植物(zhíwù)染色體的孚爾根染色法第一頁，共14頁。一、實驗(shíyàn)原理第二頁，共14頁。孚爾根（Feulgen）染色法是鑒別細胞核中DNA的組織化學方法,其原理與希夫試劑的化學性質有關。希夫試劑是由堿性品紅與亞硫酸氫鈉和鹽酸作用而生成的,為無色透明的溶液,它遇醛類物質即呈紫紅色,故可用于鑒定醛基的存在。DNA分子(fēnzǐ)結構中本身無醛基,但在60oC1M鹽酸的水解作用下,部分地打斷DNA分子(fēnzǐ)中脫氧核糖與嘌呤間的糖苷鍵,使嘌呤堿基脫落,并在脫氧核糖的第一個碳原子上釋放出活性醛基,該基團遇希夫試劑即呈紫紅色。在細胞內只有DNA才具有這種反應,故可定性地鑒定細胞核內DNA的存在。這一染色方法是Feulgen和Rossenbeck于1924年首先發現和確定的,故稱孚爾根染色法。第三頁，共14頁。二、實驗(shíyàn)目的在熟悉火焰干燥法制片的基礎上,掌握弗爾根染色法,并觀察有絲分裂(yǒusīfēnliè)的各個時期第四頁，共14頁。將根尖換入60℃預熱的HCl,置于恒溫水浴中,在600.http://www.將根尖換入60℃預熱的HCl,置于恒溫水浴中,在600.5℃的條件下水解8-10分鐘。5g亞硫酸氫鈉或偏重亞硫酸鈉(鉀),搖動,溶解后密封于棕色瓶中,置于黑暗低溫處。在細胞內只有DNA才具有這種反應,故可定性地鑒定細胞核內DNA的存在。二、實驗(shíyàn)目的fr/determinisme_genetique_des_robes_des_chevaux_fichiers.在熟悉火焰干燥法制片的基礎上,掌握弗爾根染色法,并觀察有絲分裂(yǒusīfēnliè)的各個時期5g堿性品紅徐徐加入煮沸的100ml蒸餾水中,用玻璃棒攪拌,使之充分溶解,待溶液冷卻至58C左右,過濾于棕色瓶中。孚爾根（Feulgen）染色法是鑒別細胞核中DNA的組織化學方法,其原理與希夫試劑的化學性質有關。鑷子載玻片蓋玻片顯微鏡青霉素瓶子恒溫水浴鍋取固定好的根尖,用水洗2-3分鐘,放入室溫條件下的1NHCl處理根尖材料2-3分鐘。吸凈水分,加入Schiff試劑,蓋上蓋子,在黑暗條件下染色30分鐘,也可過夜(guò〃yè)。5g亞硫酸氫鈉或偏重亞硫酸鈉(鉀),搖動,溶解后密封于棕色瓶中,置于黑暗低溫處。用水漂洗,去掉細胞中殘存的一些有色的品紅分子。三、材料(cáiliào)、方法、器具、藥品小麥根尖希夫試劑，45%醋酸，Carnoy’s固定液堿性品紅、偏重亞硫酸鈉、活性炭、1M鹽酸(yánsuān)鑷子載玻片蓋玻片顯微鏡青霉素瓶子恒溫水浴鍋第五頁，共14頁。四、實驗(shíyàn)步驟第六頁，共14頁。希夫試劑(shìjì)的配制將0.5g堿性品紅徐徐加入煮沸的100ml蒸餾水中,用玻璃棒攪拌,使之充分溶解,待溶液冷卻至58C左右,過濾于棕色瓶中。當濾液冷卻至26C時,再加入10ml的1M鹽酸和0.5g亞硫酸氫鈉或偏重亞硫酸鈉(鉀),搖動,溶解后密封于棕色瓶中,置于黑暗低溫處。次日檢查溶液顏色,須呈無色透明或淡茶色才可使用。若稍呈紅色(hóngsè)可加入0.5g活性炭連續搖動,在4C下靜置過夜,然后過濾脫色。第七頁，共14頁。染色(rǎnsè)過程取固定好的根尖,用水洗2-3分鐘,放入室溫條件下的1NHCl處理根尖材料2-3分鐘。將根尖換入60℃預熱的HCl,置于恒溫水浴中,在600.5℃的條件下水解8-10分鐘。吸出熱HCl,換入室溫1NHCl再處理1-2分鐘,然后水洗2-3次。吸凈水分,加入Schiff試劑,蓋上蓋子,在黑暗條件下染色30分鐘,也可過夜(guò〃yè)。用水漂洗,去掉細胞中殘存的一些有色的品紅分子。取根尖置載玻片上,用鑷子夾碎后,加一滴45醋酸,然后蓋上蓋片。壓片、觀察。第八頁，共14頁。玉米(yùmǐ)染色體核型圖(2n=20),Feulgen染色第九頁，共14頁。玉米(yùmǐ)染色體核型圖(2n=20+2B)第十頁，共14頁。玉米(yùmǐ)染色體核型圖(2n=20+4B)/mnl/79/18rosado.htm第十一頁，共14頁。Rye,Secalecereale,2n=2x=14+2B(standardB),metaphaseIpairingwith5IIring+2IIrod+1Brod,FEULGENstaininghttp://www.desicca.de/Rye%20gene%20map/Other_genes/B_chromosome/b_chromosome.html第十二頁，共14頁。http://equitationpas