1、臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的質(zhì)量保證衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心 李金明臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的質(zhì)量保證衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心 李金明臨質(zhì)量保證(Quality Assurance,QA)為一產(chǎn)品或服務(wù)滿足特定質(zhì)量要求提供充分可信性所必要的有計(jì)劃的和系統(tǒng)的措施。 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證質(zhì)量保證(Quality Assurance,QA)臨床基室內(nèi)質(zhì)量控制（Internal Quality Control,IQC)的概念由實(shí)驗(yàn)室工作人員，采取一定的方法和步驟，連續(xù)評(píng)價(jià)本實(shí)驗(yàn)室工作的可靠性程度，旨在監(jiān)測(cè)和控制本實(shí)驗(yàn)室工作的精密度，提高本室常規(guī)工作中批內(nèi)、批間樣本檢驗(yàn)的一致性，以確定測(cè)定結(jié)果是否可靠、可

2、否發(fā)出報(bào)告的一項(xiàng)工作?？筛爬?(1)執(zhí)行者：實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員；(2)目的：監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)室測(cè)定的重復(fù)性；(3)功能：決定了當(dāng)批測(cè)定的有效性，報(bào)告可否發(fā)出。是對(duì)實(shí)驗(yàn)室測(cè)定的即時(shí)性評(píng)價(jià)。 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證室內(nèi)質(zhì)量控制（Internal Quality Contro室間質(zhì)量評(píng)價(jià)（External Quality Assessment, EQA） 為客觀比較一實(shí)驗(yàn)室的測(cè)定結(jié)果與靶值的差異，由外單位機(jī)構(gòu)，采取一定的辦法，連續(xù)、客觀地評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)誤差并校正結(jié)果，使各實(shí)驗(yàn)室之間的結(jié)果具有可比性。這是對(duì)實(shí)驗(yàn)室操作和實(shí)驗(yàn)方法的回顧性評(píng)價(jià)，而不是用來(lái)決定在實(shí)時(shí)的測(cè)定結(jié)果的可接受性。當(dāng)EQA用來(lái)為執(zhí)業(yè)許

3、可或?qū)嶒?yàn)室認(rèn)證的目的而評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室操作時(shí)，常描述為實(shí)驗(yàn)室能力驗(yàn)證（Proficiency testing, PT）。在以前的文獻(xiàn)中，EQA常描述室間質(zhì)量控制。臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證室間質(zhì)量評(píng)價(jià)（External Quality Assess批 (Run)在相同條件下所獲得的一組測(cè)定。 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證批 (Run)在相同條件下所獲得的一組測(cè)定。 臨床基因擴(kuò)增檢定 義正態(tài)分布(Gaussian distribution) 當(dāng)一質(zhì)控物用同一方法在不同的時(shí)間重復(fù)多次測(cè)定，當(dāng)測(cè)定數(shù)據(jù)足夠多時(shí)，如以橫軸表示測(cè)定值，縱軸表示在大量測(cè)定中相應(yīng)測(cè)定值的個(gè)數(shù)，則可得到一個(gè)兩頭低，中間高，中為所有測(cè)定值的

4、均值，左右對(duì)稱的“鐘形”曲線，亦即正態(tài)分布，又稱高斯分布。 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證定 義正態(tài)分布(Gaussian distribution正態(tài)分布的基本統(tǒng)計(jì)學(xué)含義可用均數(shù)（X）、標(biāo)準(zhǔn)差（s）和概率來(lái)說(shuō)明。臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證正態(tài)分布的基本統(tǒng)計(jì)學(xué)含義可用均數(shù)（X）、標(biāo)準(zhǔn)差（s）和概率來(lái)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室常規(guī)測(cè)定步驟標(biāo)本收集：選擇測(cè)定項(xiàng)目、標(biāo)本收集和保存。實(shí)驗(yàn)室測(cè)定：標(biāo)本接收、貼標(biāo)簽、樣本處理、核酸擴(kuò)增、產(chǎn)物檢測(cè)、測(cè)定的有效性和臨床診療價(jià)值。報(bào)告和解釋：結(jié)果發(fā)出、結(jié)果解釋和臨床管理。臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室常規(guī)測(cè)定步驟標(biāo)本收集：選擇測(cè)定項(xiàng)目、質(zhì)量保證、室內(nèi)質(zhì)控和室

5、間質(zhì)評(píng)之間的關(guān)系臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證質(zhì)量保證、室內(nèi)質(zhì)控和室間質(zhì)評(píng)之間的關(guān)系臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保臨床標(biāo)本收集、運(yùn)送、保存及其質(zhì)量控制 標(biāo)本收集 標(biāo)本保存標(biāo)本運(yùn)送 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床標(biāo)本收集、運(yùn)送、保存及其質(zhì)量控制 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量標(biāo)本收集標(biāo)本采集時(shí)間對(duì)擴(kuò)增檢測(cè)結(jié)果的影響 標(biāo)本采集部位的準(zhǔn)備 標(biāo)本的類型和采集量 采樣質(zhì)量的評(píng)價(jià) 采樣及運(yùn)輸容器 標(biāo)本采集中的防污染 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證標(biāo)本收集標(biāo)本采集時(shí)間對(duì)擴(kuò)增檢測(cè)結(jié)果的影響 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)標(biāo)本采集時(shí)間對(duì)擴(kuò)增檢測(cè)結(jié)果的影響在疾病發(fā)展過(guò)程中，標(biāo)本采集過(guò)早或過(guò)晚都可能會(huì)給出假陰性結(jié)果。 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證標(biāo)本采集時(shí)間對(duì)擴(kuò)

6、增檢測(cè)結(jié)果的影響在疾病發(fā)展過(guò)程中，標(biāo)本采集過(guò)標(biāo)本采集部位的準(zhǔn)備血液標(biāo)本采集分泌物標(biāo)本:采集部位的清潔消毒可去掉污染的微生物或其它雜物,但應(yīng)適度,過(guò)度清潔消毒有可能會(huì)去掉或破壞靶微生物,故標(biāo)本采集部位的準(zhǔn)備應(yīng)由訓(xùn)練有素的人員進(jìn)行。臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證標(biāo)本采集部位的準(zhǔn)備血液標(biāo)本采集臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證標(biāo)本的類型和采集量標(biāo)本的類型: 血清(漿)、分泌物、痰、糞便、尿和腦脊液等。標(biāo)本的采集量:應(yīng)根據(jù)所測(cè)病原體而定。一般來(lái)說(shuō)，如果標(biāo)本的量對(duì)病原體培養(yǎng)夠用的話，則其量亦足以用于核酸提取及其后的擴(kuò)增檢測(cè)。對(duì)于定量測(cè)定來(lái)說(shuō)，對(duì)標(biāo)本的收集要求更為精確。臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證標(biāo)本的類型和采集量標(biāo)本的類型

