中藥指紋圖譜李文娟中藥指紋圖譜李文娟1中藥指紋圖譜簡介1中藥指紋圖譜研究方法2中藥指紋圖譜研究內容3中藥指紋圖譜的建立與評價4中藥指紋圖譜示例5中藥指紋圖譜簡介1中藥指紋圖譜研究方法2中藥指紋圖譜研究內容21.中藥指紋圖譜簡介1.1指紋圖譜的起源與發展

中藥指紋圖譜鑒別借用了法醫學的指紋鑒定的概念，指紋圖譜技術應用于植物藥質量控制的歷史沿革：20世紀70年代——色譜技術的發展，人們大量采用薄層色譜（TLC）方法，將植物中化學成分展載于由各種擔體鋪成的薄層板上。根據薄層板上的斑點的位置、斑點大小、斑點、顏色、斑點數目的多少進行定性鑒別，這種薄層鑒別方法具備了指紋圖譜的特征。20世紀70-80年代——出現薄層掃描儀，日本和我國部分學者用薄層掃描儀得到復方成藥掃描圖作為色譜指紋圖嘗試應用于藥材及成藥分析。20世紀80-90年代——高效液相技術得到發展，同時植物藥中化學成分的分離鑒定、活性成分的不斷闡明，高效液相廣泛應用于定性、定量分析。西方普遍采用高效液相色譜法對植物藥中已知及未知組分進行控制，并形成相應的規范。目前高效液相色譜法已成為當前研究指紋圖譜的主要手段。1.中藥指紋圖譜簡介1.1指紋圖譜的起源與發展3

中藥化學信息：植物藥（包括來源于植物的中藥材）的提取物（包括中藥的湯藥）與化學合成藥最根本的區別是，它（即使是單味藥材）是多種化學成分的混合體。這種多種化學成分的綜合體構成了“中藥化學信息”。由于中藥的療效由多種成分的協同作用或“相克作用”，中藥中的化學信息有一定的模糊性。只有部分化學信息（包括已知的活性成分、已知的非活性成分、一部分未知成分）可表征于指紋圖譜中。1.2中藥指紋圖譜的定義中藥指紋圖譜，即中藥身份證，主要指中藥化學指紋圖譜，實際上是一種保證中藥質量的措施，是指對某種中藥材或中成藥等運用現代分離分析科學的手段，得到能夠標示該中藥的色譜或光譜的圖譜，最終用來對中藥質量評價的科學性方式。特點：通過指紋圖譜的特征性，能有效鑒別樣品的真偽或產地。通過指紋圖譜主要特征峰的面積或比例的制定，能有效控制產品的質量，確保產品質量的相對一致。中藥化學信息：植物藥（包括來源于植物的中藥材）41.3指紋圖譜在中藥評價中的應用指紋圖譜在評價中藥質量中的作用主要可以概括為觀察指紋圖譜的整體特征以鑒別生產前藥材的真偽;指紋圖譜可以區分植物藥材的不同部位;可以考察商品藥材及成藥的質量;從標準指紋圖譜可追蹤制劑中某些化學成分的變化;可以檢測原料與成品之間,成品的批間質量的穩定性。由次生代謝產物組成的中藥提取物的色譜指紋圖譜不僅具備個體的絕對的惟一性，更強調的是物種特征的惟一性與同種植物中的相似性。1.3指紋圖譜在中藥評價中的應用51.4中藥指紋圖譜的分類中藥指紋圖譜按應用對象分類，根據中藥指紋圖譜可用于中藥制劑研究、生產過程的各個階段，可分為中藥材(原料藥材)指紋圖譜、中藥原料藥(包括飲片、配伍顆粒)指紋圖譜和中藥制劑指紋圖譜。如分得更細，還可包括用于工藝生產過程中間產物的指紋圖譜。兩種中藥原料藥指紋圖譜應區別對待。對中藥飲片指紋圖譜的要求基本和中藥材指紋圖譜相同。對中藥配伍顆粒(包括標準提取物)指紋圖譜應要求高一點。中藥指紋圖譜按測定手段可分為中藥化學(成分)指紋圖譜和中藥生物指紋圖譜。中藥化學(成分)指紋圖譜系指采用光譜、色譜和其他分析方法建立的用以表征中藥化學成分的特征的指紋圖譜。光譜最常用的是紅外光譜(IR)。色譜最常用的是薄層色譜(TLC)、氣相色譜(GC)、高效液相色譜(HPLC)和毛細管電泳(CE)。其他方法包括波譜和聯用技術。中藥化學指紋圖譜首推色譜方法和聯用技術。TLC法簡便易行，但提供信息量有限，很難反映幾十種、上百種化學成分組成的復雜體系。GC適用于揮發性化學成分。HPLC適用于非揮發性成分，中藥中大部分化學成分均可用HPLC法得出良好的指紋圖譜。CE適用于大部分化學成分，特別是生物大分子——肽和蛋白的分離，但其重現性有待提高。1.4中藥指紋圖譜的分類中藥指紋圖譜按應用對象分類，根據中藥61.5中藥指紋圖譜建立的意義與原則

中藥指紋圖譜建立的是全面反映中藥內在化學成分的種類與數量，進而反映中藥的質量。現階段中藥的有效成分絕大多數沒有明確，采用中藥指紋圖譜的方式，將有效地表征中藥質量。指紋圖譜已為國際社會所認可，有利于中藥及產品進入國際市場。中藥指紋圖譜的建立，應以系統的化學成分和藥理學研究為依托，應體現系統性、特征性、重現性三個基本原則。實現中藥指紋圖譜的三原則，保證其標準化，做到統一規范，這樣才可以使中藥指紋圖譜得以推廣應用。1.5中藥指紋圖譜建立的意義與原則7

