會計學1DNA的粗提取和鑒定21）不同濃度NaCl中DNA溶解度不同。

2）DNA與其他細胞成分在酒精中溶解度不同，DNA不溶于酒精，細胞中某些蛋白質則溶于酒精。3）DNA和蛋白質對酶耐受性不同：酶的專一性——蛋白酶水解蛋白質。但是對DNA沒有影響。4）DNA和蛋白質對高溫耐受性不同：蛋白質、DNA熱穩定性不同。大多數蛋白質不能忍受60～80℃的高溫，而DNA在80℃以上才會變性。5）DNA和蛋白質對洗滌劑耐受性不同：洗滌劑能夠瓦解細胞膜，但對DNA沒有影響。提取DNA的原理包括DNA的

兩個方面溶解性和耐受性1.DNA的粗提取實驗原理第1頁/共29頁32.實驗材料

①動物

雞血細胞液的優點提醒：人和哺乳動物成熟的紅細胞中不含細胞核，也沒有DNA，不適于作為DNA提取的材料，但卻是提取血紅蛋白的理想材料。

雞血紅細胞、白細胞中都有細胞核，含大量的DNA,既經濟又易取

②植物：新鮮菜花、蒜黃、菠菜等。

第2頁/共29頁43、方法與過程

1).制雞血細胞液0.1g/mL檸檬酸鈉100mL活雞鮮血180mL500mL燒杯中，玻棒攪拌，離心或靜置沉淀。離心或靜置后去掉上清液血漿血細胞第3頁/共29頁5關于DNA粗提取的實驗材料的選擇，也經過了多次實驗結果的比較，最終選擇雞血做實驗材料的原因是什么？請回答下列問題：（1）雞血中紅細胞

，家雞屬于鳥類，新陳代謝旺盛，因而血液中

細胞數目較多，可以提供豐富的

（2）實驗前由老師制備雞血細胞液供同學們做實驗材料，而不用雞全血，主要原因是（3）生活在牧區的人們，采集羊、牛和馬血比較方便，若他們按實驗要求完成實驗步驟后，結果是

，這是因為

，

但若改用動物肝臟做實驗材料，實驗可以順利進行，這是因為

。（4）若選用動物肝臟做實驗材料，在提取之前，最好增加

程序，使組織細胞更易分離。含有完整的、成形的細胞核紅DNA量，所以一般采用雞血

雞的全血包括血漿和血細胞，血漿中無DNA，全血中除掉血漿后就是濃縮的血細胞液，DNA的相對含量提高了。在實驗中很難提取到DNA哺乳動物成熟的紅細胞中無細胞核，反靠白細胞和淋巴細胞中的少量DNA，在實驗中很難提取到肝細胞中含有細胞核，并且肝組織容易被破壞，有利于DNA的提取若使肝組織易分離，將肝細胞剪碎、研磨是一種簡便易行的方法。第4頁/共29頁6提取細胞核物質：溶解核內DNA：在濾液中加2mol/L的NaCl溶液并攪拌，使染色質中DNA

與蛋白質分離，DNA充分溶解，過濾(除雜質)析出DNA：DNA黏稠物再溶解：在燒杯中用2mol/L的NaCl溶液溶解DNA。提取較純凈的DNA：DNA的鑒定：取兩試管各加2mol/L的NaCl溶液，將DNA充分溶解于其中一試管，然后向兩試管加入二苯胺試劑，混勻沸水中加熱

5min后冷卻，可發現DNA與試劑反應使溶液呈現藍色。濾取DNA黏稠物：過濾含DNA的NaCl溶液：用兩層紗布過濾。2)實驗方法步驟：

在上述溶液中緩緩加入蒸餾水，并沿一個方向輕輕攪拌，出現絲狀物；當絲狀物不在增加時，停止加水（此時NaCl溶液的濃度相當于0.14mol/L）。

用多層紗布過濾，含DNA的粘稠物留在紗布上。濾液中含有DNA。所得的濾液＋體積分數為95%的冷卻酒精50mL，用玻棒沿一個方向輕緩攪拌，溶液中（析出）出現乳白色絲狀物，用玻棒將絲狀物卷起，并用濾紙吸取上面的水分。利用細胞吸水破裂，細胞核內物質釋放出來，后用紗布過濾取其濾液。血細胞在蒸餾水中易吸水而導致細胞膜和核膜的破裂，據此可得出含核DNA的溶液。第5頁/共29頁7