7、: 血清(漿)、分泌物、痰、糞便采樣質(zhì)量的評(píng)價(jià)血清(漿)標(biāo)本:溶血、脂血等；分泌物、痰：評(píng)價(jià)內(nèi)容包括細(xì)胞組成，所需類型細(xì)胞的數(shù)量和核酸總量。 評(píng)價(jià)方法：包括肉眼觀察,顯微鏡下觀察和化學(xué)分析等。 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證采樣質(zhì)量的評(píng)價(jià)血清(漿)標(biāo)本:溶血、脂血等；臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)采樣及運(yùn)輸容器 標(biāo)本的采集材料如棉簽應(yīng)為一次性使用；采樣及運(yùn)輸容器應(yīng)為密閉的一次性無(wú)菌裝置；采樣所用的防腐劑、抗凝劑及相關(guān)試劑材料不應(yīng)對(duì)核酸擴(kuò)增及檢測(cè)過(guò)程造成干擾。 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證采樣及運(yùn)輸容器 標(biāo)本的采集材料如棉簽應(yīng)為一次性使用；臨床基因標(biāo)本采集中的防污染 采集中要特別注意污染，防止混入操作者的頭發(fā)、表皮細(xì)胞

8、、痰液等； 如使用玻璃器皿，必須經(jīng)高壓滅菌，以使可能存在的RNase失活。臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證標(biāo)本采集中的防污染 采集中要特別注意污染，防止混入操作者的頭標(biāo)本保存 靶核酸(尤其是RNA)易受核酸酶的作用而迅速降解，因此標(biāo)本的保存對(duì)于核酸擴(kuò)增測(cè)定的有效性極為重要。 使用GITC作為穩(wěn)定劑保存標(biāo)本，標(biāo)本可在室溫下穩(wěn)定約7天。 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證標(biāo)本保存 靶核酸(尤其是RNA)易受核酸酶的作用而迅速降解，標(biāo)本保存臨床體液標(biāo)本長(zhǎng)期保存應(yīng)在-70下。 如為提取核酸后用于DNA擴(kuò)增分析的樣本，可于10 mmol/L Tris,1mmol/L EDTA(pH7.58.0)緩沖液中4 下保存。 用于

9、RNA擴(kuò)增分析的樣本，則應(yīng)于上述緩沖液中-80或液氮下保存。 核酸的乙醇沉淀物則可于-20下保存。 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證標(biāo)本保存臨床體液標(biāo)本長(zhǎng)期保存應(yīng)在-70下。 臨床基因擴(kuò)增檢標(biāo)本運(yùn)送 樣本一經(jīng)采集，則應(yīng)盡可能快的送至檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室。樣本中如加入了適當(dāng)?shù)姆€(wěn)定劑,如用于RNA測(cè)定加入GITC的血清(漿)樣本和用于DNA測(cè)定的EDTA抗凝血等,則可在室溫下運(yùn)送或郵寄。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)待測(cè)靶核酸的特性，對(duì)各種臨床樣本的運(yùn)送條件作出相應(yīng)的規(guī)定。臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證標(biāo)本運(yùn)送 樣本一經(jīng)采集，則應(yīng)盡可能快的送至檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室。臨床基臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的室內(nèi)質(zhì)量控制測(cè)定前的質(zhì)量控制核酸樣本的制備及其質(zhì)量控制 統(tǒng)計(jì)

10、學(xué)質(zhì)量控制質(zhì)量控制的評(píng)價(jià)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的室內(nèi)質(zhì)量控制測(cè)定前的質(zhì)量控制臨床基因擴(kuò)增檢測(cè)定前質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)室設(shè)施、儀器設(shè)備及管理理想的試劑和操作方法 人員培訓(xùn)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證測(cè)定前質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)室設(shè)施、儀器設(shè)備及管理臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量實(shí)驗(yàn)室設(shè)施、儀器設(shè)備及管理臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有充分合理的空間、良好的照明和空調(diào)設(shè)備 ；實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備應(yīng)保養(yǎng)良好，實(shí)驗(yàn)用品要達(dá)到相應(yīng)的要求。加樣器的校準(zhǔn)？帶濾塞吸頭的使用及質(zhì)檢？離心機(jī)？熱循環(huán)儀？水浴箱和/或恒溫干浴儀？酶標(biāo)儀和洗板機(jī)？臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證實(shí)驗(yàn)室設(shè)施、儀器設(shè)備及管理臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有充分合理理想的核酸擴(kuò)增

11、實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)A產(chǎn)物分析區(qū)空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向緩沖間緩沖間緩沖間專用走廊工作流向擴(kuò)增區(qū)標(biāo)本制備區(qū)試劑準(zhǔn)備區(qū)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證理想的核酸擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)A產(chǎn)物分析區(qū)空氣流向空氣流向空氣流向產(chǎn)物分析區(qū)空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向緩沖間緩沖間緩沖間專用走廊工作流向擴(kuò)增區(qū)標(biāo)本制備區(qū)試劑準(zhǔn)備區(qū)理想的核酸擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)B臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證產(chǎn)物分析區(qū)空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向緩沖間緩沖間緩沖間核酸擴(kuò)增檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的一般原則各區(qū)獨(dú)立注意風(fēng)向因地制宜方便工作“十六字口訣”臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證核酸擴(kuò)增檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的一般原則各區(qū)獨(dú)立“十六字口訣”臨床基門試劑準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)擴(kuò)增區(qū)

12、產(chǎn)物分析區(qū)外走廊門門門門試劑準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)外走廊門門門門AB臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證門試劑準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)擴(kuò)增區(qū)產(chǎn)物分析區(qū)外走廊門門門門試劑準(zhǔn)備試劑準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)門門門門空氣流向空氣流向空氣流向臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證試劑準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)門門門門空氣流向空氣流向走廊走廊試劑準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)擴(kuò)增和產(chǎn)物分析區(qū)空氣流向空氣流向空氣流向其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證走廊走廊試劑準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)擴(kuò)增和產(chǎn)空氣流向空氣流向空氣流向門試劑準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)門門門空氣流向空氣流向+空

13、氣流向+走廊走廊試劑準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)擴(kuò)增和產(chǎn)物分析區(qū)空氣流向空氣流向+空氣流向+其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室其他實(shí)驗(yàn)室空氣流向臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證門試劑準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)門門門空氣流向空氣流向產(chǎn)物分析區(qū)空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向緩沖間緩沖間緩沖間專用走廊工作流向擴(kuò)增區(qū)標(biāo)本制備區(qū)試劑準(zhǔn)備區(qū)傳遞窗傳遞窗傳遞窗臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證產(chǎn)物分析區(qū)空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向緩沖間緩沖間緩沖間“無(wú)基因”或“無(wú)核酸”概念的重要性臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證“無(wú)基因”或“無(wú)核酸”概念的重要性臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證基因擴(kuò)增儀器設(shè)備的質(zhì)控臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)

