關于植物組織培養的一般技術第一頁，共三十六頁，2022年，8月28日植物組織培養的一般技術操作技術培養基的成分及作用培養基的種類與選擇培養基的配制方法第二頁，共三十六頁，2022年，8月28日操作技術洗滌滅菌無菌操作培養容器封口物的種類及制作第三頁，共三十六頁，2022年，8月28日滅菌

有菌的范疇：凡是暴露在（未經處理的）空氣中的物體，曾經接觸過自然水源的物體，至少它的表面，毫無例外都是有菌的。它的內部在未經證實之前，也應該作為有菌物體來看待。無菌的范疇：經過高溫灼燒或蒸煮過后的物體，經其他物理或者化學滅菌方法處理過后的物體，是無菌的。高層大氣、巖石的內部，健康的動物和植物不與內外部表面接觸的組織內部很可能是無菌的。強酸強堿、化學滅菌劑等表面和內部是無菌的。無菌的世界遠遠小于有菌的世界！第四頁，共三十六頁，2022年，8月28日滅菌培養基的滅菌不耐熱的物質將采用過濾滅菌玻璃器皿及耐熱用具等可采用干熱滅菌用于無菌操作的器械采用灼燒滅菌布制品采用高壓滅菌其他植物材料的表面滅菌第五頁，共三十六頁，2022年，8月28日培養基的成分及作用在完善的培養基配方中至少應包括下述幾個部分：大量元素微量元素鐵鹽有機成分瓊脂糖植物激素PH其它成分第六頁，共三十六頁，2022年，8月28日大量元素植物所需要的元素，其濃度大于0.5毫摩爾/升應該屬于大量元素大量元素包括C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S等九種元素，他們占植物干重的百分之幾十到萬分之幾生理作用：1）參與肌體構造；2）構成一些特殊的生理活性物質；3）電化學方面的作用:維持離子濃度平衡，膠體穩定，電荷平衡；4）發育方面起的作用：影響植物組織形態發生、器官形成。第七頁，共三十六頁，2022年，8月28日微量元素植物所需要的元素，其濃度小于0.5毫摩爾/升應該屬于微量元素。微量元素包括Fe、Cu、Mo、Zn、Na、Mn、Co

B和I等，通常培養基中添加10-7—10-5就可滿足需要生理作用：酶的催化、細胞分化和維持細胞完整機能等方面第八頁，共三十六頁，2022年，8月28日多年的研究結果：

Cu有促進離體根生長的作用；

Mo是合成活躍硝酸還原酶所必不可少的元素，也是固氮酶的組成部分，還有防止葉綠素受破壞的作用；

Mg、Zn、Na是酶的組成成份，也有防止葉綠素破壞的作用；

Mn與植物的呼吸作用和光合作用有關；

B與糖的運輸、蛋白質的合成有關。第九頁，共三十六頁，2022年，8月28日

當缺乏某種元素時，往往會表現一些缺素癥：缺N：某些組織呈現鮮艷的花色素苷的色彩，導管不能形成；缺N、P、K：細胞變得肥腫而形成層組織減少；缺S：產生非常明顯的黃萎病；缺Fe：細胞分裂停止；缺B：細胞分裂和細胞生長延緩；缺Mn或Mo：生長受影響。第十頁，共三十六頁，2022年，8月28日鐵鹽采用硫酸亞鐵和乙二胺四乙酸二鈉結合成螯合鐵配置而成作用：促進細胞的分裂與生長；影響葉綠體的結構組成與葉綠素的形成。第十一頁，共三十六頁，2022年，8月28日有機成分維生素類：植物組織培養中經常使用維C、維B1（鹽酸硫胺素）、維B6（鹽酸吡哆素）、維H（生物素）、葉酸和煙酸等，一般使用的濃度為0.1——10mg/l肌醇：本身沒有促進生長的作用，但有助于活性物質的發揮，并參與糖代謝，能使培養組織快速生長，對胚狀體和芽的形成有良好的影響氨基酸：甘氨酸、絲氨酸、酪氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、水解酪蛋白、水解乳蛋白有機添加物：椰乳、香蕉等第十二頁，共三十六頁，2022年，8月28日瓊脂一種從海藻中提取出來的凝固劑，一般使用濃度為0.6%—1%。以前使用瓊脂條，現在使用瓊脂粉，以色白、潔凈的為好。第十三頁，共三十六頁，2022年，8月28日糖糖的作用：a.作為C源，為細胞提供合成新化合物的碳骨架；b.為細胞的呼吸代謝提供底物與能源；c.維持一定的滲透勢。使用最廣泛的是蔗糖和葡萄糖，一般的使用濃度為2%—4%。一般來說，以蔗糖做糖原時，離體的雙子葉植物的根生長得最好，而以葡萄糖為C源時，單子葉植物的根生長得最好。為了節省成本，一般選用食用白糖。第十四頁，共三十六頁，2022年，8月28日植物激素生長素類細胞分裂素類其它植物激素赤霉素（GA3）脫落酸（ABA）多效唑（PP333）第十五頁，共三十六頁，2022年，8月28日生長素類主要作用：誘導愈傷組織的形成、胚狀體的產生以及試管苗的生根，更重要的是配合一定比例的細胞分裂素誘導腋芽和不定芽的產生。常用的生長素類物質：2，4－D（2，4－二氯苯氧乙酸）、NAA（奈乙酸）、IAA（吲哚乙酸）、IBA（吲哚丁酸）。它們作用強弱順序：2，4－D>NAA>IBA>IAA第十六頁，共三十六頁，2022年，8月28日細胞分裂素類主要作用：促進細胞的分裂和器官的分化、延緩組織的衰老、增強蛋白質的合成、抑制頂端優勢、促進側芽的生長及顯著改變其它的激素作用。常用的細胞分裂素類有：KT(激動素)、6-BA(6-芐基腺嘌呤)、ZT（玉米素）、2－iP（2－異戊烯腺嘌呤）、4PU、CPPU（吡效隆）和TDZ（噻重氮苯基脲）。作用的強弱順序：TDZ,4PU>ZT>2－iP>6-BA>KT。第十七頁，共三十六頁，2022年，8月28日PH培養基的PH值，直接影響離子的吸收，過酸過堿對材料的生長都不利。對大多數植物來說，滅菌之前培養基的PH調到5.6—6.0能達到要求。主要用KOH和HCl來調節。一般來說，當PH值高于6時，培養基會變硬，低于5時瓊脂不能很好的凝固。

