抗酸染色

Acid-FastStain抗酸染色

Acid-FastStain原理：

由于分歧桿菌的胞壁含大量脂質(zhì)，主要是分枝菌酸，它包圍在肽聚糖的外面，所以分枝桿菌一般不易著色，可采用加溫、延長(zhǎng)著色時(shí)間或提高染料濃度等手段使其著色。但分枝菌酸與染料結(jié)合后，就很難被酸性脫色劑脫色。故分歧桿菌又稱為抗酸桿菌，這種染色方法又成為抗酸染色。延長(zhǎng)時(shí)間：5min提高染料濃度：初染用的酸復(fù)紅濃度是革蘭染色酸復(fù)紅濃度的10倍

鹽酸酒精：脫色能力遠(yuǎn)遠(yuǎn)強(qiáng)于95%酒精原理：由于分歧桿菌的胞壁含大量脂質(zhì)，主要是分枝菌酸，原理：齊-尼氏抗酸染色法是在加熱條件下使分枝菌酸與石炭酸復(fù)紅牢固結(jié)合成復(fù)合物，用鹽酸酒精處理也不脫色。當(dāng)再加堿性美蘭復(fù)染后，分枝桿菌仍然為紅色，而其他細(xì)菌及背景中的物質(zhì)為蘭色。目的要求：初步掌握抗酸染色的操作、結(jié)果判斷。原理：材料：結(jié)核病人痰液、載玻片、酒精燈、接種環(huán)抗酸染色液：石炭酸復(fù)紅液、3%鹽酸酒精溶液、呂氏美藍(lán)溶液。

方法：1、涂片：（1）取病患清晨痰液（2）取干酪樣壞死或帶血小塊，涂成薄膜狀（3）自然干燥，外焰固定，染色材料：2、抗酸染色（1）初染：夾住涂片一端，持平，滴加石碳酸復(fù)紅染液，使之完全覆蓋標(biāo)本，（或在已固定的結(jié)核分枝桿菌痰標(biāo)本涂片上放一小塊濾紙片，之后滴加數(shù)滴石炭酸復(fù)紅液后，）置酒精燈高處徐徐加熱，待染液出現(xiàn)蒸汽時(shí)移開(kāi)，蒸汽減少時(shí)再加熱，反復(fù)操作3-5分鐘。注意：不要使染液沸騰，若蒸發(fā)減少，可待玻片稍冷卻后適當(dāng)補(bǔ)充。2、抗酸染色（2）待玻片冷卻后，用水緩慢沖洗，用吸水紙吸干。（3）脫色：滴加3%鹽酸酒精，輕晃玻片，直至無(wú)紅色液體流下為止，一般作用1—3min*，水洗，吸干。（4）復(fù)染：用堿性美蘭溶液復(fù)染1min，用水沖洗后吸干。（5）*：不同文獻(xiàn)報(bào)道不同，范圍在30s至3min3、油鏡觀察（2）待玻片冷卻后，用水緩慢沖洗，用吸水紙吸干。結(jié)果：結(jié)核分枝桿菌染成紅色，菌體細(xì)長(zhǎng)，有時(shí)微彎，呈分枝狀排列，有時(shí)著色不均勻，呈顆粒狀。非抗酸菌及標(biāo)本中其他細(xì)胞均染成藍(lán)色。

①直接涂片—：仔細(xì)觀察至少300視野未發(fā)現(xiàn)抗酸菌；

士：300個(gè)視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)1—2個(gè)抗酸菌（全部涂膜鏡檢3遍）；

+：100個(gè)視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)1—9個(gè)抗酸菌（全部涂膜鏡檢1遍）；