鑒定不變藍——對照組溶液逐漸變藍絲狀物(DNA)實驗組圖示結果加入物質比較均加入：①4mL二苯胺試劑②2mol/LNaCl溶液5mL鑒定時藍色的深淺與溶液中DNA的含量多少有關。自變量你能采用其他方法對DNA進行鑒定嗎？洋蔥的鱗片葉表皮細胞取少許絲狀物，置玻片中央，加1滴甲基綠溶液，絲狀物變成綠色。鑒定所用的試劑是二苯胺或甲基綠。用二苯胺須加熱。用甲基綠不用水浴加熱。第6頁/共29頁8第7頁/共29頁9

注意事項

①制備雞血細胞液時，要在取雞血的同時加入檸檬酸鈉，靜置后上層是血清，下層為所需要的血細胞。

②整個實驗中加入“兩次蒸餾水，三次NaCl溶液，一次酒精”

兩次加蒸餾水的目的不同，一是漲破細胞，二是稀釋溶液。

酒精最好用95%的冷酒精;

③加蒸餾水或加入酒精用玻棒攪拌時,動作要輕緩且朝一個方向。保證DNA分子的完整性。使用時注意玻璃棒不要碰到燒杯底。

④鑒定DNA時需沸水浴加熱。

⑤二苯胺試劑要現配現用,否則會影響鑒定的效果.二苯胺是一種有毒性的試劑,使用時注意不要讓藥液接觸到皮膚或身體的其他部位.

⑥盛放雞血細胞的容器最好是塑料容器（雞血細胞破碎后釋放的DNA，容易被玻璃容器吸附，造成提取過程中DNA的損失）

第8頁/共29頁10DNA的直徑約為20×10-10m，實驗中出現的絲狀物的粗細是否表示1個DNA分子直徑的大小？答：DNA分子直徑只有2nm。絲狀物是多個DNA聚在一起形成的。第9頁/共29頁11下圖為“DNA粗提取和鑒定”實驗的相關操作。這些操作目的正確的是 （ ） A.①是洗滌血細胞，去除血細胞表面的雜質

B.②是溶解DNA，去除不溶于酒精的雜質

C.③是溶解DNA，去除不溶于2mol/LNaCl溶液的雜質

D.④是稀釋NaCl溶液，去除不溶于低濃度NaCl溶液的雜質

①是釋放核物質②是提純DNA，去除溶于酒精的雜質，④稀釋NaCl溶液，析出DNA。C第10頁/共29頁12甲、乙兩圖為“DNA的粗提取與鑒定”實驗中涉及的兩個操作裝置圖。相關敘述正確的是甲乙A．圖甲的燒杯和圖乙的試管中所用溶劑都為NaCl溶液，但兩者濃度不同B．圖乙試管經少許加熱后即可觀察到一支試管中的溶液明顯變藍，另一支試管中的溶液不變藍C．圖甲操作需用玻棒迅速攪拌以使DNA成為絮狀沉淀并纏繞在玻棒上D．圖乙操作中所用的二苯胺需現配現用以達到較好的鑒定效果D第11頁/共29頁13小結:生物體內有機物與化學試劑的特定顏色反應試劑名稱鑒定物質顏色反應溫度條件還原性糖如葡萄糖脂肪蛋白質DNA淀粉

磚紅色沉淀藍色橘黃色紅色紫色藍紫色加熱加熱斐林試劑班氏試劑蘇丹III蘇丹IV雙縮脲試劑二苯胺試劑碘液第12頁/共29頁14植物細胞需要先用洗滌劑（洗發香波、沐浴液、洗潔精等）溶解細胞膜。洗滌劑可以瓦解細胞膜的原因是：洗滌液中含有十二烷基硫酸鈉和堿，它們可使細胞膜破裂，蛋白質變性，使蛋白質與DNA分離開來。利于DNA的釋放。動物細胞膜是不用試劑（洗滌劑）破壞的，因為動物細胞膜外面沒有細胞壁的保護，放在清水中自然的就會吸水而脹破，釋放出其中的DNA等物質。4、植物：新鮮菜花、蒜黃、菠菜等。

