疫苗（HBV）的基礎免疫及加強免疫接種，從而達到防治結核、脊髓灰質炎、百日咳、白喉、破傷風、麻疹及乙型肝炎等疾病的目的。三、中國計劃免疫第二十二頁，共六十五頁，2022年，8月28日1.白喉2.百日咳3.破傷風4.流感5.脊髓灰質炎6.流行性腮腺炎7.麻疹8.風疹常見傳染病疫苗接種前后的發病率比較接種后接種前102123456781041060發病數第二十三頁，共六十五頁，2022年，8月28日浙江省于1978年開始實施免疫規劃。2008年，浙江根據自身經濟狀況和發展水平，進一步擴大了國家免疫規劃，將腮腺炎疫苗、風疹疫苗、甲肝、流腦等疫苗納入本省的免疫規劃。通過免費接種，適齡兒童注射的疫苗已從7種預防9種疾病擴大到12種預防15種疾病，針對性疾病得到了有效控制，千萬兒童的身體健康得到了有效保護。

第二十四頁，共六十五頁，2022年，8月28日第二十五頁，共六十五頁，2022年，8月28日第二十六頁，共六十五頁，2022年，8月28日一、概念血清學試驗:抗體和相應的抗原在體外一定的條件下作用后，能出現肉眼可見的反應。由于抗體主要存在于血清中，所以將體外的抗原抗體反應叫做血清學反應。第二節血清學反應第二十七頁，共六十五頁，2022年，8月28日二、常見的血清學反應包括

㈠凝聚性反應⒈凝集反應：⒉沉淀反應：㈡有補體參與的反應㈢中和試驗㈣標記抗體技術第二十八頁，共六十五頁，2022年，8月28日二、血清學試驗的一般規律㈠特異性和交叉性*概念：抗原分子，只能與由它刺激所產生的抗體結合而起反應的專一性能。*交叉反應(crossreaction)

兩種不同的抗原物質具有部分相同或類似結構的抗原決定簇，則可與彼此相應的抗體反應。第二十九頁，共六十五頁，2022年，8月28日特異性示意圖第三十頁，共六十五頁，2022年，8月28日（二）比例性當抗原與抗體比例適合時，才能形成大復合物，血清學反應才出現象，如果某一成分過多或過少則不會出現可見的反應，這種現象叫帶現象。*最適比(optimalratio)或等價點(equivzlencepoint)最迅速出現沉淀時的抗原抗體的濃度比或量比。等價帶(equivalencezone)抗原與抗體分子比例合適的范圍。第三十一頁，共六十五頁，2022年，8月28日比例性示意圖抗體過量比例合適抗原的量抗原過量抗體沉淀的量前帶等價帶后帶第三十二頁，共六十五頁，2022年，8月28日㈢可逆性是指抗原與抗體結合成復合物后，在一定條件下可解離為游離抗原與抗體的特性。

(1)解離后抗原抗體仍保持原有特性。

(2)一定條件：低pH、高濃度鹽等。(3)常用于解離抗原抗體復合物的物質有：

3mol/L硫氰化鉀、pH2.40.1mol/L甘氨酸、

7mol/L尿素等。第三十三頁，共六十五頁，2022年，8月28日第三十四頁，共六十五頁，2022年，8月28日三、影響血清學試驗的因素

1．電解質

2．溫度

3．酸堿度

4．雜質、異物

5．振蕩第三十五頁，共六十五頁，2022年，8月28日四、常見的血清學試驗㈠凝聚性試驗⒈凝集試驗⑴直接凝集試驗

顆粒性抗原與相應抗體在電解質的參與下，直接結合，凝集成團的現象，稱直接凝集試驗。第三十六頁，共六十五頁，2022年，8月28日A．平板凝集反應+平板凝集試驗用抗原陰性血清無凝集現象+平板凝集試驗用抗原陽性血清出現凝集現象第三十七頁，共六十五頁，2022年，8月28日第三十八頁，共六十五頁，2022年，8月28日第三十九頁，共六十五頁，2022年，8月28日B.試管凝集反應