“系統性”是指指紋圖譜所反映的化學成分應包括中藥有效部位所含大部分成妥的種類，或指標成分的全部?！疤卣餍浴笔侵钢讣y圖譜中反映的化學成分信息（具體表現為保留時間或位移值）是具有高度選擇性的，這些信息的綜合結果，將能特征地區分中藥的真偽與優劣，成為中藥自身的“化學條碼”。“重現性”是指所建立的指紋圖譜，在規定的方法與條件下，不同的操作者和不同的實驗室應能作出相同的指紋圖譜，其誤差應在允許的范例內，這樣才可以保證指紋圖譜的使用具有通用性和實用性，也是作為標準方法所必備的特征之一。實現指紋圖譜的重現性，除在樣品制備方法、分析過程、結果處理待環節規范操作外，還應建立相應的評價機制，對指紋圖譜進行客觀評價，并公布標準指紋圖譜?！跋到y性”是指指紋圖譜所反映的化學成分應包括中藥有效82.中藥指紋圖譜研究方法學2.1常用指紋圖譜研究的方法與技術運用包括光譜、波譜、色譜、核磁共振、X射線衍射及各種技術的聯用等現代分析技術，將中藥化學信息通過色譜圖（液相色譜圖、氣相色譜圖或薄層色譜圖）等方式進行表達；并且對指紋圖譜經過計算、分析、比較、評價等過程，以技術參數、指紋特征等加以說明。研究對象的不同，指紋圖譜研究的方法與技術也不同，并都隨著現代科技技術的發展而發展，中藥指紋圖譜研究所采用的方法大致分為：色譜法：薄層色譜法（TLC）、液相色譜法（LC）、氣相色譜法（GC）、高效毛細管電泳法（CE）；光譜法：紫外光譜法（UV）、紅外光譜法（IR）、近紅外光譜法（NIR）；核磁共振法（NMR）等。色譜聯用技術：將色譜良好的分離能力與光譜或波譜特有的結構鑒別能力相結合并借助近年來發展起來的化學計量學技術和己有的光譜波譜標準庫，是完全可能對大部分中藥的化學成分進行定性和相對定量分析的。目前色譜光譜聯用技術如:GC-MS、HPLC-MS已經在中藥指紋指紋圖譜研究領域內獲得了一定的成功。2.中藥指紋圖譜研究方法學2.1常用指紋圖譜研究的方法與9薄層色譜(TLC)特點：由于操作簡單，展開劑組成靈活多樣，色譜后衍生方便，可以提供色彩斑瀾的彩色圖像，直觀易辨，在中藥鑒別中應用頻率最高。采用合格材料和標準操作，可得到高質量的色譜圖像，于同板同時比較鑒別多個樣品，配合數碼成像和數據處理，還可瞬間形成輪廓圖譜，并給出各峰積分值，加大信息量，從而提高綜合分析能力，比較適合原料藥材指紋圖像分析。應用：TLC作為主要的鑒別方法被多國植物藥典收載?！吨袊幍?)2000年版一部采用薄層色譜法作鑒別的品種已達602種，占所收載的中藥材的60％以上。近年來TLC指紋圖譜的研究也較多，謝培山等對人參、西洋參、三七，在優化的規范操作條件下得到的薄層色譜熒光彩色圖像，在同一板上形象地比較了3個樣品的異同。顏玉貞等對黃連TLC指紋圖譜研究發，其熒光及紫外掃描輪廓圖可用以鑒別黃連。李彩君等對高良姜中黃酮類成分進行了薄層色譜指紋圖譜研究，可有效地鑒別高良姜。薄層色譜可同時鑒別多個樣品。缺點：存在著效能低、靈敏度差的缺點。而且其層析系統是一開放體系。要想得到穩定、重現性好的圖譜，必須嚴格控制實驗條件。其提供的信息有限對于成分復雜的中藥及其復方制劑難以用TLC指紋圖譜來鑒別及評價質量。薄層色譜(TLC)特點：由于操作簡單，展開劑組成靈活多樣，色10氣相色譜(GC)特點：以氣體為流動相，對于含揮發性成分中藥的鑒別具有一定優勢。由于裂解氣相色譜具有操作簡便、樣品無須化學前處理、提供信息量大等優點而格外引人注目。該方法將樣品故人裂解器內，在一定的條件下將樣品加熱使其瞬間裂解，生成可揮發性的小分子物質，立即被載氣帶人氣相色譜系統的分析柱上，分離后得到具有指紋性質的裂解氣相色譜圖。如果將氣相色譜與質譜、傅立葉變換紅外光譜聯用，則不但可以知道不同中藥中揮發性成分的差別，而且可以對這些成分進行鑒定。應用：氣相色譜適用于藥物中揮發性成分的分析，實際應用中常與質譜聯用。凌大奎等用規范化的色譜分離油成分的GC的保留指數(GCRI)，利用GC-MS和GC-傅利葉變換紅外光譜(FTIR)對各主要成分進行了定性鑒別。錢浩泉等用GC-MS聯用的方法，對高良姜及其近緣植物進行鑒別，發現它們的指紋特征明顯不同，各自特有的色譜圖譜具有特征代表性。氣相色譜(GC)11高效液相色譜(HPLC)特點：具有分離效能高、分析速度快、靈敏度高、方法重現性好、選擇性高、適用的樣品類型廣泛等特點。與薄層色譜相比，它是封閉系統色譜，受外界影響小，色譜穩定性、重現性好，其分離、鑒別能力遠遠高于薄層色譜。HPLC所分析的中藥中，有相當部分為次生代謝產物，而這些產物的組成和含量不僅和藥材本身的種屬有關，同時還與植物后天所處的地域環境、生長條件、采摘時間和炮制方法有很大的關系。對于中成藥來說，與產品的加工過程也有很大的聯系。不同的加工過程與方法都將對所得的指紋圖譜有相當影響，表現在峰高、峰面積、保留時間以及峰數量上的變化等。因此，HPLC不僅可以用來對生藥的真偽、優劣進行鑒定，同時還可以對中藥的加工過程進行監測，可以有效地分析鑒定經過不同的炮制、加工的中成藥。應用：已經普遍應用于中藥材及制劑的分析檢測，特別是三維高效液相色譜法近年來發展很快，非常適合構建中藥指紋圖譜。在中藥指紋圖譜中首推高效液相色譜指紋圖譜。粟曉黎等運用HPLC指紋圖譜法對中藥鬼臼的毒性成分進行分析，指出利用鬼臼的HPLC指紋圖譜可以鑒別鬼臼(桃兒七)、龍膽、威靈仙。高增平等以人參皂苷，為對照，建立了三七藥材的HPLC的指紋圖譜。翟為民等建立了人參、西洋參及三七的HPLC指紋圖譜用以鑒別區分三者。高效液相色譜(HPLC)特點：具有分離效能高、分析速度快、靈12高速逆流色譜指紋圖譜(HSCCC)特點：HSCCC利用動態液-液分配原理分離樣品，其分離度和重現性與HPLC類似，但樣品前處理簡單。具體地說它是一種基于液-液多級逆流萃取建立的色譜體系，以輕巧的聚四氟乙烯螺旋管作分離柱，在行星式運動中連續地完成整個分配、傳遞、分離過程；無固相載體，避免了待分離樣品與固相載體表面發生化學反應而變成不可逆吸附；分辨率高，可分離純品；可采用正向或反向的連續洗脫、步級洗脫、梯度洗脫等方式；可采用多種多樣的溶劑系統實現物質的對流分配；能在一個流程中分離復雜樣品中極性差異極大的各個組分，特別是能有效地分離強極性的組分；儀器及試劑成本明顯低于高效液相色譜，應用：適用于制備高純度、高附加值的化合物。沈平孃研究了HSCCC在中草藥分離、分析方面的應用。高速逆流色譜指紋圖譜(HSCCC)特點：HSCCC利用動態液13超臨界流體色譜法(SFC)特點：以超臨界流體作流動相，它通過控制壓力調節流動相的密度實現對溶解度的調節，從而使不同物質分別進行溶解與分離。超臨界流體溶解能力強，流動性好，傳質速率快，融合了HPLC和GC的優點而部分地避免了它們的缺點。SFC比GC應用范圍更廣，比HPLC定量效果更好，分離的時間更短，樣品的前處理更簡單，更易與大型分析儀如質譜儀、傅里葉變換紅外光譜儀和核磁共振譜儀等聯用。應用：SFC適用范圍很廣，理論上，能夠用HPLC分離和測定的化合物，都可以用SFC來分離和測定，某些用HPLC不能分離的物質用SFC也能得到較好的效果。超臨界流體色譜法(SFC)特點：以超臨界流體作流動相，它通過14高效毛細管電泳技術(HPCE)特點：是近10多年來發展很快的一種高效分離分析技術，以高壓電場為驅動，毛細管為分離通道，依據樣品中各組分淌度和分配行為上的差異而實現分離。具有靈敏度高、柱效高、分析速度快、所需樣品量少、溶劑消耗少和抗污染能力強等優點。應用：不僅適用于小分子酸堿、鹽及中性分子和生物大分子如核酸、多肽、蛋白質等的分析，在中藥有效成分分析方面也顯示出一定優勢。中國藥典2000年版已將其定為法定定性定量方法。孫毓慶等以毛細管電泳指紋圖譜研究了冬蟲夏草與蛹蟲草、人工蛹蟲革、偽品及次品的區別。高效毛細管電泳技術(HPCE)特點：是近10多年來發展很快的15紫外光譜(UV)和紅外光譜(IR)