第十八頁，共三十六頁，2022年，8月28日其它成分活性碳硝酸銀香蕉泥、椰乳抗生素類物質第十九頁，共三十六頁，2022年，8月28日培養基的種類與選擇培養基的種類培養基的選擇培養基選擇常用的試驗方法第二十頁，共三十六頁，2022年，8月28日培養基的種類第一類為含鹽量高的基本培養基，如MS、LS、BL、ER。第二類為硝酸鉀含量高的基本培養基，如B5、N6、SH。第三類是無機鹽中等含量培養基，如H基本培養基和Nitsch基本培養基。第四類為低鹽含量基本培養基，如White、WS和HE基本培養基。第二十一頁，共三十六頁，2022年，8月28日培養基選擇1、基本培養基的選擇（1）在選擇一種新的植物材料進行組織培養時，為了盡快建立起再生體系，最好選擇常用的一些培養基，如MS培養基；（2）如果MS培養基不理想，可首先降低它的濃度；（3）其次再選擇在配料成分上與MS有顯著不同的其它培養基加以試用對比。第二十二頁，共三十六頁，2022年，8月28日培養基的選擇2、激素濃度和相對比例的確定

在試驗中，首先應參考已有的報道，看是否有用相同的植物、相同的組織或相近者做過成功或失敗的試驗，如果有則可直接作參考；如果沒有，則在建立激素配比中，將每一種擬使用的激素選擇3－5個水平，再按隨機組合的方式建立起如下的實驗方案。第二十三頁，共三十六頁，2022年，8月28日16種激素配比實驗方案第二十四頁，共三十六頁，2022年，8月28日第二十五頁，共三十六頁，2022年，8月28日常用的試驗方法1、預備實驗2、單因子實驗3、多因子實驗及正交設計4、廣譜實驗法5、逐步添加和逐步排除的實驗方法第二十六頁，共三十六頁，2022年，8月28日培養基的配制方法培養基成分的濃度換算體積百分比濃度重量百分比濃度摩爾濃度培養基母液的配制大量元素母液的配制微量元素母液的配制鐵鹽母液配制植物生長調節物質及其他有機物質母液的配制

第二十七頁，共三十六頁，2022年，8月28日培養基配制程序第二十八頁，共三十六頁，2022年，8月28日過濾滅菌裝置第二十九頁，共三十六頁，2022年，8月28日總結通過本章內容的學習掌握組織培養的一般操作技術理解培養基的成分及作用了解培養基的種類與選擇第三十頁，共三十六頁，2022年，8月28日無菌操作第三十一頁，共三十六頁，2022年，8月28日大量元素母液的配制大量元素母液濃度一般為原培養基濃度的10、20或50倍，有時也可用l00倍，倍數不宜過高，也不宜過低。有時將CaCl2·2H2O單獨配制保存，以免長期貯存發生沉淀。將全部大量元素配在一起時，為防止在混合時發生沉淀，須在各藥品充分溶解后，按表中順序混合，氯化鈣最后加入，以免與硫酸鎂形成沉淀。稱量大量元素的化合物用感量為0.01克的扭力天平即可。第三十二頁，共三十六頁，2022年，8月28日微量元素母液的配制微量元素母液濃度宜為原培養基配方中用量的100倍。一般將微量元素分別稱量溶解，貯存在一個瓶個，但也有將KI分別配制，單獨貯存在棕色瓶中。稱量微量元素化合物宜用感量為0.0001g的電子分析天平。第三十三頁，共三十六頁，2022年，8月28日鐵鹽母液配制培養基中的鐵鹽母液一般單獨配制目前常用的鐵鹽為硫酸亞鐵和乙二胺四乙酸二鈉的螯合物配制時，用感量為0.01g的扭力天平稱取第三十四頁，共三十六頁，2022年，