1、PCR 檢測實驗室操作規矩一、PCR 實驗室的設置及管理負責人：本實驗室采用實時熒光定量（定性（第三區）。每一工 作各工作區配置、功能和內務管理見各相關SOP 文件。一工作區。進入實驗區域（試劑準備區、標本處理區、擴增分析區） 需首先熟悉本程序的各項規則并且嚴格遵守執行，在本實驗室人員監督指導下進行。實驗完畢后做好清潔消毒工作。二、PCR 實驗室工作制度及糾紛的發生。適用范圍：一切本實驗室人員。細則：各區的用品不得混用。試劑準備區只能進行試劑的貯存及配制等相關操作（見相關SOP 文件)。RNAcNA 的合成（見相關SOP）。擴增分析區只能進行NA 或 cNA 的擴增、實時熒光PCR 擴增產物的

2、分析（見相關與維修。愛護科室財產，注意安全；離開實驗室前應關好門窗，檢查水、電等。三、PCR 實驗室內務管理制度目的：保證實驗室日常內務管理及清潔工作順利進行。適用范圍：實驗室相關人員及相關清潔工人。負責人：細則：非本室工作人員未經允許不得進入實驗室。各區的用品不得混用。實驗人員要有強烈的時間觀念，按時上下班，不遲到、早退。一切儀器（如PCR 擴增儀）各區的各種清潔消毒均應有記錄，工作衣消毒時注意各區應分開進行處理。4。 10四、PCR 實驗室人員的配置及管理目的：保證實驗室有足夠數量的合格的具備開展該類實驗能力的實驗人員。適用范圍：適用于實驗室人員配置、管理、培訓及考核。人員要求以上學歷。實

3、驗室工作人員應參加衛生部或省臨檢中心舉辦的PCR 技術培訓，并且取得合格證。關于于新進入本室的人員，如尚未取得PCR 人員配置實驗室應根據工作需要配備足夠的工作人員。人員培訓及考核實驗室負責人或負責人指定人員參加每年衛生部PCR 室間質評總結會。12 1 次PCR 安排未取得上崗培訓合格證的工作人員在合適的時間內參加技術培訓。科室不定期組織實驗室內部實驗人員學習、更新核酸擴增方面的相關知識，提升自身a)日常工作質量b）室內質控測評c)室間質控測評)在報怨處理中的表現a） 工 作 質 量 高 ， 質 控 測 評 成 績 優 秀 者b）有科研能力，并且有一定數量和質量的論文發表c)有獨創性工作成果

4、，經鑒定認可者）受到有關部門或群眾嘉獎者有下列情況者將受到懲處：b行。訓和提高，關于于不適合本室工作的人員要即時調離。人員管理果、培訓等相關材料復印件。技術檔案分文本檔案和電子檔案，文本檔案每年更新1 次，電子檔案隨時更新。五、PCR 實驗室清潔程序負責人：操作人：細則：實驗室地面必需平整、干凈，通道要利于通行，沒有無用的物品阻礙。處，常用的物品要容易尋找到。2751 次關于移液器咀進行 75%實驗進程中如發生標本或試劑外濺,應立即用 2酒精擦洗，并且用移動紫外燈消毒。（關于實驗臺面消毒）、天花板紫外燈消毒實驗室，每次開啟 3060 分鐘。一方向流程的原則來進行清潔。處理好各區廢棄物。每周將工

5、作服洗滌消毒，不同實驗區的工作服隔開洗滌。六、PCR 標本唯一標識編號規則負責人： 操作人：程序：按檢測日期分類標記根據標本送檢的日期,每天的標本關于應標記一種唯一的代號.按檢測類型分類標記根據檢測項目的不同,每種檢測項目關于應標記一種唯一的代號。按驗單接受順序編號在同種檢測類型的驗單中，按驗單順序編號。特殊標本的編號如有特殊情況，應在標記前面增加特異字母區別開。編號步驟a）關于當天送來的標本,根據編號的基本原則編號，每個樣本的每個檢測項目關于應一個唯一的編號.用筆在每張試驗申請單和關于應的樣本管上作好相同的標記。一統編號等。f)擴增得到結果后，先在統計簿上填入結果，作好記錄,再一一把實驗結果