UV——特征的差異，在—定程度上反映了中藥化學成分的差異。某些情況下，偽品雖可在外觀上以假亂真，但其化學成分的組成和含量與正品必有差異，這種差異在紫外光譜上必有所反映。如果中藥親緣相近而紫外光譜不易區別，可采用多階導數光譜法提高分辨率。IR——一直是藥品鑒定的權威方法，但這是對純物質而言的。中藥提取液是復雜的混合物體系，這一混合物的紅外光譜在本質上與純化合物的紅外光譜不同，它是混合物中各組分紅外光譜的疊加。中藥各種化學成分只要質和量相對穩定，并且樣品的處理方法按統一要求進行，則其紅外光譜應是相對穩定的。這樣得到的混合物紅外光譜應該具有一定的客觀性和可重復性。據此原理，不必將混合物紅外光譜各主要吸收峰進行歸屬，只要在4000-400cm-1范圍內比較光譜的差異即可。應該指出，紫外和紅外光譜都具有加和性，對于混合物來說，其鑒別專屬性差，分辨率低。需借助計算機模式識別技術或模糊數學方法進行處理。紫外光譜(UV)和紅外光譜(IR)UV——特征的差異，在—16核磁共振波譜(NMR)特點：植物中藥特征性化學成分往往不限一種，多表現為特征性成分組。因此，其特征性標準提取物的NMR譜是其中各種成分圖譜的疊加。在混合物的NMR圖譜上，除每個信號在磁場中的共振數據外，信號的相對強弱反映了混合物中各組分的相對含量。當圖譜不太復雜時，也可觀察到某些信號的偶合關系。通過對各化合物進行結構鑒定和NMR研究，可實現植物中藥NMR指紋圖譜的解析。應用：它是鑒定有機化合物結構的常規方法和重要手段。根據核磁共振譜圖上吸收峰的位置和強度，可獲得化合物的各類質子的化學位移、數量、偶合關系等結構信息。1HNMR圖譜具有良好的重現性和特征性，適用于中藥的品種鑒別和中藥特征總提取物的鑒定。秦海林等對人參、天麻、黃連、虎杖、何首烏等的特征總提取物的1HNMR指紋圖譜進行了研究，結果表明，所研究的各種植物的1HNMR指紋圖譜具有高度的特征性和很好的重現性，同一品種不同產地的樣品的1HNMR指紋圖譜也有很好的一致性。核磁共振波譜(NMR)特點：植物中藥特征性化學成分往往不限一17多維多息特征譜即聯用技術特點：將色譜法良好的分離能力與波譜法特有的結構鑒別能力相結合。所謂多維是指采用多種分析儀器聯用的模式，所謂多息是指中藥的特征譜應包括化學和藥效兩方面的信息。單一的分析方法難以反映中藥的復雜性，近年來采用多種現代分析儀器聯用方式得到的多維多息特征譜的應用在增加，已成為非常有效的分離、鑒定手段。例如：GC/MS、LC/MS、HPLC/MS、HPLC/NMR、CE/MS等聯用技術為中藥指紋圖譜的研究應用提供大量的信息。應用：目前最常用的是高效液相色譜(或毛細管電泳)／二極管陣列檢測器／質譜／質譜聯用方式(HPLC或CE/DAD/MS/MS)得到的指紋圖譜。如利用液質技術對樣品進行指紋圖譜的確定，應用質譜中質荷比(M/Z)值及HPLC圖峰響應比值比較兩者差異；利用LC-MS聯用技術對樣品組分進行多維多息化學特征譜的指認，通過質譜中質荷比(M/Z)值及HPLC中的峰保留時間的相互對照，主要成分進行歸屬。多維多息特征譜即聯用技術特點：將色譜法良好的分離能力與波譜法183.中藥指紋圖譜研究內容針對中藥材(炮制品、飲片)以及各類中藥復方制劑，研究不同的樣品制備方法及有效組分的分離方法。運用包括色譜、光譜以及多維、聯用分析技術，全面開展指紋圖譜測試，建立具有普適意義的、規范化的中藥指紋圖譜。主要包括以下內容:

1)中藥有效組分提取及分離方法研究及其規范化。2)色譜分離分析條件優化技術研究。3)多維、聯用分析新技術方法學研究。4)指紋圖譜中活性成分分析與鑒定。5)中藥指紋圖譜分析方法規范化研究。

3.中藥指紋圖譜研究內容針對中藥材(193.1指紋圖譜鑒別方法指紋圖譜鑒別方法研究主要包括:中藥指紋圖譜化學特征信息的提取方法研究。同一分析方法不同檢測方式及不同分析方法獲得的多源檢測數據間的相關性。指紋圖譜相似度計算方法。中藥指紋圖譜的快速處理方法。建立中藥指紋圖譜鑒別計算方法體系。中藥指紋圖譜質量控制主要包括:1)中藥指紋圖譜在中藥材的真偽鑒別及質量評價中的應用。2)中藥指紋圖譜在中藥制劑生產工藝全過程的質量控制和最終產品的質量評價，提出采用中藥指紋圖譜來實現從藥材、半成品到最終產品的全過程質量控制方法。3)中藥指紋圖譜在中藥新藥創制中的應用研究。3.1指紋圖譜鑒別方法指紋圖譜鑒別方法研究主要包括:中藥指紋203.3研究指紋圖譜的一般流程3.3研究指紋圖譜的一般流程21步驟1：供試品收集，獲取中藥或中藥材(供試品)并編號，標明產地、來源等等(收集不少于10批)。步驟2：鑒定，即委托有關部門對其進行鑒定(如:基源鑒定、性狀鑒定、顯微鑒定、理化鑒定，得到鑒定結果(如：真偽，優劣等)。步驟3：通過實驗手段獲取各中藥或中藥材的色譜指紋圖譜。步驟4：色譜峰指認，即人為標定出該中藥或中藥材的一組共有指紋峰，并在實驗所得的每張色譜指紋圖譜中將它們找出來。步驟5：以共有指紋峰為指標進行聚類分析，得到聚類分析結果，并與鑒定結果進行比較，比較結果應當相互符合，如果不符合就要從步驟1-5中找出不符合的原并因加以修正。步驟6