2+：10個(gè)視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)1—9個(gè)抗酸菌；

3+：每個(gè)視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)1—9個(gè)抗酸菌；

4+：每個(gè)視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)9個(gè)以上的抗酸菌。

②集菌涂片結(jié)果*：按“發(fā)現(xiàn)抗酸染色

陽(yáng)性細(xì)菌”或“未發(fā)現(xiàn)抗酸染色陽(yáng)性細(xì)菌

”報(bào)告。

結(jié)果：微生物5-抗酸染色課件微生物5-抗酸染色課件集菌涂片：?、沉淀集菌法。取痰液2—3ml，40g/lNaOH1—2倍量混勻。經(jīng)103.43Pa高壓滅菌20—25min（或煮30min），3000r/min離心30min，棄上清液，取沉淀物涂片做抗酸染色或金胺“0”熒光染色鏡檢；П、漂浮集菌法。取晨痰2—3ml放入100ml三角瓶?jī)?nèi)，加1—2倍量40g/lNaOH溶液，經(jīng)103.43Pa高壓滅菌20—25min（或煮30min）。冷卻后滴加汽油0.3ml，瓶口蓋玻璃紙加塞，塞緊瓶口，置振蕩器或手搖振蕩10min，再加蒸餾水至滿瓶口而又不外溢，靜置10—15min，將已編號(hào)的潔凈載玻片蓋在瓶口上，靜置15—20min，取下載玻片并迅速將載玻片翻轉(zhuǎn)至浸膜向上，或用接種環(huán)取瓶口液面物涂于載玻片上，自然干燥，火焰固定后做抗酸染色或金胺“0”熒光染色，鏡檢。

集菌涂片：注意事項(xiàng)

①每張載玻片只允許涂1份標(biāo)本，不得涂2份或2份以上標(biāo)本，以免染色過(guò)程中菌體脫落而導(dǎo)致陰陽(yáng)結(jié)果混淆。使用過(guò)的玻片要徹底清洗干凈后才能再次使用，以防抗酸菌遺留在玻片上。

②抗酸染色時(shí)切勿使用染色缸。用于吸水的濾紙只能1片1張，不可重復(fù)使用。鏡檢時(shí)每檢查

1份標(biāo)本后，均需揩拭油鏡頭。滴加香柏油的玻璃棒或竹簽不得觸及玻片。

③抗酸染色時(shí)，脫色劑脫色時(shí)間寧長(zhǎng)勿短，結(jié)核分枝桿菌脫色時(shí)間長(zhǎng)至10—20min而不被脫色；而非抗酸菌則易脫色，故延長(zhǎng)脫色時(shí)間有一定的鑒別作用。

④為了防止實(shí)驗(yàn)室感染，可先將待檢的結(jié)核分枝桿菌標(biāo)本高壓滅菌后，涂片染色。這樣既安全又不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果（此法僅用于大規(guī)模實(shí)驗(yàn)）。注意事項(xiàng)

①每張載玻片只允許涂1份標(biāo)本，不得涂2份或2份以

恙蟲(chóng)病立克次體（R.tsutsugamushi）是恙蟲(chóng)病的病原體，短桿狀，平均長(zhǎng)度1.2um，常見(jiàn)成雙排列，在細(xì)胞質(zhì)近核處聚集生長(zhǎng)。

標(biāo)本來(lái)源：腹水涂片

染色：Giemsa

鏡下描述：細(xì)胞核邊

大量

紫紅色球桿狀菌體

名稱：恙蟲(chóng)病立克次體

意義：恙蟲(chóng)病二立克次體恙蟲(chóng)病立克次體（R.tsutsugamushi）是恙蟲(chóng)微生物5-抗酸染色課件

立克次體呈多形態(tài)性，球桿狀或桿狀，大小為0.3～0.6μmX0.8～2.0μm。革蘭染色陰性，但著色不明顯，常用馬基維羅或Giemsa法染色，前者立克次體被染成紅色，染色效果好，后者染成紫色或藍(lán)色。立克次體呈多形態(tài)性，球桿狀或桿狀，大小為0.3～0.6Giemsa染色，X1000Giemsa染色，X1000恙蟲(chóng)熱立克次體，X1000恙蟲(chóng)熱立克次體，X1000沒(méi)有細(xì)胞壁的原核生物。基因是環(huán)狀雙鏈DNA，目前已知80多種支原體，能在無(wú)生命培養(yǎng)基中生長(zhǎng)繁殖的最小微生物。

由于支原體無(wú)細(xì)胞壁，故呈多形態(tài)性，常見(jiàn)的為球狀、桿狀、絲狀及環(huán)狀。本病原的染色性較差，革蘭氏染色呈陽(yáng)性，可用姬姆薩或瑞特氏染色。