6、填入相應申請單. g）發放試驗報告單。七、PCR 基因擴增實驗室的要求負責人：操作人：程序：一、臨床基因擴增試驗實驗室的設計（一）4 個區域在物理空間上必需是完全相互獨力的，各區域無論是在空間上還是在使用中，應當始終處于完全的分PCR1。試劑儲存和準備區:貯存試劑的制備、試劑的分裝和擴增反映混合液的準備，以及離心管、吸頭等消耗品的貯存和準備。2。標本制備區:核酸（RNA、NA)提取、貯存及其加入至擴增反映管。關于于涉及臨床樣本的操作，應契合生物安全二級實驗室防護設備、個人防護和操作規矩的要求。3。擴增區：cNA 合成、NA 擴增及檢測。4。擴增產物分析區：擴增片段的進一步分析測定，如雜交、酶切

7、電泳、變性高效液相分析、測序等。（二）臨床基因擴增試驗實驗室的空氣流向。臨床基因擴增試驗實驗室的空氣流向可 向空氣壓力遞減的方式進行。可經過安裝排風扇、負壓排風裝置或其他可行的方式實現。（三）工作區域儀器設備配置標準。（1）28和-20以下冰箱.（2)混勻器.(3） 微 量 加 樣 器 （ 覆 蓋 21000l）. (4）可移動紫外燈（近工作臺面 (5）（6）專用工作服和工作鞋(套)。(7）專用辦公用品。-80（2)高速離心機.（3)混勻器。（4)水浴箱或加熱模塊。微量加樣器（0.2-1000l）。可移動紫外燈（近工作臺面） 。(7）生物安全柜。（8）消耗品：一次性手套、耐高壓處理的離心管和加

8、樣器吸頭(帶濾芯）。(9）專用工作服和工作鞋(套)。專用辦公用品。如需處理大分子NA3。擴增區。（1）核酸擴增儀。（2)微量加樣器(覆蓋 0.2-1000l），(視情況定）。（3)可移動紫外燈(近工作臺面)。（4）消耗品：一次性手套、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭(帶濾芯）。(5）專用工作服和工作鞋. (6)專用辦公用品。4。擴增產物分析區.視試驗方法不同而定，基本配置如下:（1)微量加樣器（覆蓋 0.21000l）。（2)可移動紫外燈（近工作臺面).（3)消耗品:一次性手套、加樣器吸頭（帶濾芯）.（4)專用工作服和工作鞋。（5)專用辦公用品。上述各區域儀器設備配備為基本配備，實驗室應當根據自

9、己使用的擴增檢測技術或試劑的特點，關于儀器設備進行必要的增減。二、臨床基因擴增試驗實驗室工作基本原則（一)進入各工作區域應當嚴格依照單一方向進行，即試劑儲存和準備區標本制備區擴增區 擴增產物分析區。(二)各工作區域必需有明確的標記，不同工作區域內的設備、物品不得混用。（三）不同的工作區域使用不同的工作服（例如不同的顏色）。工作人員離開各工作區域時，不得將工作服帶出。(四）實驗室的清潔應當按試劑貯存和準備區標本制備區擴增區擴增產物分析區的方向進行。不同的實驗區域應當有其各自的清潔用具以防止交叉污染。(五)工作結束后，必需立即關于工作區進行清潔.工作區的實驗臺表面應當可耐受諸如次氯酸鈉的化學物質的

10、消毒清潔作用。實驗臺表面的紫外照射應當方便有效。由于紫外照射的距離和能量關于去污染的效果非常關鍵，因此可使用可移動紫外燈（254nm 波長)，在工作完成后調至實驗臺上 6090cm 內照射。由于擴增產物僅幾百或幾十堿基關于（bp），關于紫外線損傷不敏感,因此紫外照射擴增片段必需延長照射時間，最好是照射過夜。（六）實驗室的安全工作制度或安全標準操作程序，一切操作契合實驗室生物安全通用要求（GB19489-2008).三、臨床基因擴增試驗實驗室各區域工作注意事項(一）（三）(四)擴增產物分析區。核酸擴增后產物的分析方法多種多樣，如膜上或微孔板或芯片上探針雜交方法（放射性核素標記或非放射性核素標記）

