1、硫磺熏蒸對(duì)菊花中有效成分含量影響研究【摘要】目的考察硫熏枯燥對(duì)菊花中有效成分的含量影響。方法采用HPL法測(cè)定自然枯燥和硫磺熏蒸枯燥菊花中綠原酸、槲皮素、木犀草素的含量；采用分光光度法測(cè)定菊花中總黃酮的含量；采用鹽酸副玫瑰苯胺法測(cè)定各菊花中S2的殘留量。結(jié)果與自然枯燥的菊花相比，硫熏菊花中的槲皮素、木犀草素和總黃酮含量低于前者，而綠原酸含量高于前者，S2的殘留量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于前者。結(jié)論硫磺熏蒸對(duì)菊花中有效成分的含量變化有一定的影響，建議產(chǎn)地加工時(shí)應(yīng)限制使用硫熏枯燥法。【關(guān)鍵詞】菊花；硫熏枯燥；綠原酸；槲皮素；木犀草素；總黃酮菊花是菊科植物菊花hrysantheurifliuRaat的枯燥頭狀花序,為我

2、國(guó)常用中藥，具有疏風(fēng)、清熱、明目、解毒之成效。臨床上主要用于治療頭痛、眩暈、目赤、心胸?zé)帷郫從[毒等癥。目前市售的菊花多采用硫磺熏蒸的方法加以枯燥，以到達(dá)漂泊、美化外觀和防霉生蟲等目的。但硫磺熏蒸后的藥材是不利于入藥的，因?yàn)槠渲袣埩舻膩喠蛩猁}會(huì)對(duì)人體造成咽喉疼痛、胃部不適等傷害。此外，熏蒸后產(chǎn)生過(guò)多的S2也會(huì)對(duì)大氣造成嚴(yán)重污染。為考察硫磺熏蒸對(duì)菊花中綠原酸和黃酮類化合物含量的影響，今對(duì)自然枯燥菊花與硫熏菊花中綠原酸、槲皮素、木犀草素及S2的殘留量進(jìn)展了含量測(cè)定研究，為菊花資源的科學(xué)應(yīng)用提供參考。1儀器與材料1.1儀器戴安Ultiate3000高效液相色譜儀,Ultiate3000四元泵，Ul

3、tiate3000variableavelength檢測(cè)器，haelen工作站，KQ-250B超聲波清洗器昆山市超聲儀器，Spetru922E型分光光度計(jì)。1.2材料白菊花采自河北安國(guó)祁藥標(biāo)準(zhǔn)化種植基地。蘆丁對(duì)照品100080-202207、綠原酸對(duì)照品110753-202203、木犀草素對(duì)照品111720-202203、槲皮素對(duì)照品100081-202206均購(gòu)自中國(guó)生物制品檢定所。甲醇采用色譜醇，水為重蒸餾水，其余均為分析醇。2方法與結(jié)果2.1硫磺熏蒸菊花的制備將新采摘的菊花頭狀花序攤放于直徑為90的帶有支架的尼龍絲網(wǎng)圓篩中，把自制的體積約1.263聚氯乙稀罩自上而下套在外面，距地面約為1

4、0。將適量的硫磺置于陶瓷器皿中，點(diǎn)燃后迅速推入到垂直于圓篩的下方地面上，待其燃燒完全后，將聚氯乙稀罩下調(diào)至和地面充分接觸，形成密封環(huán)境，保存12h后取出，通風(fēng)至干，備用。2.2綠原酸的含量測(cè)定12.2.1色譜條件及系統(tǒng)適用性色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；0.1l/L磷酸二氫鈉溶液-甲醇7030為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)328n，流速1l/in。此條件下綠原酸的保存時(shí)間為6.61in。2.2.2對(duì)照品溶液的制備精細(xì)稱取綠原酸對(duì)照品適量，置于棕色量瓶中，加水制成64g/l，即得。2.2.3供試品溶液的制備取菊花粉末約2g，精細(xì)稱定，置錐形瓶中，精細(xì)參加甲醇100l，稱定質(zhì)量，加熱回流2h，冷卻，再