三支原體沒(méi)有細(xì)胞壁的原核生物。基因是環(huán)狀雙鏈DNA，目前已知80多種電鏡下，電鏡下，肺炎支原體(球形)電鏡下，電鏡下，肺炎支原體(球形)電鏡下，肺炎支原體

電鏡下，肺炎支原體微生物5-抗酸染色課件微生物5-抗酸染色課件1、鉤端螺旋體體呈圓柱形但纖細(xì)，大小約0.1～0.2μm×6～12μm。螺旋細(xì)密而規(guī)則，菌體一端或兩端彎曲呈鉤狀，整個(gè)菌體呈C、S形狀。鉤體的最外層為外膜，其內(nèi)為螺旋狀的肽聚糖層和胞膜包繞的細(xì)胞質(zhì)，在外膜與肽聚糖層之間有兩根軸絲（內(nèi)漿鞭毛），各由一端伸至菌體的中央。常用Fontana銀染色法，將其染成棕褐色。

四病原性螺旋體1、鉤端螺旋體四病原性螺旋體Fontana銀染色法，將其染成棕褐色。X1000Fontana銀染色法，將其染成棕褐色。X1000微生物5-抗酸染色課件2、梅毒螺旋體形體細(xì)長(zhǎng)且兩端尖直，螺旋致密而規(guī)則，運(yùn)動(dòng)活潑。大小約6～15μm×0.1～0.2μm。菌體表面有莢膜樣物質(zhì)，其化學(xué)組成為脂多糖。圓柱體表面繞有3～4根軸絲，也稱內(nèi)鞭毛（endoflagella），與運(yùn)動(dòng)有關(guān).外膜蛋白具有高度免疫原性，在免疫學(xué)診斷及預(yù)防中可能起到重要作用。梅毒螺旋體基因?yàn)榄h(huán)狀DNA，長(zhǎng)約1000kb，有1041個(gè)ORF，半數(shù)以上ORF具有生物學(xué)功能。普通染色不易著色，常采用Fontana鍍銀染色法將其染成棕褐色，菌體變粗在光鏡下易于查見(jiàn)。新鮮病變標(biāo)本可直接在暗視野顯微鏡下，觀察其形態(tài)與運(yùn)動(dòng)方式。

2、梅毒螺旋體電鏡觀察其結(jié)構(gòu)有細(xì)胞壁和細(xì)胞膜，細(xì)胞膜內(nèi)為含有細(xì)胞質(zhì)和核質(zhì)的原生質(zhì)圓柱體。電鏡觀察其結(jié)構(gòu)有細(xì)胞壁和細(xì)胞膜，F(xiàn)ontana鍍銀染色X1000Fontana鍍銀染色暗視野梅毒螺旋體暗視野梅毒螺旋體真菌大分生孢子分生孢子（conidium）

由菌絲末端細(xì)胞分裂形成，也可在菌絲側(cè)面出芽形成，它又可分為體積較大，由多個(gè)細(xì)胞組成的大分生孢子和體積較小，只含一個(gè)細(xì)胞的小分生孢子。真菌大分生孢子分生孢子（conidium）

由菌絲末端細(xì)胞真菌小分生孢子真菌小分生孢子抗酸染色

Acid-FastStain抗酸染色

Acid-FastStain原理：

由于分歧桿菌的胞壁含大量脂質(zhì)，主要是分枝菌酸，它包圍在肽聚糖的外面，所以分枝桿菌一般不易著色，可采用加溫、延長(zhǎng)著色時(shí)間或提高染料濃度等手段使其著色。但分枝菌酸與染料結(jié)合后，就很難被酸性脫色劑脫色。故分歧桿菌又稱為抗酸桿菌，這種染色方法又成為抗酸染色。延長(zhǎng)時(shí)間：5min提高染料濃度：初染用的酸復(fù)紅濃度是革蘭染色酸復(fù)紅濃度的10倍