：從鑒定和聚類分析都認為品質比較好的中藥或中藥材中選取一部分(一般為十個或十個以上)，以他們的色譜圖為依據建立對照色譜指紋圖譜。步驟7

：以對照色譜指紋圖譜為標準圖譜，檢驗所有供試品，并與鑒定結果進行比較，比較結果應當相互符合，如果不符合就要從步驟1-7中找出不符合的原因并加以修正。步驟8

：將對照色譜指紋圖譜發放到廠家或相關部門試用。步驟9

：國家有關部門對色譜指紋圖譜的校驗和復核。步驟10

：指紋圖譜質量標準的書寫。3.4現行中藥色譜指紋圖譜研究工作的一般流程：3.4現行中藥色譜指紋圖譜研究工作的一般流程：223.5研究指紋圖譜的關鍵技術研究對象的確定

植物藥或中藥的成分可分為：蛋白質、脂類、糖及衍生物、有機酸、酚類、鞣質、醌類、內酯、香豆精、黃酮類皂苷類、生物堿類、甾體類、萜類、揮發油等。當研究某個注射劑品種的指紋圖譜時，首先必須調研相關的文獻、新藥申報資料（質量部分和工藝部分）及其它研究結果，盡可能詳盡地了解藥材、中間體及成品中所含水量成分的種類及其理化性質，經綜合分析后找出成品中的藥效成妥或有效成分，作為成品或中間體指紋圖譜的研究對象，即分析檢測目標。研究方法的選擇

主要采用色譜法。各種色譜法是互補的，應根據研究對象的實際需要和可能以及按照不同色譜的特點和優勢而定，目的是保證方法的重現性和確能反映產品質量的主要化學成分。一個中藥制劑指紋圖譜應可以同時采用兩種或更多種方法進行研究。指紋圖譜研究方法應根據研究對象的物理化學性質來選擇，大多數方法可采用HPLC法。通常揮發油類采用GC。一些難以檢測或采用上述方法得不到較理想的分離效果時，可采用TLC或CE。研究內容根據國家藥品監督管理局下發的《中藥注射劑指紋圖譜研究的技術要求》（暫行）的規定，主要研究內容有原藥材、中間體、注射劑的指紋圖譜，涉及樣品名稱、來源、制備、測定方法、指紋圖譜及技術參數等研究項。3.5研究指紋圖譜的關鍵技術研究對象的確定234.中藥色譜指紋圖譜的建立與評價

按技術要求分析/抽檢成品，并與對照色譜指紋圖譜及技術參數比較，判別檢測產品是否合格，是實施中藥指紋圖譜的最終目的。實現中藥指紋國庫券譜技術革新，除了研究中藥色譜指紋圖譜，還包括對照指紋圖譜及其技術參數的建立與指紋圖譜評價等過程。4.中藥色譜指紋圖譜的建立與評價按技術要求分244.1對照指紋圖譜的建立與指紋圖譜評價

目前對中藥材、中間體及成品（主要為注射劑）的指紋圖譜研究大多采用圖譜法，經分析檢測得到了大量的色譜數據。按《中藥注射劑指紋圖譜研究的技術要求》（暫行），需對以上色譜數據進行處理，才能得到指紋圖譜技術參數。如：相對保留時間、峰面積比值、相對標準偏差等。目前多采用人工手動計算的方法或借助于MicrosoftExcell等應用軟件計算這些參數，繁瑣，易出差錯，計算操作的過程了也不規范?，F在已對計算公式及計算過程要求規范。4.1對照指紋圖譜的建立與指紋圖譜評價25有關技術參數的計算公式（1）相對保留時間RTRTR（i）

TR（S）TR（i）各色譜峰的保留時間TR（s）參考峰的保留時間（2）積分相對比值RAA（i）

RA=A（s）A（i）為各色譜峰積分面積；

A（s）為參考峰積分面積。有關技術參數的計算公式26（3）相對標準偏差RSD%

∑（Xi

–X）2

n-1RSD%=

XXi為樣品相應參數；X為均值；n為樣品數量（個）。（3）相對標準偏差RSD%∑（Xi–X）2274.2中藥色譜對照指紋圖譜的建立與中藥色譜指紋圖譜評價的原則中藥指紋圖譜及技術參數一旦建立，就可以作為“標準”或“對照”/“參照”，所起作用如同對照藥材，樣品的色譜圖譜可與對照指紋圖譜進行比較。在對照指紋圖譜建立及與中藥指紋圖譜評價過程中須綜合考慮以下原則。4.2中藥色譜對照指紋圖譜的建立與中藥色譜指紋圖譜評價的原28整體性對照指紋圖譜的建與評價應注意指紋特征的整體性。一個品種的對照指紋圖譜是由各個具有指紋意義的峰組成的完整圖譜構成的，各個有指紋意義的峰（或薄層色譜的斑點）其位置（保留時間或比移值）、大小或高你（積分面積或峰高）、各峰之間相對的比例是指紋圖譜的綜合參數，建立和評價時從整體的角度綜合考慮，注意各有指紋意義的峰相互的依存關系。中藥色譜指紋圖譜在一定程度上與臨床療效的穩定性及用藥安全性方面有相關性，因此對照指紋圖譜中所有色譜峰在樣品指紋圖譜中均應體現且可追溯。只有在對照指紋圖譜中所有色譜峰的穩定體現，才是保證產品真正穩定可控的前提。為保證色譜指紋圖譜在整體上相似，在建立對照指紋圖譜時：①應盡可能包含所有具有指紋意義的特征峰，尤其是含量少面指紋意義顯著的色譜峰、指紋特征區、共有特征區；②排除溶劑峰及其他可以追溯的雜質峰，供試品的制備應與工業生產相似，并盡可能采用流動相來溶解。通過比較指紋圖譜在整體上的相似，楞以判斷出樣品的真實性.整體性29模糊性

