1、華技大學中期進項目名稱：MMP-1 癌放射性肺損傷的分析項目華技大學中期進項目名稱：MMP-1 癌放射性肺損傷的分析項目性 男2010教授性 男2010教授醫 分 否否是過對非小細胞癌 放射性治療后肺損傷情況與MMP-1啟動子單核苷酸多態點，以及 ，學術上 一篇高質量SCI應用于非小細胞肺癌肺部放療后肺損傷的預后分析，通過發現遺傳多態性靶點和標志物為臨床非小細癌的精治以及放療后提供姓 10 級八年樣本搜腫瘤學博技術指腫瘤學博數據分肺癌是人類最常見的 之一，其 率已位居全部 死因的首位1。放射治療是非小細胞肺癌重要的局部治療 ，但放射線在殺滅腫瘤細胞的同時，不可量造成極大影響，甚至可導致患者 。

2、既往對放射性肺損傷的研究主要局限于臨床和放射物理參數方面,但這些參數僅占放射性肺損傷 的三分之一5。同樣的照射方法MMP-1是一類依賴金屬鋅離子的蛋白水解酶，對細胞外基質(ECM)的降解、組織重相關的蛋白水解酶，與許多 的發生密切相關。MMP-1 已經證實在一些炎癥反應以及 化病理過程中高表達，發生機制與反射性肺損傷類似，其表達的量與啟動子的單核苷酸多態性相關，但在非小細胞肺癌患者的體內，MMP-1 (一) 項目背(一) 項目背既往對放射性肺損傷的研究主要局限于臨床和放射物理參數方面,如患者 、吸煙狀3,4。但這些參數僅占放射性肺損傷 的三分之一5。同MMP-1 全稱matrix metall

3、opeptidase 1，基質金屬蛋白酶1，位于第11 號全長8.2kb，mRNA 全長1,973nt，共有10 個外顯子，編碼由469 個氨基的發生密切相關8-10。MMP-1 已經證實在一些炎癥性位點：-1607（rs1799750，519AG (rs1144393)，422AT (rs475007)， 340 AG(rs514921)320TC (rs494379)MMP-1 的表達相關7-9，但在非小細胞肺癌患者的體內，MMP-1 單核苷酸多態性是否會影響反射性肺損傷的易感性還鮮為人知，明確單核苷酸的多態性與放射性肺損傷的靶向位點，對于肺癌 放療的預后的 有很大的臨床意向位點，對于肺癌

4、 放療的預后的 有很大的臨床意義。本研究通過對非小細胞肺癌放療后的 的肺損傷發生率以及 MMP-1 啟動子位點MMP-1MMP-1 啟動子單核苷酸多態性在非小細胞肺癌放射性肺損傷的 分析的價值。(二) 立項依1、(二) 立項依1、研究證實放射性肺損傷的發生不僅與臨床和放射物理參數方面,如患者2MMP-1對細胞外基質(ECM)3、MMP-1 已經證實在一些炎癥反應以及4MMP-1 表達的量與其啟動子的單核苷酸多態性相關，不同人群由于多態性的差異會使(三) 項目目的與創新1、探索MMP-1的表達量在非小細胞肺2MMP-13、 分析比較不同MMP-1 啟動子單核苷酸多態性分子靶點在不同非小細胞肺癌

5、后評(四) 國內1、 目前對放射性肺損傷的研究主要局限于臨床和放射物理參數方面,如患者 、吸煙狀(四) 國內1、 目前對放射性肺損傷的研究主要局限于臨床和放射物理參數方面,如患者 、吸煙狀2MMP-1 已經證實在一些炎癥反應以及 化病理過程中高表達，如：風濕性動脈炎以及肺 化等，發生機制與反射性肺損傷類似。3MMP-1 -1607（rs1799750， 519AG (rs1144393)422AT (rs475007)， 340 AG (rs514921)， 320TC (rs494379)MMP-1 的表達相關4MMP-1 單核苷酸多態性是否會影響反射性肺損傷的易(五) 相關技術的未來發展趨

6、1、 通過發現遺傳背景差異對放射性肺損傷的影響在臨床中對于放療 (六) 市場分1MMP-1 啟動子單核苷酸多態性與放射性肺損傷相關的分子靶點設計的靶點藥物用于預2(七) 研究基礎及條件（包括已具(七) 研究基礎及條件（包括已具備的研究條件和需要其提或須新添置的研究設備等3 (八) 研究內1、探索MMP-1的表達量在非小細胞肺2MMP-13、 分析比較不同MMP-1 啟動子單核苷酸多態性分子靶點在不同非小細胞肺癌2CT2CTX3CommonTerminologyCriteriaforAdverseEvents4.04HapMapHCBdata 數據庫的使用 5theMassArraysystem

7、檢測 型 6PCR 擴增技術7SpectroCHIParray9ELISA10、SPSS統計的使(十) 預期成12MMP-134一篇高質量(十一) 進度(十一) 進度 材料準備與預實驗 臨床實驗20161月-2016 12 月間接受放射性劑量45Gy 的非小細胞肺癌的 ，腫瘤科放療室醫生對所有 放療后 1 個月進行評估，第一年，每三個月進行一次隨訪,以后每六 Common Terminology Criteria for Adverse Events 4.0 評分法進行損傷分級。 分子生物學實驗通過 提取DNAPureLink Genomic DNA Mini Kit MMP-15個位點（rs

8、1799750,rs1144393,rs475007rs514921rs494379，所有的位點在HapMap HCB data 數據庫中差異有統計學意義， 型通過 MassArray system檢 估，DNAPCRSpectroCHIParray來檢測單核苷酸多的肺癌領近組織，固定后包埋切成4mm厚度，對觀察部分脫蠟后進行一級抗體孵化，使用抗 MMP-1 抗體進行靶區免疫組化染色，在 Nikon Eclipse TE2000-S 顯微鏡下觀察染況，并使用Image-Pro Plus 6.0C.ELISA 分析：放療 3-6 個月后同一相對時間選取隊列研究中滿足條進行 MMP-1 蛋白ELI

9、SA定量分析，收集數據后使用SPSS統計進行分析 撰寫(十二)已完(十二)已完成的進度計1、實驗前準備（已完成 材料準備與預實驗 臨床實驗（已完成20161月-20166月間接受放射性劑量45Gy的非小細胞肺癌的 （n=84，腫瘤科放療室醫生對所有 放療后 1 個月進行評估，第一年，每三個月進行一次隨訪,以for Adverse Events 4.0 評分法進行損傷分級。 分子生物學實驗（通過 提取DNAPureLink Genomic DNA Mini Kit MMP-12個位點（rs1799750,rs1144393,rs475007rs514921rs494379，所有的位點在HapMap HCB data 數據庫中差異有統計學意義， 型通過 MassArray system檢 估，DNAPCRSpectroCHIParray來檢測單核苷酸多陽性位點 免疫組化分析（部分完成14 位 的肺癌領近組織，固定后包埋切成 4mm 厚度，對觀察部分脫蠟后進行一級抗體孵化，使用抗 MMP-1 抗體進行靶區免疫組化染色，在 Nikon Eclipse TE2000-S 顯微鏡下觀察染 況