鹽酸酒精：脫色能力遠(yuǎn)遠(yuǎn)強(qiáng)于95%酒精原理：由于分歧桿菌的胞壁含大量脂質(zhì)，主要是分枝菌酸，原理：齊-尼氏抗酸染色法是在加熱條件下使分枝菌酸與石炭酸復(fù)紅牢固結(jié)合成復(fù)合物，用鹽酸酒精處理也不脫色。當(dāng)再加堿性美蘭復(fù)染后，分枝桿菌仍然為紅色，而其他細(xì)菌及背景中的物質(zhì)為蘭色。目的要求：初步掌握抗酸染色的操作、結(jié)果判斷。原理：材料：結(jié)核病人痰液、載玻片、酒精燈、接種環(huán)抗酸染色液：石炭酸復(fù)紅液、3%鹽酸酒精溶液、呂氏美藍(lán)溶液。

方法：1、涂片：（1）取病患清晨痰液（2）取干酪樣壞死或帶血小塊，涂成薄膜狀（3）自然干燥，外焰固定，染色材料：2、抗酸染色（1）初染：夾住涂片一端，持平，滴加石碳酸復(fù)紅染液，使之完全覆蓋標(biāo)本，（或在已固定的結(jié)核分枝桿菌痰標(biāo)本涂片上放一小塊濾紙片，之后滴加數(shù)滴石炭酸復(fù)紅液后，）置酒精燈高處徐徐加熱，待染液出現(xiàn)蒸汽時(shí)移開(kāi)，蒸汽減少時(shí)再加熱，反復(fù)操作3-5分鐘。注意：不要使染液沸騰，若蒸發(fā)減少，可待玻片稍冷卻后適當(dāng)補(bǔ)充。2、抗酸染色（2）待玻片冷卻后，用水緩慢沖洗，用吸水紙吸干。（3）脫色：滴加3%鹽酸酒精，輕晃玻片，直至無(wú)紅色液體流下為止，一般作用1—3min*，水洗，吸干。（4）復(fù)染：用堿性美蘭溶液復(fù)染1min，用水沖洗后吸干。（5）*：不同文獻(xiàn)報(bào)道不同，范圍在30s至3min3、油鏡觀察（2）待玻片冷卻后，用水緩慢沖洗，用吸水紙吸干。結(jié)果：結(jié)核分枝桿菌染成紅色，菌體細(xì)長(zhǎng)，有時(shí)微彎，呈分枝狀排列，有時(shí)著色不均勻，呈顆粒狀。非抗酸菌及標(biāo)本中其他細(xì)胞均染成藍(lán)色。

①直接涂片—：仔細(xì)觀察至少300視野未發(fā)現(xiàn)抗酸菌；

士：300個(gè)視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)1—2個(gè)抗酸菌（全部涂膜鏡檢3遍）；

+：100個(gè)視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)1—9個(gè)抗酸菌（全部涂膜鏡檢1遍）；

2+：10個(gè)視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)1—9個(gè)抗酸菌；

3+：每個(gè)視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)1—9個(gè)抗酸菌；

4+：每個(gè)視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)9個(gè)以上的抗酸菌。

②集菌涂片結(jié)果*：按“發(fā)現(xiàn)抗酸染色

陽(yáng)性細(xì)菌”或“未發(fā)現(xiàn)抗酸染色陽(yáng)性細(xì)菌

”報(bào)告。

結(jié)果：微生物5-抗酸染色課件微生物5-抗酸染色課件集菌涂片：?、沉淀集菌法。取痰液2—3ml，40g/lNaOH1—2倍量混勻。經(jīng)103.43Pa高壓滅菌20—25min（或煮30min），3000r/min離心30min，棄上清液，取沉淀物涂片做抗酸染色或金胺“0”熒光染色鏡檢；П、漂浮集菌法。取晨痰2—3ml放入100ml三角瓶?jī)?nèi)，加1—2倍量40g/lNaOH溶液，經(jīng)103.43Pa高壓滅菌20—25min（或煮30min）。冷卻后滴加汽油0.3ml，瓶口蓋玻璃紙加塞，塞緊瓶口，置振蕩器或手搖振蕩10min，再加蒸餾水至滿瓶口而又不外溢，靜置10—15min，將已編號(hào)的潔凈載玻片蓋在瓶口上，靜置15—20min，取下載玻片并迅速將載玻片翻轉(zhuǎn)至浸膜向上，或用接種環(huán)取瓶口液面物涂于載玻片上，自然干燥，火焰固定后做抗酸染色或金胺“0”熒光染色，鏡檢。