在實際過程中由于受到各種因素的影響，樣品指紋圖譜中有可能出現個別色譜峰的增加/減少，色譜峰圖譜行為可能發生改變，如峰形、峰寬、峰高發生變化及保留時間發生偏移等，不可機械性地通過色譜圖的疊加來評價反指紋色譜圖和相似。增加/減少的色譜峰對指紋圖譜整體相似的貢獻，不是單純性的降低，有可能出現相互消長的現象。對于難以把握的色譜峰，建議由軟件去進行判別評價，盡可能避免人為判別評價。模糊性304.3指紋圖譜評價方法指紋圖譜相似性的評價從兩個方面考慮：（1）色譜的整體“面貌”，即有指紋意義的峰的數目、峰的位置和順序、各峰之間的大致比例（薄層色譜還有斑點的顏色）等是否相似，以判斷樣品的真實性。（2）以樣品與對照樣品或“標準圖譜”之間或不同批次樣品指紋圖譜之間總積分值作量化比較。如總積分面積相差較大（如+20%），則說明同樣量的樣品含有的內在物質上有明顯差異，這種差異是否允許，應視具體品種、具體工藝的實際情況，并結合含量測定項目綜合判斷。能比較應在同一臺儀器平行進行測定，評價的結果可能陳致誤判或不同評價者得到不同的評價結果，建議通過計算機輔助指紋圖譜相似度評價軟件來進行。4.3指紋圖譜評價方法指紋圖譜相似性的評價從兩個方面考慮：31評價指標采用相似度作為指紋圖譜評價的指標。引用變量根據《中藥注射劑指紋圖譜研究的技術要求》（暫行）之規定，與中藥指紋圖譜有關的技術參數如下：①保留時間（RT）；②峰高（height）；③峰面積（area）；④峰面積比（A%）；⑤相對保留時間（RRT）；⑥積分面積相對比值（RA）。相對保留時間（RRT）和積分面積相對比值（RA）是中藥指紋圖譜的兩個核心參數，可作為指紋相似度評價的重要變量。參照國外實驗室的做法，現選擇積分面積相對比值（RA）作為計算指紋圖譜相似度的變量。評價指標32參考文獻[1]中藥指紋圖譜研究綜述.李強,李超,齊魯藥事.2010,29(3)[2]中藥指紋圖譜的應用,呂春平,關銘.天津藥學2004,4,

16(2)[3]中藥指紋圖譜的分類和發展.羅國安,王義明.中國新藥雜志.2002,11(1)[4]中藥指紋圖譜的建立方法和作用.楊桂芳,王鵬.時珍國醫國藥,2004,15(1).[5]中藥指紋圖譜及其對中藥發展的影響.李克,王曙東,宋炳生.中草藥,2002，33(11)[6]中藥質量標準與中藥指紋圖譜.鄭恒,魏日胞,陳香美.中國醫院藥學雜志.2003,23(2)[7]中藥指紋圖譜學體系的構建.孫國祥,雒翠霞,任培培,時存義.中南藥學,2007,5(1)[8]多維檢測在中藥指紋圖譜中的應用.馮啟余.江南大學.2008[9]高效液相色譜法在中藥指紋圖譜中的應用現狀及分析.孫波,孫濤.時珍國醫國藥,2006,17(1)[10]中藥的毛細管電泳指紋圖譜研究.孫毓慶,阮婧華,馬欣.色譜,2003,21(4)[11]藥用植物揮發物指紋圖譜研究.浙江大學.倪士風.2003[12]中藥色譜指紋圖譜輔助分析系統.趙青。沈陽藥科大學.2006參考文獻[1]中藥指紋圖譜研究綜述.李強,李超,齊魯藥事.33

請老師批評指正！謝謝！thankyou！請老師批評指正！thankyou！34中藥指紋圖譜李文娟中藥指紋圖譜李文娟35中藥指紋圖譜簡介1中藥指紋圖譜研究方法2中藥指紋圖譜研究內容3中藥指紋圖譜的建立與評價4中藥指紋圖譜示例5中藥指紋圖譜簡介1中藥指紋圖譜研究方法2中藥指紋圖譜研究內容361.中藥指紋圖譜簡介1.1指紋圖譜的起源與發展

中藥指紋圖譜鑒別借用了法醫學的指紋鑒定的概念，指紋圖譜技術應用于植物藥質量控制的歷史沿革：20世紀70年代——色譜技術的發展，人們大量采用薄層色譜（TLC）方法，將植物中化學成分展載于由各種擔體鋪成的薄層板上。根據薄層板上的斑點的位置、斑點大小、斑點、顏色、斑點數目的多少進行定性鑒別，這種薄層鑒別方法具備了指紋圖譜的特征。20世紀70-80年代——出現薄層掃描儀，日本和我國部分學者用薄層掃描儀得到復方成藥掃描圖作為色譜指紋圖嘗試應用于藥材及成藥分析。20世紀80-90年代——高效液相技術得到發展，同時植物藥中化學成分的分離鑒定、活性成分的不斷闡明，高效液相廣泛應用于定性、定量分析。西方普遍采用高效液相色譜法對植物藥中已知及未知組分進行控制，并形成相應的規范。目前高效液相色譜法已成為當前研究指紋圖譜的主要手段。1.中藥指紋圖譜簡介1.1指紋圖譜的起源與發展37

中藥化學信息：植物藥（包括來源于植物的中藥材）的提取物（包括中藥的湯藥）與化學合成藥最根本的區別是，它（即使是單味藥材）是多種化學成分的混合體。這種多種化學成分的綜合體構成了“中藥化學信息”。由于中藥的療效由多種成分的協同作用或“相克作用”，中藥中的化學信息有一定的模糊性。只有部分化學信息（包括已知的活性成分、已知的非活性成分、一部分未知成分）可表征于指紋圖譜中。1.2中藥指紋圖譜的定義中藥指紋圖譜，即中藥身份證，主要指中藥化學指紋圖譜，實際上是一種保證中藥質量的措施，是指對某種中藥材或中成藥等運用現代分離分析科學的手段，得到能夠標示該中藥的色譜或光譜的圖譜，最終用來對中藥質量評價的科學性方式。特點：通過指紋圖譜的特征性，能有效鑒別樣品的真偽或產地。通過指紋圖譜主要特征峰的面積或比例的制定，能有效控制產品的質量，確保產品質量的相對一致。中藥化學信息：植物藥（包括來源于植物的中藥材）381.3指紋圖譜在中藥評價中的應用指紋圖譜在評價中藥質量中的作用主要可以概括為觀察指紋圖譜的整體特征以鑒別生產前藥材的真偽;指紋圖譜可以區分植物藥材的不同部位;可以考察商品藥材及成藥的質量;從標準指紋圖譜可追蹤制劑中某些化學成分的變化;可以檢測原料與成品之間,成品的批間質量的穩定性。由次生代謝產物組成的中藥提取物的色譜指紋圖譜不僅具備個體的絕對的惟一性，更強調的是物種特征的惟一性與同種植物中的相似性。1.3指紋圖譜在中藥評價中的應用391.4中藥指紋圖譜的分類中藥指紋圖譜按應用對象分類，根據中藥指紋圖譜可用于中藥制劑研究、生產過程的各個階段，可分為中藥材(原料藥材)指紋圖譜、中藥原料藥(包括飲片、配伍顆粒)指紋圖譜和中藥制劑指紋圖譜。如分得更細，還可包括用于工藝生產過程中間產物的指紋圖譜。兩種中藥原料藥指紋圖譜應區別對待。對中藥飲片指紋圖譜的要求基本和中藥材指紋圖譜相同。對中藥配伍顆粒(包括標準提取物)指紋圖譜應要求高一點。中藥指紋圖譜按測定手段可分為中藥化學(成分)指紋圖譜和中藥生物指紋圖譜。中藥化學(成分)指紋圖譜系指采用光譜、色譜和其他分析方法建立的用以表征中藥化學成分的特征的指紋圖譜。光譜最常用的是紅外光譜(IR)。色譜最常用的是薄層色譜(TLC)、氣相色譜(GC)、高效液相色譜(HPLC)和毛細管電泳(CE)。其他方法包括波譜和聯用技術。中藥化學指紋圖譜首推色譜方法和聯用技術。TLC法簡便易行，但提供信息量有限，很難反映幾十種、上百種化學成分組成的復雜體系。GC適用于揮發性化學成分。HPLC適用于非揮發性成分，中藥中大部分化學成分均可用HPLC法得出良好的指紋圖譜。CE適用于大部分化學成分，特別是生物大分子——肽和蛋白的分離，但其重現性有待提高。1.4中藥指紋圖譜的分類中藥指紋圖譜按應用對象分類，根據中藥401.5中藥指紋圖譜建立的意義與原則

