1、第八章 動物實(shí)驗(yàn)的基本操作技術(shù)第一節(jié) 急性動物實(shí)驗(yàn)的基本操作技術(shù)一、備皮在哺乳類動物手術(shù)前應(yīng)先進(jìn)行手術(shù)部位的皮膚準(zhǔn)備。包括去處手術(shù)部位及其周圍被毛；清除皮膚污垢，消毒皮膚。1去除被毛(1) 剪毛法 在急性動物實(shí)驗(yàn)中最常用。其方法：固定動物后，繃緊動物皮膚，用粗剪刀貼緊皮膚，依次剪去所需部位的被毛。剪毛時(shí)需注意：把剪刀貼緊皮膚，切勿用手提起被毛，以免剪破皮膚；剪下的毛集中放在一個(gè)容器內(nèi)，防止被毛到處亂飛；剪完后用一濕布擦凈遺落在手術(shù)野和手術(shù)臺周圍的被毛，以保證手術(shù)野的清潔。(2) 拔毛法 拔毛法在兔耳緣靜脈或大、小白鼠尾靜脈注射或取血時(shí)較為常用。方法：將動物固定后，用拇指、食指將所需部位的被毛拔

2、取。為使血管顯示的更清楚，還可在拔毛處涂上一層水。(3) 脫毛法 脫毛法指用化學(xué)藥品脫去實(shí)驗(yàn)動物被毛，適用于大動物無菌手術(shù)、觀察動物局部皮膚血液循環(huán)。方法：先將欲脫毛部位的被毛剪短，再用棉球蘸脫毛劑，在局部涂一 23 分鐘后，用溫水洗去脫下的被毛，然后用紗布將局部擦干，涂一層油脂即可 。2消毒皮膚 去除被毛后，先用 2%來蘇爾洗刷手術(shù)部位及其周圍皮膚，用消毒紗布擦干，以75%酒精脫脂，涂擦5%的碘酊，再用75%的酒精脫碘。對手術(shù)區(qū)域皮膚的消毒常用于慢性實(shí)驗(yàn)。二、切口與止血備皮后，定好切口的起止點(diǎn)，必要時(shí)可做出標(biāo)記。切口方向要盡可能與組織纖維走向一致。切口大小以既便于手術(shù)操作又不過多的暴露組織器

3、官為宜。切口時(shí)，手術(shù)者以左手拇指和食指繃緊上端皮膚，右手持手術(shù)刀（見圖 5-3直至肌層。剪開肌膜，用止血鉗或手指鈍性分離肌纖維至所需長度。若切口與肌纖維走向不同，則應(yīng)先結(jié)扎肌肉兩端，再從中間橫向剪斷。切口應(yīng)由外向內(nèi)逐次減小，以便于觀察和止血。手術(shù)過程中如有出血需及時(shí)止血。微血管滲血，用溫?zé)猁}水紗布輕壓即可止血。較大血管出血，先用止血鉗將出血點(diǎn)及周圍的少許組織一并夾住，然后用線結(jié)扎。更大血管出血，或血管雖不很大，但出血點(diǎn)較集中，最好用針線縫過局部組織，進(jìn)行貫穿結(jié)扎，以免結(jié)線松脫。實(shí)驗(yàn)中正確掌握手術(shù)結(jié)的打法，是完成好止血和縫合操作的關(guān)鍵，結(jié)扎錯(cuò)誤可導(dǎo)致結(jié)扎線滑落，造成出血或?qū)嶒?yàn)失敗，所以要結(jié)扎正確

4、牢固。常見的手術(shù)結(jié)有三種（圖 8-1即方結(jié)、外科結(jié)和三重結(jié)。方結(jié)：為手術(shù)中常用，適于縫合和結(jié)扎。外科結(jié)：在生理實(shí)驗(yàn)中使用較少。三重結(jié)：是在方結(jié)基礎(chǔ)上再加一個(gè)第一道單結(jié)而成，因其牢固，適應(yīng)于結(jié)扎較大的血管和大塊組織。圖 8-1 常用的手術(shù)結(jié)開顱過程中如果顱骨出血，可用紗布吸去血液后，迅速用骨蠟涂抹止血。如遇硬腦膜出血，可用結(jié)扎或燒灼止血，若是軟腦膜出血，應(yīng)輕輕壓上止血海綿。干紗布只能用于吸血，不可用于揩擦組織，以免損傷組織和血凝塊脫落。手術(shù)完成后，用鹽水紗布覆蓋傷口或手術(shù)野，防止傷口干燥和水分蒸發(fā)。三、肌肉、神經(jīng)與血管的分離分離肌肉時(shí)，應(yīng)用止血鉗在整塊肌肉與其他組織之間，順著肌纖維方向操作，將肌