14、質(zhì)量保證基因擴(kuò)增儀器設(shè)備的質(zhì)控臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證帶濾芯吸頭的使用及質(zhì)檢首先制備一個(gè)含12%甘油及色素（如甲基橙）的水溶液，如果吸頭的最大體積為100l，則將加樣器吸取體積調(diào)至110120l，再套上吸頭后吸取上述有色液體。如果吸頭質(zhì)量好，則有色液體不應(yīng)出現(xiàn)在濾芯之上，否則說(shuō)明濾芯不嚴(yán)。 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證帶濾芯吸頭的使用及質(zhì)檢首先制備一個(gè)含12%甘油及色素（如甲核酸提取用離心管質(zhì)檢離心管PCR抑制物質(zhì)檢其他臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證核酸提取用離心管質(zhì)檢離心管PCR抑制物質(zhì)檢臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)擴(kuò)增儀孔間溫度的重復(fù)性和均一性的檢測(cè)方法一是使用一種熱電偶探針、微伏轉(zhuǎn)換器和自動(dòng)圖示記錄儀組成擴(kuò)

15、增加熱模塊孔內(nèi)溫度監(jiān)測(cè)記錄系統(tǒng)，當(dāng)孔間溫度變異超出1時(shí)，其可測(cè)出來(lái)。具體做法是將裝有TE緩沖液并上加石蠟油的擴(kuò)增反應(yīng)管放置于擴(kuò)增儀各孔中，熱電偶探針透過(guò)擴(kuò)增反應(yīng)管蓋插至緩沖液中，然后按程序進(jìn)行一個(gè)常規(guī)的PCR擴(kuò)增，加熱模塊如為96孔，則至少要測(cè)定12孔不同位置孔內(nèi)的溫度，在整個(gè)擴(kuò)增過(guò)程中，可移動(dòng)熱電偶探針至上述不同孔中監(jiān)測(cè)溫度，但每一孔內(nèi)溫度監(jiān)測(cè)至少要有一個(gè)擴(kuò)增周期。 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證擴(kuò)增儀孔間溫度的重復(fù)性和均一性的檢測(cè)方法一是使用一種熱電偶探擴(kuò)增儀孔間溫度的重復(fù)性和均一性的檢測(cè)方法第二種方法并非直接測(cè)定孔內(nèi)溫度，而是通過(guò)擴(kuò)增功能來(lái)間接獲知孔間的均一性，即將加有一已知的含一定濃度的陽(yáng)性

16、質(zhì)控樣本的擴(kuò)增反應(yīng)管置于擴(kuò)增儀各孔中按常規(guī)進(jìn)行擴(kuò)增檢測(cè)，觀察結(jié)果的一致性程度，如果有某一個(gè)或幾個(gè)孔結(jié)果有問(wèn)題，則應(yīng)確定這一個(gè)或幾個(gè)孔是否會(huì)重復(fù)性地得到假陰性結(jié)果，如果是，則表明相應(yīng)孔的熱傳導(dǎo)有損壞。 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證擴(kuò)增儀孔間溫度的重復(fù)性和均一性的檢測(cè)方法第二種方法并非直接測(cè)理想的試劑和操作方法 試劑盒的質(zhì)檢定量測(cè)定的精密度是測(cè)定組成步驟的變異和的平方根(SD)= 上式中SDa、SDb、SDc是步驟a、b、c等（例如試劑準(zhǔn)備、標(biāo)本采集、核酸提取、擴(kuò)增和產(chǎn)物檢測(cè)等）的標(biāo)準(zhǔn)差 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證理想的試劑和操作方法 試劑盒的質(zhì)檢臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證理想的試劑和操作方法改善測(cè)定精密

17、度的措施必須首先著重在最不精密的步驟上，應(yīng)對(duì)試劑準(zhǔn)備、標(biāo)本收集、核酸提取、測(cè)定方法和儀器操作寫出“標(biāo)準(zhǔn)操作程序”(SOP) 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證理想的試劑和操作方法改善測(cè)定精密度的措施必須首先著重在最不精實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的建立質(zhì)量手冊(cè)質(zhì)量體系程序文件標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOP) (相關(guān)記錄表格、報(bào)告)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的建立質(zhì)量手冊(cè)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證存在問(wèn)題SOP：形式，缺乏可操作性記錄：檢查型。多而雜。質(zhì)控：形式或沒(méi)有分析：缺乏。臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證存在問(wèn)題SOP：形式，缺乏可操作性臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理的內(nèi)涵寫你所應(yīng)做的做你所寫的記錄你已做

18、的分析你已做的臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理的內(nèi)涵寫你所應(yīng)做的臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證看得見(jiàn)的看不見(jiàn)的臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證好習(xí)慣是生產(chǎn)力習(xí)慣即命運(yùn)思維習(xí)慣與行為習(xí)慣羅馬不是一天建成的(Rome was not built in a day )臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證好習(xí)慣是生產(chǎn)力臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證質(zhì)量體系文件的三大特性法規(guī)性、唯一性和適用性。法規(guī)性:是指文件一旦制定完成并批準(zhǔn)實(shí)施，就必須認(rèn)真執(zhí)行，按照相應(yīng)的文件去完成日常檢驗(yàn)工作，也就是前面所說(shuō)的做你所寫的。

19、并且文件的修改不能隨意，只能按規(guī)定的程序進(jìn)行。唯一性:則是指（1）一個(gè)實(shí)驗(yàn)室只能有一個(gè)質(zhì)量體系文件系統(tǒng)；（2）一項(xiàng)檢驗(yàn)活動(dòng)只能有唯一的操作程序；（3）一項(xiàng)規(guī)定只能有唯一的理解，不產(chǎn)生歧義；（4）只能使用文件的有效版本，無(wú)效版本在實(shí)驗(yàn)室的任何地方都不能使用。適用性:是指質(zhì)量體系文件無(wú)統(tǒng)一格式；無(wú)標(biāo)準(zhǔn)文本；怎么做怎么寫，切合實(shí)際，具有可操作性，不拘一格。所有文件的規(guī)定均應(yīng)保證在臨床實(shí)際檢測(cè)工作中能完全做到。當(dāng)發(fā)現(xiàn)文件有不適合情況時(shí)，則應(yīng)立即按規(guī)定程序?qū)ξ募M(jìn)行修改。臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證質(zhì)量體系文件的三大特性法規(guī)性、唯一性和適用性。臨床基因擴(kuò)增檢SOP等于試劑盒說(shuō)明書(shū)嗎？臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證