第四十頁，共六十五頁，2022年，8月28日⑵間接凝集反應將可溶性抗原或抗體先吸附于一種與免疫無關的、一定大小的載體顆粒的表面相吸附，然后與相應的抗體或抗原作用，在有電解質存在的適宜條件下，所出現的特異性凝集反應為間接凝集試驗。第四十一頁，共六十五頁，2022年，8月28日第四十二頁，共六十五頁，2022年，8月28日（正向）間接凝集反應原理示意圖第四十三頁，共六十五頁，2022年，8月28日（反向）間接凝集反應原理示意圖

第四十四頁，共六十五頁，2022年，8月28日2、沉淀反應可溶性抗原與相應抗體結合，在適量電解質存在下，形成肉眼可見的絮狀白色沉淀，稱之為沉淀試驗。（1）液相沉淀試驗

A．環狀沉淀試驗

原理：小試管內，下層沉淀素與上層沉淀原在液界面應形成白色沉淀環。

用途：檢測皮毛中的炭疽桿菌抗原

B．絮狀沉淀試驗抗原與抗體在試管內混合，在電解質的存在下抗原抗體復合物可形成絮狀凝聚物。此法多用于毒素和抗毒素測定。第四十五頁，共六十五頁，2022年，8月28日（2）瓊脂擴散試驗

根據其擴散的方向可分為單向單擴散、單向雙擴散、雙向單擴散、雙向雙擴散，其中雙向雙擴應用最廣。雙向瓊脂擴散（瓊擴）系采用1%瓊脂倒于平皿或玻片上，制成凝膠板，可按需要打孔。將抗原、抗體分別滴入孔內，放置濕盒中，在37?C濕箱中24-72h后觀察。在抗原與抗體孔間形成沉淀帶。每一種抗原成分出現一條沉淀帶。第四十六頁，共六十五頁，2022年，8月28日單向瓊脂擴散試驗AgAgAgAg含抗體凝膠第四十七頁，共六十五頁，2022年，8月28日雙向雙擴散如兩個相鄰孔之間抗原相同，則沉淀帶融合；抗原不同，則互相交叉；部分相同則部分融合，另外不同部分則交叉。第四十八頁，共六十五頁，2022年，8月28日（3）免疫電泳

瓊脂擴散與電泳技術結合起來稱免疫電泳。由于抗原顆粒帶電荷不同，在同一電場中其泳動速度不同，故遷移率不同，因而通過電泳可將抗原成分分開。停止電泳后加抗血清進行擴散，如有一對抗原抗體出現一條沉淀線，因而大大加強了免疫擴散的分辨率及敏感性。此法可應用于抗原成分及含量成分的分析、免疫球蛋白純度的鑒定，以及傳染病的快速診斷等。第四十九頁，共六十五頁，2022年，8月28日1.對流免疫電泳第五十頁，共六十五頁，2022年，8月28日2.火箭電泳第五十一頁，共六十五頁，2022年，8月28日3.免疫電泳第五十二頁，共六十五頁，2022年，8月28日免疫電泳技術的用途對流免疫電泳——快速、半定量測定火箭電泳——快速、定量測定免疫電泳——抗原分析第五十三頁，共六十五頁，2022年，8月28日（二）補體有關的試驗（補體結合實驗）反應系統指示系統反應結果的判定已知抗原（抗體）待檢血清（抗原）補體綿羊紅細胞溶血素如溶血則為陰性如不溶血則為陽性第五十四頁，共六十五頁，2022年，8月28日第五十五頁，共六十五頁，2022年，8月28日第五十六頁，共六十五頁，2022年，8月28日第五十七頁，共六十五頁，2022年，8月28日（三）中和試驗原理：病毒與抗血清中抗體特異結合后失去感染易感動物、雞或雞胚、細胞的活性。例1：新城疫病毒檢測

NDV9～11d雞胚24～48h雞胚死亡NDV+抗血清9～11d雞胚雞胚不死亡第五十