11、Southern 轉移、核酸測序方法、質譜分析等。本區是最主要的擴增產物污染來PCRELISA 方法檢測1 mol/L HCl倒，而應當至遠離PCR1 mol/L HCl由于本區有可能會用到某些可致基因突變和有毒物質如溴化乙錠、丙烯酰胺、甲醛或放射性核素等，故應當注意實驗人員的安全防護。八、PCR 廢棄物的處理程序ETA負責人：操作人：細則：4。1 科室職責應關于本室工作人員講明本程序在預防交叉、實驗室污染及切斷傳遞途徑中的重要性，并且要求嚴格執行。4。2 實驗室一切垃圾，裝入專用污物袋內，各區備有：生活垃圾袋（黑色)及生物污染垃圾袋（黃色）。使用過的一次性消耗品(如試管、吸頭、離心管、等），

12、先放入10%次氯酸鈉溶液中浸泡 24 小時后，再放入黃色垃圾袋內，使用過的手套、鞋套等直接放入黃色垃圾袋內集中處理.4.3應重新滅菌，金屬工具可燒灼滅菌或消毒液浸泡；玻璃制品干熱或壓力蒸汽滅菌。4。4 一次性塑料痰盂，用 2%戊二醛液浸泡 24 小時后，放入黃色垃圾袋內集中處理。4。5 廢棄標本如血、尿、胸水、腹水、腦脊液、唾液、胃液、腸液、關節腔液等用10%的 84 液浸泡 24 小時后,集中處理。處理；關于可再次使用的玻璃、塑料或搪瓷容器，煮沸15 分鐘或加入 10次氯酸鈉溶液浸泡24 小時,消毒液每日更換，消毒后用洗滌劑及流水刷洗,瀝干,用于微生物培養采樣者，用壓力蒸汽滅菌后備用。九、基

13、因擴增檢測實驗及結果分析1、目的:保證擴增及結果分析的標準化、規矩化。負責:操作人：4、標準程序：。8發，查找原因，重做實驗。4.3。1 陰性關于照出現擴增.4。3.2 陽性關于照無擴增。3 大批甚至一切的標本都擴增了。4。3。4 室內質控血清檢測結果出現失控情況,實驗失控的具體標準詳見室內質控標準操作程序.4.4。1 陰性關于照沒有擴增，陽性關于照擴增.4.4。2 陽性標準品梯度曲線平滑均勻，斜率、截距和相關系數三個參數的數值均在范圍內.4。43 室內質控血清檢測結果處于在控狀態，具體標準詳見十、臨床標本的保存操作程序適用范圍：分子診斷室的一切臨床檢測標本。負責人：操作人：處理前的標本保存4

14、下短期（24h 內），下。b）咽拭子、痰或胸腹水、腦脊液、膿液標本短保存于-70下.a） 提取的核酸標本當天檢測可置 4保存，如當天不檢測應置-20保存。報告發出后第二天丟棄。/1 個星期，以備復查。超過 c）血清/血漿標本放置低溫冰箱保存時須有記錄，按編號順序存放，并且由專人負責管理.特殊標本的處理：十一、臨床標本的采集、運送、接受程序目的：規矩臨床待檢標本的正確采集、送檢和處理。適用范圍：分子診斷室的一切臨床檢測標本。負責:操作人：程序：標本的采集護人員采集并且送至實驗室。標本采集要求2ml 真空采集管或 。5ml 高壓滅菌離心管采集血液標本，血標本采集后在2 小時內送達實驗室。離心（試驗

15、單與標本一道）1.5ml45100g/L NaCl 水溶液霧化吸入或改變體位以使痰液易于咳出；關于于小兒可以輕壓胸骨柄上方以誘導咳痰，用消毒棉拭子刺激喉部引起咳嗽反射，用棉拭子采集標本。24 小時。標本的運送標本采集后，密閉、標（貼)姓名，應盡可能快的送至檢測實驗室，如運送時間需2 小時以上，必需用冰盒送至實驗室。接受樣本一律退回，并且有書面記錄。十二、PCR 生物安全防護措施目的：預防工作人員在實驗進程中被感染或污染。適用范圍：適用于本室一切工作人員。負責人：操作:細則：每天更換廢液缸的 2戊二醛溶液，并且保證 2配置消毒液時，正確量取足量的消毒劑（用量杯,保證濃度），水的用量也要正確，缸體