20、SOP等于試劑盒說(shuō)明書(shū)嗎？臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證怎樣編寫SOP？XXX單位XXX實(shí)驗(yàn)室XXX標(biāo)準(zhǔn)操作程序編號(hào)：?jiǎn)⒂萌掌冢喊姹荆旱?頁(yè) 共 頁(yè)一目的：適用范圍：職責(zé)或責(zé)任人：（方法原理）（檢測(cè)設(shè)備和試劑）（所需的環(huán)境條件）操作步驟： 1 2 3 五、本操作程序變動(dòng)程序：六、相關(guān)的文件七、相關(guān)的記錄表格和報(bào)告編寫人審核人批準(zhǔn)人臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證怎樣編寫SOP？XXX單位XXX編號(hào)：編寫人審核人批準(zhǔn)人臨床SOP （5W和1H）誰(shuí)來(lái)做(Who)： 責(zé)任人做什么(What)：適用范圍何時(shí)（When）：適用范圍何地（Where）：適用范圍為什么做（Why）：目的如何做（How）：操作步驟臨床基因擴(kuò)

21、增檢驗(yàn)質(zhì)量保證SOP （5W和1H）誰(shuí)來(lái)做(Who)： 責(zé)任人臨床基因擴(kuò)增臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保

22、證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證 實(shí)驗(yàn)記錄表格的設(shè)計(jì)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證 實(shí)驗(yàn)記錄表格的設(shè)計(jì)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證存在問(wèn)題表格種類繁多重復(fù)記錄表格無(wú)實(shí)用性，用于檢查的痕跡很重臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)

23、量保證存在問(wèn)題表格種類繁多臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證記錄表格設(shè)計(jì)的基本原則信息充分簡(jiǎn)單明了臨床標(biāo)本的檢測(cè)信息能有機(jī)聯(lián)系起來(lái)融入LIS系統(tǒng)？臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證記錄表格設(shè)計(jì)的基本原則信息充分臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證 臨床PCR檢驗(yàn)流程記錄表 檢驗(yàn)日期 檢驗(yàn)項(xiàng)目： 擴(kuò)增儀中保存文件名： 使用說(shuō)明：1本記錄表須嚴(yán)格遵循試劑準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)擴(kuò)增區(qū)（產(chǎn)物分析區(qū)）單一流向移動(dòng)，嚴(yán)禁逆向移動(dòng)。2各項(xiàng)工作執(zhí)行后，在相應(yīng)敘述前的“”內(nèi)打“”。3本記錄表最后與相應(yīng)的標(biāo)本

24、接收記錄等歸檔保存于擴(kuò)增區(qū)的專用文件柜內(nèi)，以備查找。實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備 試劑在有效期內(nèi) 擴(kuò)增儀、加樣器和溫度計(jì)在校準(zhǔn)的有效期內(nèi) 生物安全柜的濾膜在使用有效期內(nèi) 消毒溶液在有效期內(nèi) 洗眼器內(nèi)無(wú)菌生理鹽水在有效期內(nèi) 離心管、帶濾芯吸頭已經(jīng)過(guò)質(zhì)檢合格 操作者： 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證 臨床PCR檢驗(yàn)流程記錄 試劑準(zhǔn)備區(qū)（1區(qū)）實(shí)驗(yàn)前 ： 打開(kāi)通風(fēng)設(shè)備 實(shí)驗(yàn)臺(tái)面清潔（水或70%酒精擦拭） 冰箱溫度：冷藏室（28） ； 冷凍室（182） 實(shí)驗(yàn)室溫度： （允許范圍：1030）；相對(duì)濕度： （允許范圍：30%80%）PCR試劑來(lái)源： （可直接列出有關(guān)廠家名稱） 批號(hào)：XXXXXXX 檢驗(yàn)項(xiàng)目： 本次實(shí)驗(yàn)用量： 人

25、份，剩余量： 人份。其他有關(guān)試劑配制： 按XXX（將有關(guān)SOP編號(hào)列出）SOP配制1%含氯消毒液 毫升； 按XXX（將有關(guān)SOP編號(hào)列出）SOP配制4NaOH溶液 毫升； 按XXX（將有關(guān)SOP編號(hào)列出）SOP配制0.1%焦磷酸二乙酯 毫升； 按XXX（將有關(guān)SOP編號(hào)列出）SOP配制 毫升； 其他： 儀器設(shè)備使用：離心機(jī)： 正常 不正常 振蕩器： 正常 不正常 超凈臺(tái)： 正常 不正常實(shí)驗(yàn)后： 按XXX（將有關(guān)SOP編號(hào)列出）SOP清潔實(shí)驗(yàn)室臺(tái)面、地面、加樣器和離心機(jī)，并進(jìn)行紫外照射30分鐘以上。 按XXX（將有關(guān)SOP編號(hào)列出）SOP處理實(shí)驗(yàn)廢棄物。 操作者： 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證 試劑

26、準(zhǔn)備區(qū)（1區(qū)）臨床基 標(biāo)本制備區(qū)（2區(qū)）實(shí)驗(yàn)前： 打開(kāi)通風(fēng)設(shè)備 實(shí)驗(yàn)臺(tái)面清潔（水或70%酒精擦拭） 冰箱（柜）溫度：冷藏室（28） ； 冷凍室（182） 實(shí)驗(yàn)室溫度： （允許范圍：1030）；相對(duì)濕度： （允許范圍：30%70%）陽(yáng)性室內(nèi)質(zhì)控物來(lái)源： 濃度及批號(hào)： 擴(kuò)增位置： 陰性室內(nèi)質(zhì)控物來(lái)源： 批號(hào)： 擴(kuò)增位置： 所取理的標(biāo)本（對(duì)應(yīng)標(biāo)本接收的唯一編號(hào)）及擬擴(kuò)增位置：191725 334149 2101826 3442503111927 3543514122028 3644525132129 3745536142230 3846 5471523313947 5581624324048 56核

27、酸提取及加樣過(guò)程：按XXX（列出編號(hào)）SOP進(jìn)行。儀器設(shè)備使用： 生物安全柜： 正常 不正常 恒溫儀溫度校準(zhǔn)： 離心機(jī)： 正常 不正常 振蕩器： 正常 不正常實(shí)驗(yàn)后： 按XXX（將有關(guān)SOP編號(hào)列出）SOP清潔實(shí)驗(yàn)室臺(tái)面、地面及儀器設(shè)備。 按XXX（將有關(guān)SOP編號(hào)列出）SOP處理實(shí)驗(yàn)廢棄物。 操作者： 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證 標(biāo)本制 擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)（3區(qū)）實(shí)驗(yàn)前 打開(kāi)通風(fēng)設(shè)備 實(shí)驗(yàn)臺(tái)面清潔（水或70%酒精擦拭） 實(shí)驗(yàn)室溫度： （允許范圍：1030）；相對(duì)濕度： （允許范圍：30%70%）擴(kuò)增儀操作： 開(kāi)機(jī)自檢及運(yùn)行正常 按XXX（列出編號(hào)）SOP進(jìn)行編程、參數(shù)設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算值：Slop