5、肉一塊塊地分離。絕不能在一塊肌肉的肌纖維間操作，這不僅容易損傷肌纖維而引起出血，并且也很難將肌肉分離。若必須將肌肉切斷，應(yīng)先用兩把止血鉗夾住肌肉（小塊或薄片肌肉也可用兩道絲線結(jié)扎），然后在兩止血鉗間切斷肌肉。神經(jīng)和血管都是比較嬌嫩的組織，因此在剝離過程中要耐心、細(xì)致、動作輕柔。切不可用帶齒的鑷子進(jìn)行剝離，也不能用止血鉗或鑷子夾持，以免其結(jié)構(gòu)或機(jī)能受損。在剝離粗大的神經(jīng)、血管時(shí)，應(yīng)先用蚊式止血鉗將神經(jīng)或血管周圍的結(jié)締組織稍加分離，然后用大小適宜的止血鉗將其從周圍的結(jié)締組織中游離出來。游離段的長短，視需要而定。在剝離細(xì)小的神經(jīng)或血管時(shí)，要特別注意保持局部解剖位置，不要把結(jié)構(gòu)關(guān)系弄亂，同時(shí)需要用眼科

6、鑷子或玻璃分針輕輕地進(jìn)行分離。剝離完畢后，在神經(jīng)和血管的下方穿以浸透生理鹽水的縛線（根據(jù)需要穿一根或兩根），以備刺激時(shí)提起或結(jié)扎之用。然后蓋上一塊浸以生理鹽水的棉絮或紗布，以防組織干燥，或在創(chuàng)口內(nèi)滴加適量溫?zé)幔?7左右）石蠟油，使神經(jīng)浸泡其中。四、插管技術(shù)1氣管插管術(shù) 在哺乳動物急性實(shí)驗(yàn)中，為了保持動物呼吸道的暢通，一般先切開氣管，插入氣管套管，防止分泌物堵塞氣道。(1) 固定動物：把麻醉后的動物仰臥固定在手術(shù)臺上。備皮，在頸部正中喉下部作一長約 4cm (2) 分離組織：用止血鉗依次分開皮下結(jié)締組織及頸前正中肌肉暴露氣管。然后分離氣以免損傷食管及周圍小血管。從甲狀軟骨向下分離氣管 2 3cm

7、 穿一粗線于氣管下備用。(3) 切開氣管：用手術(shù)剪在喉頭下 3、4 軟骨環(huán)之間橫向切開管前壁（切開不得超過氣管直徑的 50%“T”形。(4) 氣管插管：左手提起備用線，右手將一適當(dāng)口徑的“Y”形氣管插管，由切口處向胸腔方向插入氣管腔內(nèi)（圖 8-2圖 8-2 家兔氣管插管2 一般在氣管插管術(shù)后進(jìn)行。用止血鉗夾住氣管左側(cè)肌肉向外牽拉，可在氣管左側(cè)深部看到一條深紅色較粗大的血管，用手觸之有搏動感，此即為頸總動脈。仔細(xì)分離血管鞘膜，防止損傷神經(jīng)，游離出 34cm 長的頸總動脈血管。在此血管下面穿入兩條線備用。待游離出足夠長的頸總動脈后，結(jié)扎其遠(yuǎn)心端，在近心端夾一動脈夾，另一線在動脈夾與遠(yuǎn)端結(jié)扎線之間打

8、一活結(jié)（動脈夾與遠(yuǎn)端結(jié)扎線之間的距離應(yīng)不小于 3cm結(jié)扎線，用眼科剪的尖部呈 30角，在動脈夾遠(yuǎn)端靠近結(jié)扎處的血管前壁上剪一斜形切口。由切口處向心臟方向插入充滿 0.5%肝素的動脈插管，用已成活結(jié)的備用線將其扎緊，并將余線在動脈插管的突起處結(jié)扎固定（見圖 11 - 83股靜脈插管術(shù) 動物麻醉后仰臥固定于手術(shù)臺上，在腹股溝三角區(qū)備皮。沿血管走向做 45cm 皮膚切口，用彎形止血鉗分離肌肉和深部筋膜，暴露出神經(jīng)和股血管。由外向內(nèi)分別為股神經(jīng)、股動脈及股靜脈。用玻璃分針或蚊式鉗仔細(xì)分離出一段股靜脈，在其下面穿過兩根絲線備用。先用靜脈夾夾住股靜脈的近心端血管，待血管內(nèi)血液充盈后在結(jié)扎股靜脈遠(yuǎn)心端。然后