中藥指紋圖譜建立的是全面反映中藥內在化學成分的種類與數量，進而反映中藥的質量?，F階段中藥的有效成分絕大多數沒有明確，采用中藥指紋圖譜的方式，將有效地表征中藥質量。指紋圖譜已為國際社會所認可，有利于中藥及產品進入國際市場。中藥指紋圖譜的建立，應以系統的化學成分和藥理學研究為依托，應體現系統性、特征性、重現性三個基本原則。實現中藥指紋圖譜的三原則，保證其標準化，做到統一規范，這樣才可以使中藥指紋圖譜得以推廣應用。1.5中藥指紋圖譜建立的意義與原則41

“系統性”是指指紋圖譜所反映的化學成分應包括中藥有效部位所含大部分成妥的種類，或指標成分的全部?！疤卣餍浴笔侵钢讣y圖譜中反映的化學成分信息（具體表現為保留時間或位移值）是具有高度選擇性的，這些信息的綜合結果，將能特征地區分中藥的真偽與優劣，成為中藥自身的“化學條碼”。“重現性”是指所建立的指紋圖譜，在規定的方法與條件下，不同的操作者和不同的實驗室應能作出相同的指紋圖譜，其誤差應在允許的范例內，這樣才可以保證指紋圖譜的使用具有通用性和實用性，也是作為標準方法所必備的特征之一。實現指紋圖譜的重現性，除在樣品制備方法、分析過程、結果處理待環節規范操作外，還應建立相應的評價機制，對指紋圖譜進行客觀評價，并公布標準指紋圖譜?！跋到y性”是指指紋圖譜所反映的化學成分應包括中藥有效422.中藥指紋圖譜研究方法學2.1常用指紋圖譜研究的方法與技術運用包括光譜、波譜、色譜、核磁共振、X射線衍射及各種技術的聯用等現代分析技術，將中藥化學信息通過色譜圖（液相色譜圖、氣相色譜圖或薄層色譜圖）等方式進行表達；并且對指紋圖譜經過計算、分析、比較、評價等過程，以技術參數、指紋特征等加以說明。研究對象的不同，指紋圖譜研究的方法與技術也不同，并都隨著現代科技技術的發展而發展，中藥指紋圖譜研究所采用的方法大致分為：色譜法：薄層色譜法（TLC）、液相色譜法（LC）、氣相色譜法（GC）、高效毛細管電泳法（CE）；光譜法：紫外光譜法（UV）、紅外光譜法（IR）、近紅外光譜法（NIR）；核磁共振法（NMR）等。色譜聯用技術：將色譜良好的分離能力與光譜或波譜特有的結構鑒別能力相結合并借助近年來發展起來的化學計量學技術和己有的光譜波譜標準庫，是完全可能對大部分中藥的化學成分進行定性和相對定量分析的。目前色譜光譜聯用技術如:GC-MS、HPLC-MS已經在中藥指紋指紋圖譜研究領域內獲得了一定的成功。2.中藥指紋圖譜研究方法學2.1常用指紋圖譜研究的方法與43薄層色譜(TLC)特點：由于操作簡單，展開劑組成靈活多樣，色譜后衍生方便，可以提供色彩斑瀾的彩色圖像，直觀易辨，在中藥鑒別中應用頻率最高。采用合格材料和標準操作，可得到高質量的色譜圖像，于同板同時比較鑒別多個樣品，配合數碼成像和數據處理，還可瞬間形成輪廓圖譜，并給出各峰積分值，加大信息量，從而提高綜合分析能力，比較適合原料藥材指紋圖像分析。應用：TLC作為主要的鑒別方法被多國植物藥典收載。《中國藥典))2000年版一部采用薄層色譜法作鑒別的品種已達602種，占所收載的中藥材的60％以上。近年來TLC指紋圖譜的研究也較多，謝培山等對人參、西洋參、三七，在優化的規范操作條件下得到的薄層色譜熒光彩色圖像，在同一板上形象地比較了3個樣品的異同。顏玉貞等對黃連TLC指紋圖譜研究發，其熒光及紫外掃描輪廓圖可用以鑒別黃連。李彩君等對高良姜中黃酮類成分進行了薄層色譜指紋圖譜研究，可有效地鑒別高良姜。薄層色譜可同時鑒別多個樣品。缺點：存在著效能低、靈敏度差的缺點。而且其層析系統是一開放體系。要想得到穩定、重現性好的圖譜，必須嚴格控制實驗條件。其提供的信息有限對于成分復雜的中藥及其復方制劑難以用TLC指紋圖譜來鑒別及評價質量。薄層色譜(TLC)特點：由于操作簡單，展開劑組成靈活多樣，色44氣相色譜(GC)特點：以氣體為流動相，對于含揮發性成分中藥的鑒別具有一定優勢。由于裂解氣相色譜具有操作簡便、樣品無須化學前處理、提供信息量大等優點而格外引人注目。該方法將樣品故人裂解器內，在一定的條件下將樣品加熱使其瞬間裂解，生成可揮發性的小分子物質，立即被載氣帶人氣相色譜系統的分析柱上，分離后得到具有指紋性質的裂解氣相色譜圖。如果將氣相色譜與質譜、傅立葉變換紅外光譜聯用，則不但可以知道不同中藥中揮發性成分的差別，而且可以對這些成分進行鑒定。應用：氣相色譜適用于藥物中揮發性成分的分析，實際應用中常與質譜聯用。凌大奎等用規范化的色譜分離油成分的GC的保留指數(GCRI)，利用GC-MS和GC-傅利葉變換紅外光譜(FTIR)對各主要成分進行了定性鑒別。錢浩泉等用GC-MS聯用的方法，對高良姜及其近緣植物進行鑒別，發現它們的指紋特征明顯不同，各自特有的色譜圖譜具有特征代表性。氣相色譜(GC)45高效液相色譜(HPLC)特點：具有分離效能高、分析速度快、靈敏度高、方法重現性好、選擇性高、適用的樣品類型廣泛等特點。與薄層色譜相比，它是封閉系統色譜，受外界影響小，色譜穩定性、重現性好，其分離、鑒別能力遠遠高于薄層色譜。HPLC所分析的中藥中，有相當部分為次生代謝產物，而這些產物的組成和含量不僅和藥材本身的種屬有關，同時還與植物后天所處的地域環境、生長條件、采摘時間和炮制方法有很大的關系。對于中成藥來說，與產品的加工過程也有很大的聯系。不同的加工過程與方法都將對所得的指紋圖譜有相當影響，表現在峰高、峰面積、保留時間以及峰數量上的變化等。因此，HPLC不僅可以用來對生藥的真偽、優劣進行鑒定，同時還可以對中藥的加工過程進行監測，可以有效地分析鑒定經過不同的炮制、加工的中成藥。應用：已經普遍應用于中藥材及制劑的分析檢測，特別是三維高效液相色譜法近年來發展很快，非常適合構建中藥指紋圖譜。在中藥指紋圖譜中首推高效液相色譜指紋圖譜。粟曉黎等運用HPLC指紋圖譜法對中藥鬼臼的毒性成分進行分析，指出利用鬼臼的HPLC指紋圖譜可以鑒別鬼臼(桃兒七)、龍膽、威靈仙。高增平等以人參皂苷，為對照，建立了三七藥材的HPLC的指紋圖譜。翟為民等建立了人參、西洋參及三七的HPLC指紋圖譜用以鑒別區分三者。高效液相色譜(HPLC)特點：具有分離效能高、分析速度快、靈46高速逆流色譜指紋圖譜(HSCCC)特點：HSCCC利用動態液-液分配原理分離樣品，其分離度和重現性與HPLC類似，但樣品前處理簡單。具體地說它是一種基于液-液多級逆流萃取建立的色譜體系，以輕巧的聚四氟乙烯螺旋管作分離柱，在行星式運動中連續地完成整個分配、傳遞、分離過程；無固相載體，避免了待分離樣品與固相載體表面發生化學反應而變成不可逆吸附；分辨率高，可分離純品；可采用正向或反向的連續洗脫、步級洗脫、梯度洗脫等方式；可采用多種多樣的溶劑系統實現物質的對流分配；能在一個流程中分離復雜樣品中極性差異極大的各個組分，特別是能有效地分離強極性的組分；儀器及試劑成本明顯低于高效液相色譜，應用：適用于制備高純度、高附加值的化合物。沈平孃研究了HSCCC在中草藥分離、分析方面的應用。高速逆流色譜指紋圖譜(HSCCC)特點：HSCCC利用動態液47超臨界流體色譜法(SFC)特點：以超臨界流體作流動相，它通過控制壓力調節流動相的密度實現對溶解度的調節，從而使不同物質分別進行溶解與分離。超臨界流體溶解能力強，流動性好，傳質速率快，融合了HPLC和GC的優點而部分地避免了它們的缺點。SFC比GC應用范圍更廣，比HPLC定量效果更好，分離的時間更短，樣品的前處理更簡單，更易與大型分析儀如質譜儀、傅里葉變換紅外光譜儀和核磁共振譜儀等聯用。應用：SFC適用范圍很廣，理論上，能夠用HPLC分離和測定的化合物，都可以用SFC來分離和測定，某些用HPLC不能分離的物質用SFC也能得到較好的效果。超臨界流體色譜法(SFC)特點：以超臨界流體作流動相，它通過48高效毛細管電泳技術(HPCE)特點：是近10多年來發展很快的一種高效分離分析技術，以高壓電場為驅動，毛細管為分離通道，依據樣品中各組分淌度和分配行為上的差異而實現分離。具有靈敏度高、柱效高、分析速度快、所需樣品量少、溶劑消耗少和抗污染能力強等優點。應用：不僅適用于小分子酸堿、鹽及中性分子和生物大分子如核酸、多肽、蛋白質等的分析，在中藥有效成分分析方面也顯示出一定優勢。中國藥典2000年版已將其定為法定定性定量方法。孫毓慶等以毛細管電泳指紋圖譜研究了冬蟲夏草與蛹蟲草、人工蛹蟲革、偽品及次品的區別。高效毛細管電泳技術(HPCE)特點：是近10多年來發展很快的49紫外光譜(UV)和紅外光譜(IR)