28、e值： （ ）Intercept值： （ ） r值： （ ）室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果：結(jié)果： 填寫室內(nèi)質(zhì)控記錄、描質(zhì)控圖 是否失控：否 是 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：見(jiàn)所附擴(kuò)增儀打印結(jié)果實(shí)驗(yàn)后： 按XXX（將有關(guān)SOP編號(hào)列出）SOP清潔實(shí)驗(yàn)室臺(tái)面、地面及儀器設(shè)備。 按XXX（將有關(guān)SOP編號(hào)列出）SOP處理實(shí)驗(yàn)廢棄物。 操作者： 失控原因及分析：（失控判斷標(biāo)準(zhǔn)及原因分析按XXXSOP進(jìn)行）臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證 擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)另外兩個(gè)存在較多問(wèn)題的檔案記錄人員的技術(shù)檔案：一人一個(gè)檔案（包括個(gè)人基本情況；學(xué)歷、學(xué)位、任職資格、培訓(xùn)證、上崗證、榮譽(yù)證書(shū)等的復(fù)印件；論文、著作、成果等的目錄和必要的證明文件復(fù)印件；培訓(xùn)考核

29、的記錄等。）儀器設(shè)備的技術(shù)檔案：一臺(tái)儀器一個(gè)檔案（包括儀器基本情況，如儀器設(shè)備名稱、型號(hào)、序列號(hào)、生產(chǎn)廠家、購(gòu)置日期、啟用日期、目前放置地點(diǎn)、責(zé)任人等；儀器校準(zhǔn)的記錄（本次校準(zhǔn)日期和下次應(yīng)校準(zhǔn)的日期、校準(zhǔn)證書(shū)或數(shù)據(jù)）；維修維護(hù)的歷史記錄；儀器使用說(shuō)明書(shū)、注冊(cè)證等的復(fù)印件；合格證書(shū)；配備的小配件如保險(xiǎn)絲、燈泡等）臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證另外兩個(gè)存在較多問(wèn)題的檔案記錄人員的技術(shù)檔案：一人一個(gè)檔案（人員培訓(xùn) 方法原理核酸擴(kuò)增檢測(cè)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)儀器設(shè)備使用、維護(hù)和校準(zhǔn)結(jié)果的分析、報(bào)告及進(jìn)一步處理質(zhì)控的分析知其然又知其所以然。 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證人員培訓(xùn) 方法原理臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證實(shí)驗(yàn)室人員內(nèi)部

30、培訓(xùn)的重要性外部培訓(xùn)提供的是“理念”，是被動(dòng)的，更多的是“學(xué)習(xí)”內(nèi)部培訓(xùn)是主動(dòng)的，源于實(shí)踐，高于實(shí)踐，更多的是“思考”臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證實(shí)驗(yàn)室人員內(nèi)部培訓(xùn)的重要性臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證人員培訓(xùn)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證人員培訓(xùn)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證如何培訓(xùn)的舉例：新購(gòu)儀器設(shè)備的操作培訓(xùn)在儀器購(gòu)買合同中，加入培訓(xùn)的內(nèi)容：廠家提供培訓(xùn)計(jì)劃培訓(xùn)計(jì)劃應(yīng)包括：培訓(xùn)教材（含具體培訓(xùn)內(nèi)容，如儀器操作及維護(hù)校準(zhǔn)的SOP、安全性）、培訓(xùn)者資質(zhì)證明、培訓(xùn)所需時(shí)間與次數(shù)、需要接受培訓(xùn)方準(zhǔn)備的條件（人員、用具和場(chǎng)地等）、培訓(xùn)合格的考核方法及判斷標(biāo)準(zhǔn)等。培訓(xùn)后保存所有有關(guān)記錄。臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證如何培訓(xùn)的

31、舉例：新購(gòu)儀器設(shè)備的操作培訓(xùn)在儀器購(gòu)買合同中，加入核酸樣本的制備、擴(kuò)增檢測(cè)及其質(zhì)量控制一般核酸提取試劑促使靶核酸從細(xì)胞內(nèi)釋出的原理核酸的分離純化靶核酸提取的質(zhì)量 臨床標(biāo)本及核酸提取中可能存在的抑制和干擾物質(zhì) 核酸樣本制備及擴(kuò)增檢測(cè)的質(zhì)控 產(chǎn)物檢測(cè)的質(zhì)控 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證核酸樣本的制備、擴(kuò)增檢測(cè)及其質(zhì)量控制一般核酸提取試劑促使靶核酸的分離純化 核酸的分離純化就是要將蛋白、脂類等干擾核酸擴(kuò)增的物質(zhì)去除。 經(jīng)典方法硅吸附法對(duì)于商品核酸提取試劑盒，臨床實(shí)驗(yàn)室在使用前，必須對(duì)其核酸提取純度和效率進(jìn)行評(píng)價(jià)。 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證核酸的分離純化 核酸的分離純化就是要將蛋白、脂類等干擾核酸擴(kuò)臨床標(biāo)

32、本及核酸提取中可能存在的抑制和干擾物質(zhì) 臨床標(biāo)本中：血清或血漿中的血紅素及其代謝產(chǎn)物、痰中酸性多糖和糖蛋白成份 、降解靶核酸的核酸酶等。核酸提取中：許多試劑如乙二胺四乙酸(EDTA)、去垢劑如十二烷基硫酸鹽(SDS)和chaotrope試劑如異硫氰酸胍和鹽酸胍等、酚、氯仿、乙醇等有機(jī)溶劑 。 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床標(biāo)本及核酸提取中可能存在的抑制和干擾物質(zhì) 臨床標(biāo)本中：血對(duì)臨床標(biāo)本中可能存在的抑制/干擾物的質(zhì)控措施質(zhì)控措施： 采用內(nèi)質(zhì)控（internal control, IC）（通常稱為內(nèi)標(biāo)）的方法 內(nèi)標(biāo)有兩種,即競(jìng)爭(zhēng)性的和非競(jìng)爭(zhēng)性的內(nèi)標(biāo)。 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證對(duì)臨床標(biāo)本中可能存在的