5、稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精細(xì)量取續(xù)濾液5l，蒸干，殘?jiān)鼌⒓勇确?l，浸3in，棄去，加水適量溶解，轉(zhuǎn)移至10l量瓶中，加水至刻度，搖勻，微孔濾膜濾過(guò)，即得。2.2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備分別精細(xì)汲取對(duì)照品品溶液0.5，1.0，1.5，2.0，3.0l，定容至10l，搖勻。汲取以上溶液80l，注入液相色譜儀，定量20l測(cè)定。以峰面積對(duì)濃度進(jìn)展回歸，得回歸方程：Y=1085.82467X-1.33989R=0.9996，說(shuō)明綠原酸在濃度0.0640.382g/l范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。2.2.5精細(xì)度實(shí)驗(yàn)取供試品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，記錄綠原酸的峰面積，計(jì)算RSD=1.21%，說(shuō)明精細(xì)度良

6、好。2.2.6重復(fù)性實(shí)驗(yàn)精細(xì)稱取供試品5份，按“2.2.3項(xiàng)下方法分別制成供試品溶液，進(jìn)樣分析，記錄綠原酸峰面積，結(jié)果RSD=1.67%，結(jié)果說(shuō)明本法重復(fù)性良好。2.2.7穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取同一份供試品溶液，分別在0，2，4，6，8h測(cè)定，記錄綠原酸峰面積，計(jì)算RSD=1.33%，外表樣品在8h內(nèi)穩(wěn)定。2.2.8回收率實(shí)驗(yàn)精細(xì)稱取供試品1.0g，按高、中、低分別參加綠原酸，照“2.2.3項(xiàng)下方法制備、測(cè)定，測(cè)得綠原酸平均回收率為97.51%，RSD=1.98%。2.2.9樣品的測(cè)定分別精細(xì)稱取各種樣品，按“2.2.3項(xiàng)下方法，制成供試品溶液，注入高效液相色譜儀進(jìn)展測(cè)定，記錄綠原酸的峰面積，計(jì)算含量。

7、結(jié)果見表1。表1各菊花中綠原酸含量測(cè)定結(jié)果略2.3槲皮素與木犀草素的含量測(cè)定22.3.1色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相是甲醇-水6040，用磷酸調(diào)pH值為3；檢測(cè)波長(zhǎng)253n，流速1l/in。此條件下槲皮素的保存時(shí)間為8.97in，木犀草素的保存時(shí)間為10.72in。2.3.2對(duì)照品溶液的制備稱取枯燥至恒重的槲皮素與木犀草素對(duì)照品適量，用甲醇溶解，定容至50l，得質(zhì)量濃度分別為0.0164，0.018g/l混合對(duì)照溶液，備用。2.3.3供試品溶液的制備精細(xì)稱取菊花粉末1g，置錐形瓶中，加70%乙醇30l在60恒溫水浴溫萃30in，冷卻，抽濾，洗滌至100l量瓶中，

8、用70%乙醇定容至刻度，搖勻。精細(xì)汲取5l溶液，參加1l濃度為4l/L的鹽酸于80恒溫水浴水解1h。用70%乙醇定容至10l，微孔濾膜濾過(guò)，即得。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2.3.4線性關(guān)系的考察精細(xì)汲取對(duì)照品溶液1，2，4，6，8l定容至10l。汲取上述溶液，注入液相色譜儀，定量20l，分析測(cè)定。以進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：槲皮素為Y=1584.4317X+0.70387(R=0.9994)；木犀草素為Y=376.6681X+0.5812(R=0.9996)，說(shuō)明槲皮素在0.32813.12g/l濃度范圍，木犀草素在0.3614.44g/l濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好