UV——特征的差異，在—定程度上反映了中藥化學成分的差異。某些情況下，偽品雖可在外觀上以假亂真，但其化學成分的組成和含量與正品必有差異，這種差異在紫外光譜上必有所反映。如果中藥親緣相近而紫外光譜不易區別，可采用多階導數光譜法提高分辨率。IR——一直是藥品鑒定的權威方法，但這是對純物質而言的。中藥提取液是復雜的混合物體系，這一混合物的紅外光譜在本質上與純化合物的紅外光譜不同，它是混合物中各組分紅外光譜的疊加。中藥各種化學成分只要質和量相對穩定，并且樣品的處理方法按統一要求進行，則其紅外光譜應是相對穩定的。這樣得到的混合物紅外光譜應該具有一定的客觀性和可重復性。據此原理，不必將混合物紅外光譜各主要吸收峰進行歸屬，只要在4000-400cm-1范圍內比較光譜的差異即可。應該指出，紫外和紅外光譜都具有加和性，對于混合物來說，其鑒別專屬性差，分辨率低。需借助計算機模式識別技術或模糊數學方法進行處理。紫外光譜(UV)和紅外光譜(IR)UV——特征的差異，在—50核磁共振波譜(NMR)特點：植物中藥特征性化學成分往往不限一種，多表現為特征性成分組。因此，其特征性標準提取物的NMR譜是其中各種成分圖譜的疊加。在混合物的NMR圖譜上，除每個信號在磁場中的共振數據外，信號的相對強弱反映了混合物中各組分的相對含量。當圖譜不太復雜時，也可觀察到某些信號的偶合關系。通過對各化合物進行結構鑒定和NMR研究，可實現植物中藥NMR指紋圖譜的解析。應用：它是鑒定有機化合物結構的常規方法和重要手段。根據核磁共振譜圖上吸收峰的位置和強度，可獲得化合物的各類質子的化學位移、數量、偶合關系等結構信息。1HNMR圖譜具有良好的重現性和特征性，適用于中藥的品種鑒別和中藥特征總提取物的鑒定。秦海林等對人參、天麻、黃連、虎杖、何首烏等的特征總提取物的1HNMR指紋圖譜進行了研究，結果表明，所研究的各種植物的1HNMR指紋圖譜具有高度的特征性和很好的重現性，同一品種不同產地的樣品的1HNMR指紋圖譜也有很好的一致性。核磁共振波譜(NMR)特點：植物中藥特征性化學成分往往不限一51多維多息特征譜即聯用技術特點：將色譜法良好的分離能力與波譜法特有的結構鑒別能力相結合。所謂多維是指采用多種分析儀器聯用的模式，所謂多息是指中藥的特征譜應包括化學和藥效兩方面的信息。單一的分析方法難以反映中藥的復雜性，近年來采用多種現代分析儀器聯用方式得到的多維多息特征譜的應用在增加，已成為非常有效的分離、鑒定手段。例如：GC/MS、LC/MS、HPLC/MS、HPLC/NMR、CE/MS等聯用技術為中藥指紋圖譜的研究應用提供大量的信息。應用：目前最常用的是高效液相色譜(或毛細管電泳)／二極管陣列檢測器／質譜／質譜聯用方式(HPLC或CE/DAD/MS/MS)得到的指紋圖譜。如利用液質技術對樣品進行指紋圖譜的確定，應用質譜中質荷比(M/Z)值及HPLC圖峰響應比值比較兩者差異；利用LC-MS聯用技術對樣品組分進行多維多息化學特征譜的指認，通過質譜中質荷比(M/Z)值及HPLC中的峰保留時間的相互對照，主要成分進行歸屬。多維多息特征譜即聯用技術特點：將色譜法良好的分離能力與波譜法523.中藥指紋圖譜研究內容針對中藥材(炮制品、飲片)以及各類中藥復方制劑，研究不同的樣品制備方法及有效組分的分離方法。運用包括色譜、光譜以及多維、聯用分析技術，全面開展指紋圖譜測試，建立具有普適意義的、規范化的中藥指紋圖譜。主要包括以下內容:

1)中藥有效組分提取及分離方法研究及其規范化。2)色譜分離分析條件優化技術研究。3)多維、聯用分析新技術方法學研究。4)指紋圖譜中活性成分分析與鑒定。5)中藥指紋圖譜分析方法規范化研究。

3.中藥指紋圖譜研究內容針對中藥材(533.1指紋圖譜鑒別方法指紋圖譜鑒別方法研究主要包括:中藥指紋圖譜化學特征信息的提取方法研究。同一分析方法不同檢測方式及不同分析方法獲得的多源檢測數據間的相關性。指紋圖譜相似度計算方法。中藥指紋圖譜的快速處理方法。建立中藥指紋圖譜鑒別計算方法體系。中藥指紋圖譜質量控制主要包括:1)中藥指紋圖譜在中藥材的真偽鑒別及質量評價中的應用。2)中藥指紋圖譜在中藥制劑生產工藝全過程的質量控制和最終產品的質量評價，提出采用中藥指紋圖譜來實現從藥材、半成品到最終產品的全過程質量控制方法。3)中藥指紋圖譜在中藥新藥創制中的應用研究。3.1指紋圖譜鑒別方法指紋圖譜鑒別方法研究主要包括:中藥指紋543.3研究指紋圖譜的一般流程3.3研究指紋圖譜的一般流程55步驟1：供試品收集，獲取中藥或中藥材(供試品)并編號，標明產地、來源等等(收集不少于10批)。步驟2：鑒定，即委托有關部門對其進行鑒定(如:基源鑒定、性狀鑒定、顯微鑒定、理化鑒定，得到鑒定結果(如：真偽，優劣等)。步驟3：通過實驗手段獲取各中藥或中藥材的色譜指紋圖譜。步驟4：色譜峰指認，即人為標定出該中藥或中藥材的一組共有指紋峰，并在實驗所得的每張色譜指紋圖譜中將它們找出來。步驟5：以共有指紋峰為指標進行聚類分析，得到聚類分析結果，并與鑒定結果進行比較，比較結果應當相互符合，如果不符合就要從步驟1-5中找出不符合的原并因加以修正。步驟6

：從鑒定和聚類分析都認為品質比較好的中藥或中藥材中選取一部分(一般為十個或十個以上)，以他們的色譜圖為依據建立對照色譜指紋圖譜。步驟7

：以對照色譜指紋圖譜為標準圖譜，檢驗所有供試品，并與鑒定結果進行比較，比較結果應當相互符合，如果不符合就要從步驟1-7中找出不符合的原因并加以修正。步驟8

：將對照色譜指紋圖譜發放到廠家或相關部門試用。步驟9

：國家有關部門對色譜指紋圖譜的校驗和復核。步驟10

：指紋圖譜質量標準的書寫。3.4現行中藥色譜指紋圖譜研究工作的一般流程：3.4現行中藥色譜指紋圖譜研究工作的一般流程：563.5研究指紋圖譜的關鍵技術研究對象的確定

植物藥或中藥的成分可分為：蛋白質、脂類、糖及衍生物、有機酸、酚類、鞣質、醌類、內酯、香豆精、黃酮類皂苷類、生物堿類、甾體類、萜類、揮發油等。當研究某個注射劑品種的指紋圖譜時，首先必須調研相關的文獻、新藥申報資料（質量部分和工藝部分）及其它研究結果，盡可能詳盡地了解藥材、中間體及成品中所含水量成分的種類及其理化性質，經綜合分析后找出成品中的藥效成妥或有效成分，作為成品或中間體指紋圖譜的研究對象，即分析檢測目標。研究方法的選擇

主要采用色譜法。各種色譜法是互補的，應根據研究對象的實際需要和可能以及按照不同色譜的特點和優勢而定，目的是保證方法的重現性和確能反映產品質量的主要化學成分。一個中藥制劑指紋圖譜應可以同時采用兩種或更多種方法進行研究。指紋圖譜研究方法應根據研究對象的物理化學性質來選擇，大多數方法可采用HPLC法。通常揮發油類采用GC。一些難以檢測或采用上述方法得不到較理想的分離效果時，可采用TLC或CE。研究內容根據國家藥品監督管理局下發的《中藥注射劑指紋圖譜研究的技術要求》（暫行）的規定，主要研究內容有原藥材、中間體、注射劑的指紋圖譜，涉及樣品名稱、來源、制備、測定方法、指紋圖譜及技術參數等研究項。3.5研究指紋圖譜的關鍵技術研究對象的確定574.中藥色譜指紋圖譜的建立與評價

按技術要求分析/抽檢成品，并與對照色譜指紋圖譜及技術參數比較，判別檢測產品是否合格，是實施中藥指紋圖譜的最終目的。實現中藥指紋國庫券譜技術革新，除了研究中藥色譜指紋圖譜，還包括對照指紋圖譜及其技術參數的建立與指紋圖譜評價等過程。4.中藥色譜指紋圖譜的建立與評價按技術要求分584.1對照指紋圖譜的建立與指紋圖譜評價

目前對中藥材、中間體及成品（主要為注射劑）的指紋圖譜研究大多采用圖譜法，經分析檢測得到了大量的色譜數據。按《中藥注射劑指紋圖譜研究的技術要求》（暫行），需對以上色譜數據進行處理，才能得到指紋圖譜技術參數。如：相對保留時間、峰面積比值、相對標準偏差等。目前多采用人工手動計算的方法或借助于MicrosoftExcell等應用軟件計算這些參數，繁瑣，易出差錯，計算操作的過程了也不規范?，F在已對計算公式及計算過程要求規范。4.1對照指紋圖譜的建立與指紋圖譜評價59有關技術參數的計算公式（1）相對保留時間RTRTR（i）

TR（S）TR（i）各色譜峰的保留時間TR（s）參考峰的保留時間（2）積分相對比值RAA（i）

RA=A（s）A（i）為各色譜峰積分面積；

A（s）為參考峰積分面積。有關技