33、抑制/干擾物的質(zhì)控措施質(zhì)控措施： 采核酸提取及擴(kuò)增有效性的質(zhì)控 已知弱陽(yáng)性質(zhì)控樣本（基質(zhì)與待測(cè)標(biāo)本相同）：至少帶1份，其最后的檢測(cè)結(jié)果，應(yīng)是核酸提取和擴(kuò)增檢測(cè)的有效性的綜合反映。已知陰性質(zhì)控樣本（基質(zhì)與待測(cè)標(biāo)本相同）：至少帶1份，擴(kuò)增測(cè)定的結(jié)果可以判斷核酸提取過(guò)程中是否發(fā)生污染。 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證核酸提取及擴(kuò)增有效性的質(zhì)控 已知弱陽(yáng)性質(zhì)控樣本（基質(zhì)與待測(cè)標(biāo)室內(nèi)質(zhì)控方法非統(tǒng)計(jì)學(xué)方法統(tǒng)計(jì)質(zhì)控方法臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證室內(nèi)質(zhì)控方法臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證非統(tǒng)計(jì)學(xué)方法在檢測(cè)血液標(biāo)本的同時(shí)，檢測(cè)一定數(shù)量（與臨床樣本的數(shù)量相適應(yīng)）的已知弱陽(yáng)性（與試劑宣稱的測(cè)定下限相適應(yīng)）和陰性的質(zhì)控樣本檢測(cè)有效

34、的質(zhì)控判斷方法：陽(yáng)性檢測(cè)為陽(yáng)性（反應(yīng)性），陰性檢測(cè)為陰性（非反應(yīng)性）。臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證非統(tǒng)計(jì)學(xué)方法在檢測(cè)血液標(biāo)本的同時(shí)，檢測(cè)一定數(shù)量（與臨床樣本的統(tǒng)計(jì)學(xué)質(zhì)量控制 理想的室內(nèi)質(zhì)控樣本的條件測(cè)定中質(zhì)控樣本的設(shè)置、數(shù)量及排列順序 統(tǒng)計(jì)學(xué)質(zhì)控的特點(diǎn) 統(tǒng)計(jì)質(zhì)控方法臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證統(tǒng)計(jì)學(xué)質(zhì)量控制 理想的室內(nèi)質(zhì)控樣本的條件臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量理想的室內(nèi)質(zhì)控樣本的條件基質(zhì)與待測(cè)樣本一致；所含待測(cè)物濃度接近試驗(yàn)的決定性水平；穩(wěn)定；靶值或預(yù)期結(jié)果已定；無(wú)已知的生物傳染危險(xiǎn)性；單批可大量獲得；價(jià)廉臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證理想的室內(nèi)質(zhì)控樣本的條件基質(zhì)與待測(cè)樣本一致；臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)測(cè)定中質(zhì)控樣本的設(shè)置

35、、數(shù)量及排列順序標(biāo)本量不大，如少于30份，定性測(cè)定有1份接近c(diǎn)ut-off的弱陽(yáng)性和1份陰性質(zhì)控樣本應(yīng)可以滿足要求。樣本量大，則可按比例增加。定量測(cè)定則要根據(jù)試驗(yàn)的測(cè)定范圍，采用高、中、低三種濃度的質(zhì)控樣本。核酸提取時(shí)，質(zhì)控樣本要隨機(jī)放在臨床標(biāo)本中間。至于在測(cè)定中的排列順序，可排于標(biāo)準(zhǔn)品或校準(zhǔn)品之后，臨床樣本之前。 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證測(cè)定中質(zhì)控樣本的設(shè)置、數(shù)量及排列順序標(biāo)本量不大，如少于30份臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)控的獨(dú)特性即監(jiān)測(cè)污染發(fā)生的陰性質(zhì)控的設(shè)置。 可包括1份陰性原血清樣本、1份在標(biāo)本核酸提取過(guò)程中帶入的一個(gè)空管和僅含擴(kuò)增反應(yīng)混合液的管。 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)

36、室內(nèi)質(zhì)控的獨(dú)特性即監(jiān)測(cè)污染發(fā)生的陰性質(zhì)控的設(shè)陰性原血清質(zhì)控樣本的功能 監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)室的以前擴(kuò)增產(chǎn)物的污染； 由實(shí)驗(yàn)操作所致的標(biāo)本間的交叉污染；擴(kuò)增反應(yīng)試劑的污染。 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證陰性原血清質(zhì)控樣本的功能 監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)室的以前擴(kuò)增產(chǎn)物的污染； 在標(biāo)本核酸提取過(guò)程中帶入的一個(gè)空管的功能監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中的實(shí)驗(yàn)室污染和標(biāo)本間交叉污染.不能取代原血清陰性樣本。臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證在標(biāo)本核酸提取過(guò)程中帶入的一個(gè)空管的功能臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量?jī)H含擴(kuò)增反應(yīng)混合液的管的功能監(jiān)測(cè)擴(kuò)增試劑是否發(fā)生污染，具有較強(qiáng)的污染鑒別性。臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證僅含擴(kuò)增反應(yīng)混合液的管的功能監(jiān)測(cè)擴(kuò)增試劑是否發(fā)生污染，具有較

37、實(shí)驗(yàn)室是否發(fā)生污染的鑒別可將一個(gè)或多個(gè)空管打開(kāi)靜置于標(biāo)本制備區(qū)3060分鐘，然后加入擴(kuò)增反應(yīng)混合液同時(shí)以水替代核酸樣本擴(kuò)增，如為陽(yáng)性，而上述僅含擴(kuò)增反應(yīng)混合液的管為陰性，則說(shuō)明實(shí)驗(yàn)室以前擴(kuò)增產(chǎn)物的存在。 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證實(shí)驗(yàn)室是否發(fā)生污染的鑒別可將一個(gè)或多個(gè)空管打開(kāi)靜置于標(biāo)本制備統(tǒng)計(jì)學(xué)質(zhì)控的特點(diǎn) 檢驗(yàn)誤差有兩類，一是系統(tǒng)誤差，一是隨機(jī)誤差。系統(tǒng)誤差通常表現(xiàn)為質(zhì)控物測(cè)定均值的漂移，是由操作者所使用的儀器設(shè)備、試劑、標(biāo)準(zhǔn)品或校準(zhǔn)物出現(xiàn)問(wèn)題而造成的，這種誤差可以通過(guò)前述的措施方法加以控制，是可以排除的。隨機(jī)誤差則表現(xiàn)為測(cè)定SD的增大，主要是由實(shí)驗(yàn)操作人員的操作等隨機(jī)因素所致，其出現(xiàn)難以完全避