第13頁/共29頁15方法步驟1、將30g香蕉或菜花切碎，放入研缽中。向研缽中加入2g氯化鈉，研磨直至成半流體狀。3、將混合液用兩層紗布過濾，向濾液中加入預冷的10ml乙醇溶液，靜置，可產生絮狀的DNA。4、取兩支試管，分別加入5ml生理鹽水，將DNA挑至其中一支試管中，輕輕攪拌使其溶解。有利于DNA的溶解2、向研缽中加入10ml蒸餾水或涼開水，攪拌。然后加入10ml洗滌劑，輕輕攪拌。能溶解細胞膜，有利于DNA的釋放；DNA析出，除去溶于酒精的蛋白質第14頁/共29頁162007年高考生物試題:

在某些深海魚中發現的抗凍蛋白基因，該對提高農作物的抗寒能力有較好的應用價值，該基因可以從這些魚的DNA中擴增得到。試述在提取和純化DNA時影響提純效果的因素及其依據。（列舉兩點）①選擇NaCl溶液的合適濃度，利用DNA和其它雜質在不同NaCl溶液中溶解度不同的特性，達到分離目的；②加人一定量酒精，使部分蛋白質雜質溶解于酒精，與DNA分離；③加人蛋白酶，除去蛋白質雜質的干擾；④控制DNA提取的溫度，使大多數蛋白質雜質變性。第15頁/共29頁171.如果用棉花植株作為實驗材料做《DNA的粗提取與鑒定》實驗，請你說出可能用到的二種化學試劑名稱，并說出這種試劑在該實驗中的用途。（4分）

氯化鈉溶液：不同濃度的NaCl溶液，能使DNA溶解或析出，從而起到提取DNA的作用；

95%乙醇：DNA不溶于酒精，可以用于提取出含雜質較少的DNA；二苯胺：作為鑒定DNA的試劑；洗滌劑：能溶解細胞膜，有利于細胞內DNA的釋放（答出每種試劑的名稱和用途得2分）。第16頁/共29頁182：下列圖示中能反映DNA溶解度與NaCl溶液濃度(mol/L)之間的關系的是（）C0.14DNA溶解度0.140.140.14DNA溶解度DNA溶解度DNA溶解度ABCDNaCl濃度NaCl濃度NaCl濃度NaCl濃度第17頁/共29頁19C0.14DNA析出量0.140.140.14DNA析出量DNA析出量DNA析出量ABDNaCl濃度NaCl濃度NaCl濃度NaCl濃度3：下列圖示中能反映DNA析出量與NaCl溶液濃度(mol/L)之間的關系的是（）B溶解度與析出量的關系是相反第18頁/共29頁204.江蘇有一道涼菜——白斬雞，雞肉嫩而不韌、味美鮮香。其加工過程中添加了從木瓜中提取的酶制成的“嫩肉粉。”下列有關嫩肉粉的敘述中，正確的是(

)A．“嫩肉粉”可能是通過催化細胞間的纖維素水解而實現“嫩肉”的B．與高溫蒸煮相比，“嫩肉粉”是通過降低反應活化能而實現“嫩肉”的C．“嫩肉粉”應在蒸煮雞肉時加入，才能實現“嫩肉”D．“嫩肉粉”是一種化工產品，不利于人體健康，實際應用中能少則少、能無則無B第19頁/共29頁215.（09·江蘇四市）下列操作可以達到目的的選項是選項操作目的A溶解海藻酸鈉時用大火加熱海藻酸鈉可以快速溶解