9、。2.3.5精細(xì)度實(shí)驗(yàn)取供試品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，分別記錄槲皮素和木犀草素峰面積，計(jì)算RSD分別為1.86%和1.91%，說(shuō)明精細(xì)度良好。2.3.6重復(fù)性實(shí)驗(yàn)精細(xì)稱取供試品5份，按“2.3.3項(xiàng)下方法分別制成供試品溶液，進(jìn)樣分析，記錄槲皮素和木犀草素峰面積，結(jié)果RSD分別為1.89%和1.77%，結(jié)果說(shuō)明本法重復(fù)性良好。2.3.7加樣回收率實(shí)驗(yàn)取一樣品粉末，精細(xì)稱取5份，分別參加混合標(biāo)準(zhǔn)溶液1l，按“2.2.3項(xiàng)下方法制備、測(cè)定，測(cè)得槲皮素平均回收率為98.11%，木犀草素平均回收率為96.83%，RSD分別為1.94%和1.86%。2.3.8樣品的測(cè)定各樣品按“2.3.3項(xiàng)下方法，制成供試品

10、溶液，注入高效液相色譜儀進(jìn)展測(cè)定，記錄槲皮素和木犀草素的峰面積，計(jì)算含量。結(jié)果見表2。表2各菊花中槲皮素和木犀草素含量測(cè)定結(jié)果略2.4總黃酮的含量測(cè)定22.4.1對(duì)照品溶液的制備稱取蘆丁適量，用70%乙醇溶解，置50l量瓶中，制成濃度為0.226g/l溶液，備用。2.4.2供試品溶液的制備精細(xì)稱取菊花粉末1g，置錐形瓶中，加70%乙醇30l在60恒溫水浴溫萃30in，冷卻，抽濾，洗滌至100l量瓶中，用70%乙醇定容至刻度，搖勻。精細(xì)汲取3l于10l量瓶中，用30%乙醇定容，分別精細(xì)汲取2l于10l試管中，加5%亞硝酸鈉溶液0.3l，振搖均勻放置6in，再加10%硝酸鋁，震蕩均勻，放置6in，

11、再加4%氫氧化鈉4l，振蕩搖勻，用30%乙醇定容，放置10in后置比色皿中于510n處測(cè)定吸光值。以30%乙醇為空白溶液。2.4.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精細(xì)汲取蘆丁對(duì)照液0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0l，分別置10l量瓶中，參加5%亞硝酸鈉溶液0.3l，振搖均勻放置6in，再加10%硝酸鋁0.3l，振蕩均勻，放置6in，再加4%氫氧化鈉4l，振蕩搖勻，用30%乙醇定容至刻度，振蕩搖勻，放置10in后采用分光光度法，在510n處測(cè)定吸光值，以對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y=1.0796X+0.0328(R=0.9915),說(shuō)明蘆丁在濃度0.2261.13

12、g/l范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。2.4.4樣品的測(cè)定按“2.4.2項(xiàng)的方法制成供試品溶液，依法測(cè)定。結(jié)果見表3。表3各菊花中總黃酮含量測(cè)定結(jié)果表略2.5S2殘留量的測(cè)定32.5.1對(duì)照品溶液的制備稱取0.5g亞硫酸氫鈉，溶于200l四氯汞鈉吸收液中，放置過(guò)夜，上清液用定量濾紙過(guò)濾后用硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)定其濃度，再用四氯汞鈉吸收液稀釋成2g/l做標(biāo)準(zhǔn)液。鹽酸副玫瑰苯胺溶液；稱取0.1g鹽酸副玫瑰苯胺于研缽中，加少量水研磨使溶解并稀釋至100l。取出20l于100l容量瓶中，加濃鹽酸8.0l混勻，待溶液由紅變黃后稀釋至該度備用。2.5.2供試品溶液的制備精細(xì)稱取3g樣品于100l容量瓶中，加20l四氯