集菌涂片：注意事項(xiàng)

①每張載玻片只允許涂1份標(biāo)本，不得涂2份或2份以上標(biāo)本，以免染色過(guò)程中菌體脫落而導(dǎo)致陰陽(yáng)結(jié)果混淆。使用過(guò)的玻片要徹底清洗干凈后才能再次使用，以防抗酸菌遺留在玻片上。

②抗酸染色時(shí)切勿使用染色缸。用于吸水的濾紙只能1片1張，不可重復(fù)使用。鏡檢時(shí)每檢查

1份標(biāo)本后，均需揩拭油鏡頭。滴加香柏油的玻璃棒或竹簽不得觸及玻片。

③抗酸染色時(shí)，脫色劑脫色時(shí)間寧長(zhǎng)勿短，結(jié)核分枝桿菌脫色時(shí)間長(zhǎng)至10—20min而不被脫色；而非抗酸菌則易脫色，故延長(zhǎng)脫色時(shí)間有一定的鑒別作用。

④為了防止實(shí)驗(yàn)室感染，可先將待檢的結(jié)核分枝桿菌標(biāo)本高壓滅菌后，涂片染色。這樣既安全又不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果（此法僅用于大規(guī)模實(shí)驗(yàn)）。注意事項(xiàng)

①每張載玻片只允許涂1份標(biāo)本，不得涂2份或2份以

恙蟲(chóng)病立克次體（R.tsutsugamushi）是恙蟲(chóng)病的病原體，短桿狀，平均長(zhǎng)度1.2um，常見(jiàn)成雙排列，在細(xì)胞質(zhì)近核處聚集生長(zhǎng)。

標(biāo)本來(lái)源：腹水涂片

染色：Giemsa

鏡下描述：細(xì)胞核邊

大量

紫紅色球桿狀菌體

名稱：恙蟲(chóng)病立克次體

意義：恙蟲(chóng)病二立克次體恙蟲(chóng)病立克次體（R.tsutsugamushi）是恙蟲(chóng)微生物5-抗酸染色課件

立克次體呈多形態(tài)性，球桿狀或桿狀，大小為0.3～0.6μmX0.8～2.0μm。革蘭染色陰性，但著色不明顯，常用馬基維羅或Giemsa法染色，前者立克次體被染成紅色，染色效果好，后者染成紫色或藍(lán)色。立克次體呈多形態(tài)性，球桿狀或桿狀，大小為0.3～0.6Giemsa染色，X1000Giemsa染色，X1000恙蟲(chóng)熱立克次體，X1000恙蟲(chóng)熱立克次體，X1000沒(méi)有細(xì)胞壁的原核生物。基因是環(huán)狀雙鏈DNA，目前已知80多種支原體，能在無(wú)生命培養(yǎng)基中生長(zhǎng)繁殖的最小微生物。

由于支原體無(wú)細(xì)胞壁，故呈多形態(tài)性，常見(jiàn)的為球狀、桿狀、絲狀及環(huán)狀。本病原的染色性較差，革蘭氏染色呈陽(yáng)性，可用姬姆薩或瑞特氏染色。

三支原體沒(méi)有細(xì)胞壁的原核生物。基因是環(huán)狀雙鏈DNA，目前已知80多種電鏡下，電鏡下，肺炎支原體(球形)電鏡下，電鏡下，肺炎支原體(球形)電鏡下，肺炎支原體

電鏡下，肺炎支原體微生物5-抗酸染色課件微生物5-抗酸染色課件1、鉤端螺旋體體呈圓柱形但纖細(xì)，大小約0.1～0.2μm×6～12μm。螺旋細(xì)密而規(guī)則，菌體一端或兩端彎曲呈鉤狀，整個(gè)菌體呈C、S形狀。鉤體的最外層為外膜，其內(nèi)為螺旋狀的肽聚糖層和胞膜包繞的細(xì)胞質(zhì)，在外膜與肽聚糖層之間有兩根軸絲（