16、密封性良好。75%的酒精擦拭。3060 分鐘，如有需要可延長照射時間。本容器應完好無泄漏。處理標本時應穿工作服、戴手套，以免沾上皮膚。如手或其它部位的皮膚沾上血液或體 （血液、體液）或試劑不慎濺入眼內應立即用清水洗。在實驗進程中病人標本（血液、體液)外漏時，應立即用 2上半小時，然后用酒精擦洗，并且用紫外燈消毒。實驗完畢后應關于實驗室進行紫外消毒。十三、PCR 實驗室化學試劑配制程序:4%NaOH 溶液、75%酒精、消毒劑（尿酸或 二氯異氰尿酸鈉）2戊二醛溶液等。負責人：操作人：程序：化學試劑的配制：250ml 量桶一只，1000ml 量桶一只,1000ml 燒杯一只，三角燒瓶,100ml20

17、00ml 廣口瓶各一只。4NaOHa）用天平稱取 4 克分析純的NaOH 固體,置于一只三角燒瓶中。250ml100ml 水，緩緩注入盛放NaOH 固體的三角燒瓶中。c）搖蕩三角燒瓶使NaOH 固體充分溶解。)然后緩緩傾倒入 100ml 塑料試劑瓶中密封保存備用。一般桌面、器具和地面的消毒只要使有效氯達到500mg/L，即可達到消毒作用。 b）消毒劑為粉狀 克袋），500g1000mlc）如需加大消毒力度,則有效氯濃度加大。220ml1000ml980ml1000ml2000ml14 天十四、PCR 應急處理程序負責人：能、要求、維持和保養、常見故障的排除、尤其要嚴格依照操作規程操作。檢查核實

18、應急措施的有效性。儀器設備故障偶發現象或確屬不能立即排除的故障。用紅牌故障標志標示故障儀器，以防被錯誤使用。有滿足要求的替用設備的，啟用替用設備（準用儀器必需同時滿足實驗室管理措施（特別是防污染）的要求。供應方技術支持人員將在規則的時間內隨身攜帶備用設備到達現場。色故障標示（暫停使用），換上藍色正常標示（正常使用）。科室主任須檢查并且隨時跟蹤所采取措施的有效性。質量檢測，合格后方可使用。標本送至其它已得到衛生部臨檢中心認證的臨床基因擴增試驗實驗室檢。影響到檢測報告發出的情況，應在應急處理記錄表作記錄。十五、試劑的質檢標準操作程序目的：保證每批用于臨床實驗的試劑的質量良好，契合要求。適用范圍：各

19、種用于臨床實驗的核酸擴增熒光檢測試劑。負責人：操作人：程序：核關于試劑品種和數量并且檢查包裝：外包裝（內包裝（試劑瓶完整性、試劑配備品種完整性、使用說明書有否等）。驗.效驗實驗：要求設置：空白關于照、陰性關于照、陽性關于照、室內質控各一，陽性標準品梯度（10101010）。4568a)空白關于照出現擴增.如擴增曲線CT25，需反復實驗確證試劑污染。取液陽性關于照實驗，確定提取液失效問題。更換提取液后該批試劑方可使用。獨用提取液點樣上機，出現擴增，需更換提取液后方可使用該批試劑。陽性關于照檢出，陽性標準品未檢出或擴增曲線鮮明系統性CT 值偏大 5 個循環以上。提示陽性標準品存在問題。更換陽性標準

20、品后該批試劑方可投入使用。99）十六、離心機操作維持程序適用范圍：適用于本室使用的普通離心機。負責人：操作人：5程序：旋動定時旋鈕設定離心時間，緩慢旋轉轉速調節旋鈕使儀器轉速達到預定要求。(70水混合物或乙醇去污染）清潔離心室；離心室內的橡膠密封圈經去污 6. 儀器維持（1) 為確保安全和離心效果，儀器必需放置在堅固水平的臺面上，塑料蓋門上不得放置任何物品,樣本必需關于稱放置，并且在開機前確保已擰緊螺母。(2） 應經常檢查轉頭及試驗用的離心管是否有裂紋，老化等現象，如有須即時更換.（3） 試驗完畢后,需將儀器擦拭干凈，以防侵蝕。（4) 如樣本比重超過 1.2g/cm3，最高轉速 n 按下式計算