9、提起結(jié)扎線，用眼科剪的尖部與血管前壁呈 角，在緊靠結(jié)扎線近心端處剪一斜口。由切口處向心臟方向插入充滿生理鹽水的靜脈插管，用另一備用線將其扎緊，并將余線結(jié)扎在靜脈插管的突起處以防止滑脫（或?qū)⒔亩私Y(jié)扎線余線與靜脈插管平行拉直后4輸尿管插管術(shù)(1) 動物麻醉后仰臥固定于手術(shù)臺上，在恥骨聯(lián)合以上腹部備皮。(2) 自恥骨聯(lián)合上緣約 0.5cm 處沿正中線向上作 34cm線兩側(cè)的腹壁肌肉，再用手術(shù)剪沿腹白線剪開腹壁及腹膜（注意勿傷及腹腔臟器）。(3) 將膀胱翻出切口外（勿使小腸外露 光滑的小管，此即輸尿管。(4) 在輸尿管靠近膀胱處穿過一條絲線，并打一活結(jié)備用。用鑷柄或食指挑起輸尿管后，再用眼科剪剪一斜

10、口。由切口處向腎臟方向插入充滿生理鹽水的輸尿管插管，并用備用絲線扎緊并固定之，以防滑脫。放置好輸尿管及其插管后可見管內(nèi)有尿夜慢慢流出。(5) 用同樣的方法插入另一側(cè)輸尿管插管。(6) 術(shù)中及術(shù)后注意用溫?zé)猁}水紗布覆蓋手術(shù)切口以保持腹腔內(nèi)的溫度與濕度。術(shù)后也可用皮鉗夾住腹腔切口關(guān)閉腹腔。5膀胱插管(1) 找出輸尿管：操作過程同輸尿管插管術(shù)的(1)(2)、(3)步。(2) 結(jié)扎尿道：在輸尿管下方穿一條絲線，翻轉(zhuǎn)膀胱（注意避開輸尿管）結(jié)扎尿道。(3) 插入膀胱漏斗：在膀胱頂部血管較少處行荷包縫合，然后用眼科剪在荷包縫合圈內(nèi)拉緊縫合線并結(jié)扎固定。術(shù)后用溫鹽水紗布覆蓋腹部切口。除上述幾種插管外，在采集消

11、化液時(shí)還需要進(jìn)行胰導(dǎo)管、膽總管等插管，其操作方法大致與靜脈插管相似，此不贅述。五、動物的急救而使動物出現(xiàn)血壓急劇下降、呼吸不規(guī)則甚至停止、角膜反射消失等臨床死亡癥狀。對此應(yīng)立即進(jìn)行搶救。首先要查明原因，根據(jù)動物情況制定急救措施。1麻醉過量的急救(1) 實(shí)驗(yàn)動物呼吸變慢、不規(guī)則或停止，但仍有心跳時(shí)，可進(jìn)行人工呼吸或給予呼吸中樞興奮劑。人工呼吸：用雙手或單手按一定節(jié)律壓迫動物胸廓進(jìn)行人工呼吸。也可立即切開動物氣管，插入氣管插管，然后連接電動人工呼吸器進(jìn)行人工呼吸。動物自主呼吸一旦恢復(fù)，即可停止人工呼吸。注射呼吸中樞興奮劑：可從靜脈一次注射 1%的山梗菜堿 0.5ml或 25%的尼可剎米 1ml 等

