1、斷血流皂苷A的藥動(dòng)學(xué)研究【摘要】目的研究斷血流皂苷A在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)。方法建立柱切換高效液相色譜法測(cè)定血漿中斷血流皂苷A濃度的方法。色譜條件：預(yù)處理柱(P)：大連裝Krasil18204，5；預(yù)處理流動(dòng)相：甲醇-水；預(yù)處理流動(dòng)相流速：1.0lin-1；分析柱(A)：Lihrspher100RP-18e(2504，5)；分析流動(dòng)相：甲醇-0.01ll-1磷酸鹽緩沖液(磷酸調(diào)pH=3.0)6040；分析流動(dòng)相流速：0.6lin-1；分析柱柱溫：45；檢測(cè)波長：250n。安康大鼠禁食24h后，尾靜脈注射斷血流皂苷A溶液，測(cè)定不同時(shí)間的血藥濃度。用3P87藥動(dòng)學(xué)程序?qū)ρ帩舛纫粫r(shí)間數(shù)據(jù)進(jìn)展擬合。結(jié)果

2、大鼠在尾靜脈注射斷血流皂苷A后，其主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)為：Vt(0.310.05)Lkg-1，L(1.130.32)lin-1，Ke(0.900.18)h-1，t1/2(0.760.11)h，曲線下面積AU(24.984.82)(gh)l-1。結(jié)論斷血流皂苷A在大鼠體內(nèi)呈一室開放模型，進(jìn)入體內(nèi)迅速分布，代謝消除也較快。斷血流皂苷A(linpdisideA)系從斷血流中提取的主要成分,屬于齊墩果烷型三萜皂苷類，含量較高，且化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，斷血流為20世紀(jì)70年代從民間驗(yàn)方挑選，經(jīng)臨床驗(yàn)證后被國家藥典錄入的少數(shù)幾個(gè)單味藥之一，其療效確切，平安性高，被公認(rèn)為中醫(yī)臨床首選口服婦科止血藥。臨床上斷血流制劑被廣泛

3、用于治療各種出血、單純性紫癜、原發(fā)性血小板減少性紫癜等癥1。近年來，有關(guān)斷血流的研究主要集中于有效成分的提娶鑒別、藥理、藥效及臨床應(yīng)用。而斷血流藥動(dòng)學(xué)研究未見報(bào)道。為此，本文參照相關(guān)文獻(xiàn)28，建立了柱切換高效液相色譜法測(cè)定血漿中斷血流皂苷A濃度的方法，對(duì)大鼠靜注斷血流皂苷A后的藥動(dòng)學(xué)進(jìn)展了研究，為其新劑型的研究和臨床合理用藥提供根據(jù)。1儀器、試藥與動(dòng)物Agilent公司1100系列高效液相色譜儀(包括DAD檢測(cè)器)；FV-2A高壓切換閥；高速離心機(jī)(上海安寧科學(xué)儀器司)；BSZ-2型自動(dòng)雙重水蒸餾系統(tǒng)(上海博通)；SartriusBP221S型電子天平(美國Sartrius公司)；TG328B

4、型析天平(萬分之一天平)(上海天平儀器廠)。斷血流皂苷A對(duì)照品中國藥品生物制品檢定所，甲醇為色譜純，水為三重蒸餾水自制，其余試劑為分析純。安康SD雄性大鼠(江西中醫(yī)學(xué)院動(dòng)物中心)，雄性，體質(zhì)量(199.74.3)g，實(shí)驗(yàn)前大鼠禁食12h，可自由飲水。2方法2.1色譜條件預(yù)處理柱(簡稱P)：大連裝Krasil18204，5；預(yù)處理流動(dòng)相(簡稱PP)：甲醇-水；預(yù)處理流動(dòng)相流速：1.0lin-1；分析柱(簡稱A)：Lihrspher100RP-18e(2504，5)；分析流動(dòng)相簡稱AP：甲醇-0.01ll-1磷酸鹽緩沖液(磷酸調(diào)pH=3.0)6040；分析流動(dòng)相流速：0.6lin-1；分析柱柱溫：

5、45；檢測(cè)波長：250n。2.2對(duì)照品溶液的配制精細(xì)稱取枯燥至恒重的斷血流皂苷A對(duì)照品7.5g，置25l量瓶中，用分析流動(dòng)相溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得含斷血流皂苷A為0.3gl-1的對(duì)照品溶液。2.3樣品處理步驟取大鼠血漿樣品1.0l，置2l具塞離心試管中，加0.3lL-1的三氯乙酸0.2l，離心(4000rin-1，10in)，精細(xì)量取上清液置于試管中，氮?dú)獯蹈桑瑲堅(jiān)?5%甲醇溶液轉(zhuǎn)入1l量瓶中，加15%甲醇至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液。2.4柱切換系統(tǒng)及操作本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用自裝定時(shí)裝置，控制切換閥自動(dòng)切換。該裝置可預(yù)置T1(樣品預(yù)處理時(shí)間)和T2(A與P串聯(lián)時(shí)間)。樣品進(jìn)樣的同時(shí)啟動(dòng)