13、汞鈉吸收液，放置過(guò)夜，加水稀釋至刻度，過(guò)濾，棄去初濾液，濾液待測(cè)。2.5.3亞硫酸氫鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的標(biāo)定汲取10l亞硫酸氫鈉-四氯汞鈉溶液于250l碘量瓶中，加100l水，準(zhǔn)確參加20l0.05l/L碘溶液，5l冰醋酸，搖勻，置暗處2in后，迅速以0.1l/LNa2S23標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至淡黃色，加0.5l淀粉指示劑呈藍(lán)色，繼續(xù)滴定至無(wú)色。另取100l碘量瓶，準(zhǔn)確參加20l0.05l/L碘溶液，5l冰醋酸，按同一方法做試劑空白試驗(yàn)。2.5.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精細(xì)汲取0.2，0.4，0.8，1.2，1.6lS2標(biāo)準(zhǔn)使用液，分別置于25l具塞比色管中，于標(biāo)準(zhǔn)管中各參加四氯汞鈉吸收液至10，12g/L氨基磺酸

14、銨溶液1，10.4%甲醛溶液1l，鹽酸副玫瑰苯胺溶液1l混勻。放置20in，室溫下用比色皿以零管調(diào)零，于波長(zhǎng)550n處測(cè)吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得回歸方程為：Y=0.0395X-0.01456，R=0.9996，樣品在0.43.2g/l范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。2.5.5樣品的測(cè)定按“2.5.2項(xiàng)的方法制成供試品溶液，依法測(cè)定。結(jié)果見表4。表4不同枯燥方法菊花中S2殘留量結(jié)果略3討論由表1可知，硫熏菊花中綠原酸的含量要高于自然枯燥的菊花，并且隨著硫磺劑量的增多和熏蒸次數(shù)的增多，綠原酸含量也依次增高，這與菊花中存在的多酚氧化酶(PP)有關(guān)。PP是一類廣泛存在于植物體內(nèi)的能催化多酚類氧化成醌類的含銅質(zhì)

15、體金屬酶，多分布于花、葉片、塊莖、根等組織中。綠原酸是由咖啡酸與奎尼酸生成的縮酚酸，由于其分子構(gòu)造中存在鄰苯二酚構(gòu)造，所以在有氧條件下極易被PP氧化成醌類物質(zhì)，產(chǎn)生褐變反響4。硫磺熏蒸產(chǎn)生大量的S2使得菊花中亞硫酸氫鹽的濃度增高，而亞硫酸氫鹽如NaHS3可以降低PP的酶促反響強(qiáng)度，推延反響時(shí)間。并且NaHS3為復(fù)原劑，能將反響體系中的酚氧化產(chǎn)物醌進(jìn)一步復(fù)原為酚，從而抑制了綠原酸被氧化，保證了綠原酸的含量。因此，硫熏菊花中綠原酸的含量要高于自然枯燥的菊花。由表2和表3可知，硫磺熏蒸后，菊花中的槲皮素和木犀草素的含量下降，總黃酮含量也下降，但降低程度與硫磺用量未見明顯規(guī)律。表4中，采用2g硫磺熏干

16、后的藥材中S2殘留量約為自然枯燥菊花中S2量的5倍。自然枯燥的菊花中也存在微量的S2。原因是大氣中存在的S2可以進(jìn)入葉片，這是植物吸收硫營(yíng)養(yǎng)的次要形式。此外，土壤中的硫酸鹽為植物提供了豐富的S42-，進(jìn)入植物體內(nèi)的硫酸根離子在5-腺苷磷酸硫酸復(fù)原酶的作用下5，復(fù)原成S32-。因此，自然枯燥的菊花中S2殘留量為0.1724g/g。由于熏制藥材所用硫磺多為天然品，含有一定量的二硫化二砷，燃燒后，二硫化二砷與空氣中的氧發(fā)生反響，生成三氧化二砷，有損于人體安康,對(duì)肝腎功能不全者危害尤重6，同時(shí)還會(huì)使一些有效成分損失。雖然硫磺熏蒸可以使菊花中的綠原酸免受酶解破壞而起到保護(hù)作用，但考慮到硫熏藥材中殘留的亞硫酸鹽對(duì)人體造成的多種傷害，建議產(chǎn)地加工時(shí)應(yīng)限制使用硫熏枯燥法。【參考文獻(xiàn)】1賈凌云，孫啟時(shí)，黃順旺.八大品種菊花中不同成分的含量比擬J.中草藥，2022,35(10):1180.2郭巧生，汪濤，程俐陶，等.不同栽培類