38、免和控制。臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證統(tǒng)計(jì)學(xué)質(zhì)控的特點(diǎn) 檢驗(yàn)誤差有兩類，一是系統(tǒng)誤差，一是隨機(jī)誤差統(tǒng)計(jì)學(xué)質(zhì)控的功能統(tǒng)計(jì)學(xué)質(zhì)控的功能就是發(fā)現(xiàn)誤差的產(chǎn)生及分析誤差產(chǎn)生的原因，采取措施予以避免。開(kāi)展統(tǒng)計(jì)質(zhì)量控制前，應(yīng)將可以控制的誤差產(chǎn)生因素盡可能地加以控制，這不但是做好室內(nèi)質(zhì)控的前提，也是保證常規(guī)檢驗(yàn)工作質(zhì)量的先決條件。 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證統(tǒng)計(jì)學(xué)質(zhì)控的功能統(tǒng)計(jì)學(xué)質(zhì)控的功能就是發(fā)現(xiàn)誤差的產(chǎn)生及分析誤差統(tǒng)計(jì)質(zhì)控方法 基線測(cè)定質(zhì)控規(guī)則的表達(dá)方式及定義 Levey-Jennings質(zhì)控圖方法 Levey-Jennings質(zhì)控圖結(jié)合Westgard多規(guī)則質(zhì)控方法 累積和 (CUSUM) 質(zhì)控方法 “即刻法”

39、質(zhì)控方法 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證統(tǒng)計(jì)質(zhì)控方法 基線測(cè)定臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證基線測(cè)定最佳條件下的變異（Optimal conditions variance, OCV）和常規(guī)條件下的變異（Routine conditions variance, RCV）； 當(dāng)RCV與OCV接近，或小于2 OCV時(shí)，則RCV是可以接受的。以上為批間變異。批內(nèi)變異的測(cè)定；室內(nèi)質(zhì)控物的測(cè)定準(zhǔn)確度的評(píng)價(jià)。 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證基線測(cè)定最佳條件下的變異（Optimal condition臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)IQC統(tǒng)計(jì)計(jì)算問(wèn)題可使用質(zhì)控樣本擴(kuò)增后的IU/ml來(lái)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)計(jì)算，也可用其對(duì)數(shù)值進(jìn)行。由于基因擴(kuò)增結(jié)果的原始數(shù)

40、據(jù)通常很大，故使用其對(duì)數(shù)值來(lái)進(jìn)行質(zhì)控統(tǒng)計(jì)分析可能要更為方便一些。 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)IQC統(tǒng)計(jì)計(jì)算問(wèn)題可使用質(zhì)控樣本擴(kuò)增后的I質(zhì)控規(guī)則的表達(dá)方式及定義 質(zhì)控規(guī)則的表達(dá)方式 質(zhì)控規(guī)則的功能 常用質(zhì)控規(guī)則的符號(hào)及定義 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證質(zhì)控規(guī)則的表達(dá)方式及定義 質(zhì)控規(guī)則的表達(dá)方式 臨床基因擴(kuò)增檢質(zhì)控規(guī)則的表達(dá)方式通常質(zhì)控規(guī)則以符號(hào)AL來(lái)表示，其中A為質(zhì)控測(cè)定中超出質(zhì)量控制限的測(cè)定值的個(gè)數(shù)，L為控制限，通常用均值或均值13SD來(lái)表示。 當(dāng)質(zhì)控測(cè)定值超出控制限L時(shí)，即可將該批測(cè)定判為失控。 常用的13S質(zhì)控規(guī)則，其中1為原式中的A，3s為原式中的L，表示均值3s，其確切的含

41、義為：在質(zhì)控測(cè)定值中，如果有一個(gè)測(cè)定值超出均值3s范圍，即可將該批測(cè)定判為失控。 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證質(zhì)控規(guī)則的表達(dá)方式通常質(zhì)控規(guī)則以符號(hào)AL來(lái)表示，其中A為質(zhì)控質(zhì)控規(guī)則的功能 簡(jiǎn)單地說(shuō)就是用于判斷測(cè)定批的失控還是在控 。臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證質(zhì)控規(guī)則的功能 簡(jiǎn)單地說(shuō)就是用于判斷測(cè)定批的失控還是在控 。常用質(zhì)控規(guī)則的符號(hào)及定義 符 號(hào) 定 義12S 一個(gè)質(zhì)控測(cè)定值超出2s控制限。13S 一個(gè)質(zhì)控測(cè)定值超出3s控制限。22S 兩個(gè)連續(xù)的質(zhì)控測(cè)定值同時(shí)超出+2s或2s控制限。R4S 同一批測(cè)定中，兩個(gè)不同濃度質(zhì)控物的測(cè)定值之間的 差值超出4s控制限。41S 四個(gè)連續(xù)的質(zhì)控測(cè)定值同時(shí)超出+1s

42、或1s控制限。7T 七個(gè)連續(xù)的質(zhì)控測(cè)定值呈現(xiàn)一個(gè)向上或向下的趨勢(shì)變 化。10X 十個(gè)連續(xù)的質(zhì)控測(cè)定值同時(shí)處于均值（X）的同一側(cè)。臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證常用質(zhì)控規(guī)則的符號(hào)及定義 符 號(hào) Levey-Jennings質(zhì)控圖方法 也稱Shewhart質(zhì)控圖，是由美國(guó)的Shewhart 于1924年首先提出，并用于工業(yè)產(chǎn)品的質(zhì)量控制。二十世紀(jì)五十年代初，Levey-Jennings將其引入臨床檢驗(yàn)的質(zhì)量控制 。經(jīng)Henry和Segalove的改良，即為目前常用的Levey-Jennings質(zhì)控圖。臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證Levey-Jennings質(zhì)控圖方法 也稱ShewhartLevey-Jenn

43、ings質(zhì)控圖臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證Levey-Jennings質(zhì)控圖臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證Levey-Jennings質(zhì)控圖基本的統(tǒng)計(jì)學(xué)含義穩(wěn)定條件下，在20個(gè)IQC結(jié)果中不應(yīng)有多于1個(gè)結(jié)果超過(guò)2SD（95.5%可信限）限度；在1000個(gè)測(cè)定結(jié)果中超過(guò)3SD（99.7%可信限）的結(jié)果不多于3個(gè)。如以3s為失控限，假失控的概率為0.3%。 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證Levey-Jennings質(zhì)控圖基本的統(tǒng)計(jì)學(xué)含義穩(wěn)定條件“假陽(yáng)性”的統(tǒng)計(jì)學(xué)室內(nèi)質(zhì)控方法基于日常檢驗(yàn)的陽(yáng)性率比值(呈正態(tài)分布)直接概率計(jì)算方法（不呈正態(tài)分布）臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證“假陽(yáng)性”的統(tǒng)計(jì)學(xué)室內(nèi)質(zhì)控方法基于日常檢驗(yàn)的陽(yáng)性