6、該裝置，首先使切換閥處于P與A并聯(lián)的A(預(yù)處理)狀態(tài)，經(jīng)T1(2in)時(shí)間的預(yù)處理后切換閥自動(dòng)切換至P與A串聯(lián)的B狀態(tài)，使保存在P上的樣品組分被AP洗脫至A上，經(jīng)T2(2in)時(shí)間后，即自動(dòng)切回初始A狀態(tài)；待下次進(jìn)樣時(shí)再次啟動(dòng)該裝置重復(fù)操作。2.5專屬性實(shí)驗(yàn)取空白大鼠血漿按樣品處理步驟方法操作，其色譜圖見圖1(A)；空白大鼠血漿加斷血流皂苷A對(duì)照品的色譜圖見圖1(B)；大鼠靜脈注射給藥斷血流皂苷A后的血漿色譜圖見圖1()。由圖1可知，在本色譜條件下，斷血流皂苷A可以檢測(cè)到，并且與血漿中的內(nèi)源性物質(zhì)別離良好。斷血流皂苷A的保存時(shí)間約為7in。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2.6標(biāo)準(zhǔn)曲線取空白大鼠血清1l

7、，參加上述對(duì)照品溶液0.5，0.7，0.9，1.1，1.3，1.5l，置于10l棕色量瓶中，加甲醇至刻度，得到濃度為0.015，0.021，0.027，0.033，0.039，0.045gl-1的系列對(duì)照品溶液。按照“2.3項(xiàng)下樣品處理步驟制備成對(duì)照品溶液，在擬定色譜條件下精細(xì)汲取10l注入液相色譜儀，記錄峰面積。以進(jìn)樣量(X，g)對(duì)峰面積進(jìn)展線性回歸，得方程為：Y=0.3113X-0.0441r=0.9995結(jié)果說明斷血流皂苷A在1545gl-1范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。2.7日內(nèi)和日間精細(xì)度取一定量高、中、低3種濃度斷血流皂苷A對(duì)照品大鼠血漿液，按“2.3項(xiàng)下樣品處理步驟處理，采用斷血流皂

8、苷A血漿柱切換高效液相色譜法測(cè)定，在1天內(nèi)連續(xù)測(cè)定6次，得日內(nèi)精細(xì)度分別為1.22，0.81和0.39(n=6)；連續(xù)3d測(cè)定，測(cè)得各濃度的日間精細(xì)度RSD分別為：1.67、0.74和0.45(n=6)。2.8重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取斷血流皂苷A對(duì)照品大鼠血漿液，按“2.3項(xiàng)下樣品處理步驟處理制備6份對(duì)照品溶液，采用斷血流皂苷A血漿柱切換高效液相色譜法測(cè)定，得RSD為2.1n=6，說明本方法重復(fù)性良好。2.9樣品穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取一定量高、中、低3種濃度斷血流皂苷A對(duì)照品大鼠血漿樣品，分別進(jìn)展樣品處理液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)：進(jìn)樣條件下樣品處理液在5放置0，4，10，20，40h進(jìn)樣分析；樣品冷凍放置穩(wěn)定性試驗(yàn)：20冷凍儲(chǔ)

9、藏，分別放置0，6，20，40d后按“2.3項(xiàng)下樣品處理步驟處理進(jìn)樣分析；室溫放置穩(wěn)定性試驗(yàn)：室溫放置0，1，2，4h后按“2.3項(xiàng)下樣品處理步驟處理進(jìn)樣分析。所用測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確度均在89%112%范圍內(nèi)，RSD均5，斷血流皂苷A在上述條件下均穩(wěn)定性良好。2.10凈化回收率取一定量高、中、低3種濃度斷血流皂苷A對(duì)照品血漿液，按前述色譜條件測(cè)定含量5次，另取一樣進(jìn)樣量斷血流皂苷A對(duì)照品溶液，直接進(jìn)樣測(cè)定。按峰面積計(jì)算，得血漿凈化回收率。結(jié)果見表1。表1凈化回收率略2.11方法回收率于空白大鼠血漿中參加一定量高、中、低3種濃度斷血流皂苷A對(duì)照溶液，按“2.3項(xiàng)下樣品處理步驟處理，按前述色譜條件測(cè)定含

10、量5次，求出回收量濃度即實(shí)測(cè)值與參加量濃度之比，即為斷血流皂苷A血漿空白加樣回收率。結(jié)果見表2。表2方法回收率略2.12藥動(dòng)學(xué)研究方法隨機(jī)取大鼠6只。按10gkg-1尾靜脈注射斷血流皂苷A，給藥后5，10，20，50，90，150，240in時(shí)分別從眼眶取血，肝素抗凝，按“2.3步驟別離血漿，并于-20保存。采用柱切換高效液相色譜法測(cè)定斷血流皂苷A的血藥濃度，大鼠iv給藥后的平均藥物濃度一時(shí)間曲線見圖2。將不同時(shí)連續(xù)血流皂苷A的血藥濃度用3P87軟件處理，說明大鼠在尾靜脈注射斷血流皂苷A后，其血藥濃度隨時(shí)間變化符合一室開放模型，主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)為：Vt(0.310.05)Lkg-1，L(1.13

11、0.32)lin-1，Ke(0.900.18)h-1，t1/2(0.760.11)h,曲線下面積AU(24.984.82)(gh)l-1。3討論本實(shí)驗(yàn)首次建立了生物樣品中斷血流皂苷A的HPL測(cè)定法，斷血流皂苷A與血及各組織中的其他成分完全別離，測(cè)定結(jié)果不易被干擾，方法回收率較高，精細(xì)度良好。本法操作簡便、本錢低廉，適用于斷血流皂苷A的藥動(dòng)學(xué)研究。斷血流皂苷A在大鼠體內(nèi)呈一室開放模型，進(jìn)入體內(nèi)迅速分布，代謝消除也比擬快，其生物半衰期為46in。【參考文獻(xiàn)】1LeeJH，KiJ，KiPharakinetianalysisfrhEininrheuundulatuLJ.JEthnpharal，2022

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