12、。山梗菜堿可刺激頸動脈體化學(xué)感受器，反射性引起呼吸中樞興奮；對呼吸中樞也有輕微的直接興奮作用；同時(shí)亦可升高血壓。尼可剎米則直接興奮呼吸中樞，使呼吸加深加快，但其對血管運(yùn)動中樞的興奮作用較弱。(2) 呼吸、心跳均停止時(shí)，在施用上述方法的同時(shí)，可注射強(qiáng)心劑。用1:10 000 的腎上腺素作靜脈注射，必要時(shí)可直接作心臟內(nèi)注射。腎上腺素具有增強(qiáng)心肌收縮力、提高房室傳導(dǎo)速度、擴(kuò)張冠狀動脈、增強(qiáng)心肌供血、供氧、改善心肌代謝、刺激心臟起搏點(diǎn)等作用。當(dāng)動物注射腎上腺素后，心臟仍跳動無力時(shí)，可從靜脈或心腔內(nèi)注射 1%氯化鈣 。鈣離子可使心肌收縮力增強(qiáng)，升高血壓。2窒息的處理 在動物麻醉后，呼吸道分泌物增多且不易

13、排出，或氣管插管術(shù)中出血形成血凝塊，均可堵塞氣管而造成窒息。此時(shí)，應(yīng)立即拔出氣管插管，清除氣管內(nèi)分泌物及血塊，沖洗氣管插管使其暢通。然后，再將氣管插管重新插入。3大失血、血壓下降的處理(1) 暫停實(shí)驗(yàn)，查明出血部位立即止血（血壓極低或記錄不到血壓時(shí)，還需排除因血凝(2) 快速輸液，增加血容量：可經(jīng)靜脈快速輸入溫生理鹽水使血量增加以恢復(fù)血壓；也可靜脈注入高滲葡萄糖液，通過其對動物血管內(nèi)感受器的刺激，反射性引起血壓和呼吸的改善。(3) 靜脈注射 1:10 000 的腎上腺素。(4) 采取保溫措施，防止動物體溫下降。待血壓恢復(fù)后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。六、實(shí)驗(yàn)動物的處死在急性動物實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，通常需要將動物處死。

14、實(shí)驗(yàn)動物的處死方法有很多，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)動物的種類選擇處死方法。1注射麻醉法 注射麻醉處死法主要用于豚鼠和家兔。一般可用巴比妥類經(jīng)靜脈、心臟和腹腔快速過量注射，麻醉處死動物（動物不同，用量差別較大，一般為正常麻醉用量的3 2空氣栓塞法 空氣栓塞法主要用于大動物的處死。用注射器將空氣快速注入待處死冠狀動脈等阻塞，發(fā)生嚴(yán)重的血液循環(huán)障礙，動物很快死亡。一般處死家兔和貓需注入空氣1020ml；處死狗需注入空氣 70150ml。3急性失血法 該法可用于各種實(shí)驗(yàn)動物的處死。方法：利用實(shí)驗(yàn)中的頸部或股部也可用粗針頭刺入心臟抽取大量血液，使動物失血而死。大鼠或小鼠則可通過摘除眼球使眼眶動、靜脈大量出血而致死。4

15、CO 吸入法 CO 吸入處死適用于各種動物。將動物放入相對封閉的容器內(nèi)，通入22純 CO 氣體，或放入 CO 凝固塊，直到動物停止呼吸致死。225吸入麻醉法 使動物吸入過量的乙醚而死。6頸椎脫臼法 頸椎脫臼法最常用于大、小白鼠的處死。其方法：用左手的拇指和食指用力向下按住鼠頭，右手抓住鼠尾，用力向后拉動，使動物頸椎脫臼，脊髓與腦斷離而迅速死亡。大鼠用此法處死時(shí)需抓住鼠尾根部，加大力量向后上方拉。7擊打法 擊打法主要用于大、小白鼠或家兔的處死。右手抓住鼠尾提起后，用力摔擊其頭部，鼠痙攣后立即死亡。用小木錘猛擊家兔后腦部，損壞延腦，使其猝死。附：慢性動物實(shí)驗(yàn)的基本操作技術(shù)簡介慢性動物實(shí)驗(yàn)的手術(shù)操作