B將裝有蛋白質粗制品的透析袋（玻璃紙制成）放入透析液中

蛋白質與其他小分子化合物分離C在DNA粗提取實驗中，雞血中加入蒸餾水稀釋血液，防止凝固D洋蔥根尖解離后漂洗使細胞分散，利于觀察B微火加熱并不斷攪拌，其目的是防止海藻酸鈉焦煳促使血細胞破裂防止根尖過分解離，對染色造成影響。因玻璃紙是半透膜，所以將裝有蛋白質粗制品的透析袋（玻璃紙制成）放入透析液中，可以將蛋白質與其他小分子化合物分離。第20頁/共29頁226.在“DNA粗提取與鑒定”實驗中，將含有一定雜質的DNA絲狀物分別放入體積為2mL的四種溶液中，經攪拌后過濾，獲得4種濾液，含DNA較少的是A．濾液EB．濾液FC．濾液GD．濾液H1蒸餾水中攪拌后過濾濾液E22mol／L的NaCl溶液攪拌后過濾濾液F3O.14mol／L的NaCl溶液中攪拌后過濾濾液G4冷卻的95％的酒精溶液中攪拌后過濾濾液HCD7、欲使溶有DNA的2mol/L的NaCl溶液中的DNA析出，最有效的辦法是A加蒸餾水B加礦泉水C加清水D加生理鹽水第21頁/共29頁238、與析出DNA粘稠物有關的敘述，不正確的是（多選）A操作時緩慢滴加蒸餾水，降低DNA的溶解度B操作時用玻棒輕緩攪拌以保證DNA分子的完整C加蒸餾水可以同時降低DNA和蛋白質的溶解度D當絲狀粘稠物不再增加時，NaCl溶液的濃度可以認為是0.14mol/LE.改變NaCl溶液的濃度只能使DNA溶解而不能使其析出9、下列與DNA粗提取有關描述正確的是（）A、DNA能夠溶解在一定濃度的NaCl溶液中B、DNA能夠溶解在質量分數95%冷酒精中C、DNA在0.14mol/L的NaCl溶液中溶解度最高D、DNA只能溶解在2mol/L的NaCl溶液中A第22頁/共29頁2410.下列操作中，對DNA的提取量影響較小的是A.使雞血細胞在蒸餾水中充分破裂，放出DNA等核物質B.攪拌時，要用玻璃棒沿一個方向輕緩攪動C.在析出DNA黏稠物時，要緩緩加蒸餾水，直至溶液中黏稠物不再增多D.在用酒精沉淀DNA時，要使用冷酒精，甚至再將混合液放入冰箱中冷卻解析：在B所述的操作中，可以保證DNA分子的完整性，但不影響提取量。除了A、C、D及在DNA的溶解和再溶解時，要充分攪拌影響DNA的提取量外，使用塑料器皿也可以減少DNA在操作中的損失。因為塑料制品的性質相對比較溫和,所以比金屬等其他的制品好一些.對DNA的損傷也就小一些．因為DNA容易與玻璃制品粘連

答案：B

第23頁/共29頁2511.（多選）下表是關于DNA粗提取與鑒定實驗中所使用的材料、操作及其作用的表述。正確的是（）試劑操作作用A檸檬酸鈉溶液與雞血混合防止血液凝固B蒸餾水與雞血細胞混合保持細胞形狀C蒸餾水加入到溶解有DNA的NaCl中析出DNA絲狀物D冷卻的酒精加入到過濾后DNA的NaCl中產生特定的顏色反應AC第24頁/共29頁2612.下列關于DNA粗提取與鑒定的說法正確的是()A、氯化鈉的濃度越低，對DNA的溶解度越大B、人血也可代替雞血進行實驗C、檸檬酸鈉的主要作用是加速血細胞破裂D、DNA不能溶于酒精尤其是冷酒精D防止凝血13.蛙的紅細胞、雞的紅細胞都有細胞核和各種細胞器，哺乳動物成熟的紅細胞沒有細胞核和各種細胞器，它們的呼吸方式是什么?蛙的紅細胞、雞的紅細胞都是正常的細胞,進行的是有氧呼吸.哺乳動物成熟的紅細胞是進行無氧呼吸的。第25頁/共29頁2716.實驗中NaCl的物質的量濃度為2mol／L和0.14mol／L對DNA有何影響?15.在DNA的粗提取實驗過程中，兩次向燒杯中加入蒸餾水的作用是()。A.稀釋血液、沖洗樣品B.使血細胞破裂、降低NaCl濃度使DNA析出C.使血細胞破裂、增大DNA溶解量D.使血細胞破裂、提取含雜質較少的DNAB答：前者是溶解