44、率比值(呈正“即刻”質(zhì)控方法 “即刻法” 的實(shí)質(zhì)是一種統(tǒng)計(jì)學(xué)方法,即Grubs異常值取舍法 只要有3個(gè)以上的數(shù)據(jù)即可決定是否有異常值的存在。 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證“即刻”質(zhì)控方法 “即刻法” 的實(shí)質(zhì)是一種統(tǒng)計(jì)學(xué)方法,即Gr室內(nèi)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)的評(píng)價(jià) IQC為一集體活動(dòng)，除實(shí)際測(cè)定者外，還應(yīng)有另外一人對(duì)測(cè)定數(shù)據(jù)進(jìn)行質(zhì)檢。不能將IQC作為一個(gè)監(jiān)察方法，當(dāng)發(fā)現(xiàn)一次測(cè)定未達(dá)到質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，應(yīng)以建設(shè)性的而非批評(píng)的方式去探查失控的原因。除了將IQC數(shù)據(jù)作為日常質(zhì)控外，還應(yīng)定期評(píng)價(jià)累積數(shù)據(jù)以監(jiān)測(cè)在測(cè)定操作中的長(zhǎng)期變化趨勢(shì)。評(píng)價(jià)應(yīng)定期進(jìn)行。臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證室內(nèi)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)的評(píng)價(jià) IQC為一集體活動(dòng)，除實(shí)際測(cè)定者

45、外，還應(yīng)分析你已做的每次實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析 表象與真象多次實(shí)驗(yàn)結(jié)果的綜合分析 趨勢(shì)的內(nèi)在含義儀器設(shè)備的使用情況分析 維護(hù)與校準(zhǔn)周期的有效性臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證分析你已做的每次實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證弱陽(yáng)性質(zhì)控樣本常見(jiàn)的失控原因 核酸提取中的隨機(jī)誤差。如核酸提取中的丟失、有機(jī)溶劑的去除不徹底、標(biāo)本中擴(kuò)增抑制物的殘留等。 儀器的問(wèn)題。如擴(kuò)增儀孔間溫度的不均一性、孔內(nèi)溫度與所示溫度的不一致性等。 試劑的問(wèn)題。如Taq酶和/或逆轉(zhuǎn)錄酶的失活、探針的純度及標(biāo)記效率和核酸提取試劑的效率等。 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證弱陽(yáng)性質(zhì)控樣本常見(jiàn)的失控原因 核酸提取中的隨機(jī)誤差。如核酸提陽(yáng)性質(zhì)控樣本測(cè)定結(jié)

46、果偏低或?yàn)殛幮越Y(jié)果偏低陰性臨床標(biāo)本中無(wú)強(qiáng)陽(yáng)性臨床標(biāo)本中有較強(qiáng)陽(yáng)性臨床標(biāo)本中有陽(yáng)性臨床標(biāo)本全為陰性觀察臨床標(biāo)本情況所用離心管含抑制物Taq酶活性降低核酸提取試劑效率低更換進(jìn)口離心管更換Taq酶再檢測(cè)更換核酸提取試劑所有標(biāo)本重新檢測(cè)核酸提取中靶核酸丟失核酸提取中抑 抑物殘留核酸提取試劑混入擴(kuò)增儀孔間溫度差異隨機(jī)誤差檢測(cè)質(zhì)控樣本及35份已知陽(yáng)性樣本質(zhì)控樣本測(cè)定正常且陽(yáng)性樣本有些值增加質(zhì)控及已知陽(yáng)性樣本測(cè)定仍異常按系統(tǒng)誤差途徑分析重新提取或已知濃度DNA在同一孔內(nèi)擴(kuò)增結(jié)果正常結(jié)果仍低進(jìn)行擴(kuò)增儀孔溫度校準(zhǔn)后再檢測(cè)Taq酶或逆轉(zhuǎn)錄酶失活臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證陽(yáng)性質(zhì)控樣本測(cè)定結(jié)果偏低或?yàn)殛幮越Y(jié)果偏低陰性臨

47、床標(biāo)本中無(wú)強(qiáng)陽(yáng)陰性質(zhì)控樣本的失控原因 主要為擴(kuò)增產(chǎn)物的“污染”和/或臨床標(biāo)本的核酸提取過(guò)程中發(fā)生的標(biāo)本間的交叉 “污染” 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證陰性質(zhì)控樣本的失控原因 主要為擴(kuò)增產(chǎn)物的“污染”和/或臨床標(biāo)陰性質(zhì)控樣本測(cè)定為陽(yáng)性臨床標(biāo)本亦全為陽(yáng)性臨床標(biāo)本中有陽(yáng)性也有陰性擴(kuò)增產(chǎn)物“污染”試劑“污染”同時(shí)檢測(cè)的標(biāo)本情況擴(kuò)增產(chǎn)物輕度“污染”標(biāo)本間交叉“污染”35空管室內(nèi)靜置58份水樣本檢測(cè)試劑直接擴(kuò)增檢測(cè)驗(yàn)證驗(yàn)證58份水樣本檢測(cè)暫停日常檢驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)室清潔、通風(fēng)更換試劑措施有陽(yáng)性，則確認(rèn)有實(shí)驗(yàn)室“污染”無(wú)陽(yáng)性，說(shuō)明為標(biāo)本交叉“污染”改善操作措施臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證陰性質(zhì)控樣本測(cè)定為陽(yáng)性臨床標(biāo)本亦全為

48、陽(yáng)性臨床標(biāo)本中有陽(yáng)性也有 一個(gè)臨床PCR實(shí)驗(yàn)室對(duì)全年室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果的分析舉例臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證 一個(gè)臨床PCR實(shí)驗(yàn)室對(duì)全年室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果的分析舉例臨床基因臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證IQC的局限性IQC可能測(cè)不出的誤差 測(cè)定前 測(cè)定中 測(cè)定后 樣本鑒定不對(duì) 樣本吸取不對(duì) 結(jié)果記錄錯(cuò)誤 樣本貯存中變質(zhì) 試劑加入不對(duì)此類誤差的發(fā)生率在不同的實(shí)驗(yàn)室有所不同，一般要求小于0.1%，且應(yīng)均衡地分布于測(cè)定前、測(cè)定中和測(cè)定后的不同階段。 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證IQC的局限性IQC可能測(cè)不出的誤差臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證影響臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)結(jié)果的最關(guān)鍵因素產(chǎn)物“污染”（Carry-over)測(cè)定人員的操作：標(biāo)本混淆；貼錯(cuò)標(biāo)簽、核酸提取等試劑臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量保證影響臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)結(jié)果的最關(guān)鍵因素產(chǎn)物“污染”（Carry避免基因擴(kuò)增檢驗(yàn)假陽(yáng)性結(jié)果的措施嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)室分區(qū)；使用帶“濾芯”的吸頭；設(shè)立“陰性”質(zhì)控（與標(biāo)本同