21、：n=nmax*-1.2/樣呂比重。（5） 當電機碳刷長度小于 6mm 時，必需即時更換。(6） 在離心機未停穩時不得開蓋。關.(9） 該儀器在日常使用中請注意契合“5.6，5。7”要求. (10） 嚴格依照儀器的開關機程序關機.7。 期間核查(1)本儀器不需要特別的周期間隔。（2） 校準物均為與ICSH 之標準相契合的校準物,測定值偏差均不超過其規則值。十七、冰箱操作維持規程目的：關于冰箱進行適當的維持，以確保冰箱的正常使用。適用范圍：本實驗室使用的各種品牌、型號的冰箱。:5程序：開、關機：冰箱按說明書要求放好后，插上電源線,冷藏室溫度開關置于 4度開關置于 20，2好的接地線。冰箱內禁止存

22、放與本實驗室無關的物品。源,用軟布蘸水擦拭冰箱內外，必要時可用中性洗滌劑。每日觀察冰箱內溫度并且記錄于冰箱的質控圖上。若溫度超出規則范圍，調節溫控使其回到正常范圍，并且進行記錄。若溫控調節無效，報請設備科維修，修理后須驗收合格并且簽字后方能正常使用。儀器維持(1） 使用注意.該儀器在日常使用中請注意契合“4。 注意事項”要求(2） 廢液瓶滿要即時倒掉廢液,切勿強行扯動紅黃兩根管來打開瓶蓋，檢查廢液瓶是否漏氣， 防止低真空出現。(3） 當出現堵孔時，按自動沖洗鍵沖洗管道。(4） 嚴格依照儀器的關機程序關機。期間核查（1 冰箱不需要特別的周期間隔.（2) 校準物均為與ICSH 之標準相契合的校準物

23、，測定值偏差均不超過其規則值。十八、生物安全柜操作維持規程目的：正確使用生物安全柜。SOP 適用于本實驗室使用的生物安全柜。負責人：操作:4。 性能參數:見說明書。認真進行清潔工作。1530 分鐘同時開啟紫外燈和風機組工作。均由指示燈指示其工作狀態。工作臺面上禁止存放不必要的物品，以保持工作區的潔凈氣流不受干擾。 分鐘后關閉紫外燈，關閉生物安全柜電源。每次使用生物安全柜后，均需關于其進行清潔。根據環境潔凈程度，定期將預過濾器中的濾料拆下清洗，一般間隔時間為36 個月。定期（1 次）0.3m/s,則必需更換高效空氣過濾器（由廠家或院儀器維修人員進行）.49 有相應的維持記錄,長期不使用的生物安全

24、柜撥下電源插頭。6。 儀器維持 注意事項”要求（2) 廢液瓶滿要即時倒掉廢液,切勿強行扯動紅黃兩根管來打開瓶蓋，檢查廢液瓶是否漏氣， 防止低真空出現。（3) 當出現堵孔時，按自動沖洗鍵沖洗管道。(4） 嚴格依照儀器的關機程序關機.7。 期間核查(1）PE-5700 基因擴增儀的定標不需要特別的周期間隔,本實驗室 PE-5700 基因擴增儀執行衛生部臨床試驗中心的指定校準。校準物均為與ICSH 之標準相契合的校準物，測定值偏差均不超過其規則值。十九、移液器操作維持規程適用范圍：本實驗室使用的可調式移液器。程序：移液器的使用裝上配套的Tip.前進移液法a） 將按鈕壓至第一停點位置;b ）23mm輕輕壓下操作按鈕至第一停點位置，放出液體。約1）松開按鈕使之回到起點位置。需要時，可更換管嘴繼續移液操作.a） 將操作按鈕向下壓至第二停點位置。b）將移液管管嘴浸入試劑瓶液面下23mm 深處,然后慢慢松開鈕吸入液體。待移入管嘴吸滿液體后，將管嘴撤出液面