16、技術(shù)與急性動物實(shí)驗(yàn)基本相同。但由于慢性實(shí)驗(yàn)動物在手術(shù)后還需存活較長時(shí)間，所以除要求手術(shù)操作技術(shù)熟練準(zhǔn)確外，還需特別注意做好動物手術(shù)前的準(zhǔn)備和手術(shù)后的護(hù)理工作。1術(shù)前準(zhǔn)備 手術(shù)前應(yīng)給予動物足夠的營養(yǎng)改善全身情況，增強(qiáng)動物對手術(shù)的耐受能力。貓、狗等動物術(shù)前 812 小時(shí)應(yīng)禁食，麻醉前可給予一定量飲水。2無菌操作 為防止感染，促進(jìn)創(chuàng)口愈合，保證動物存活，手術(shù)操作必須在消毒滅菌的情況下進(jìn)行。(1) 手術(shù)環(huán)境的消毒；(2) 手術(shù)器械和物品的消毒；(3) 手術(shù)部位的消毒；(4) 手術(shù)人員手臂的消毒；3切口縫合 慢性動物實(shí)驗(yàn)的手術(shù)切口必須進(jìn)行縫合。(1) 皮膚縫合一般用絲線和三棱針作單純間斷縫合；(2) 筋

17、膜、肌肉等用彎圓針作連續(xù)縫合；(3) 易碎組織用彎圓針作褥線縫合。縫合前，應(yīng)徹底止血，清潔切口。切口縫合要分層進(jìn)行，消除死腔。縫合皮膚之前，需要用 75%酒精或 0.1%新潔爾滅溶液，再涂擦消毒皮膚一次。根據(jù)切口愈合情況，適時(shí)拆除外部創(chuàng)口的縫線，拆線前，亦應(yīng)進(jìn)行縫合處的常規(guī)消毒。4術(shù)后處理(1) 手術(shù)操做完成后，待動物呼吸平穩(wěn)、血壓正常后拔出氣管插管。(2) 待動物完全蘇醒后方可送回動物室。(3) 術(shù)后動物應(yīng)單獨(dú)安置于清潔的動物籠內(nèi)飼養(yǎng)，并注意保溫。(4) 手術(shù)后要防止創(chuàng)口感染；及時(shí)解決切口疼痛、呼吸減弱、嘔吐、排尿困難等術(shù)后常見問題。另外，還要保證術(shù)后動物的進(jìn)食和飲水，以保證動物的正常存活。

18、第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)標(biāo)本的采集方法一、血液采集實(shí)驗(yàn)動物采血方法的選擇，主要取決于實(shí)驗(yàn)要求所需血量以及動物的種類。用血量較少的實(shí)驗(yàn)如血細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白測定、血液涂片等，可刺破組織取毛細(xì)血管的血；當(dāng)用血量較多時(shí)可作靜脈采血；作動脈血?dú)夥治觥H 以及離子濃度分析實(shí)驗(yàn)時(shí)，則還需采取動脈血液。1尾靜脈采血 主要用于需血量很少的大、小白鼠實(shí)驗(yàn)。常用的方法有：(1) 剪尾采血 固定動物并露出鼠尾。將尾部浸于 45左右的溫水中數(shù)分鐘，使尾部血管擴(kuò)張。擦干鼠尾，剪去尾尖約 35mm，讓自剪口流出的血液滴入容器或用吸管吸取。采血結(jié)束后，消毒傷口并壓迫止血。(2) 切割尾靜脈采血 在尾靜脈處作一橫切口，割破尾靜脈，用上

19、述方法收集血液。每只鼠一般可采血 10 余次以上。小鼠每次可取血 0.1ml，大鼠 0.30.5ml。(3) 針刺尾靜脈采血 先用酒精棉球擦拭鼠尾，尾靜脈充血后用干消毒紗布將鼠尾擦干。用 7 號或8 號注射針頭，刺入鼠尾靜脈后立即拔出針頭，采血后作局部壓迫止血。2眼眶后靜脈叢采血 在需要中等量血液的實(shí)驗(yàn)中，為避免實(shí)驗(yàn)動物死亡常用此法。將麻醉鼠取眼向上側(cè)位固定，用左手拇指和食指從背部較緊地握住動物頸部（應(yīng)防止動物窒息）。取血時(shí)，左手拇指和食指輕輕壓迫動物的頸部兩側(cè)，使眶后靜脈叢充血。右手持 1ml注射器（選擇 7 號針頭）或毛細(xì)采血管（內(nèi)徑 0.51.0mm 45夾角，由眼內(nèi)角刺入，再旋轉(zhuǎn) 18

20、0角使斜面對著眼眶后界。進(jìn)針深度小鼠約 23mm，大鼠約 45mm。當(dāng)感到有阻力時(shí)，將針后退約 0.10.5mm，邊退邊抽。取血后，解除左手對頸部的壓迫，拔出采血器，以防止穿刺孔再出血。一般用本法可在短期內(nèi)重復(fù)采血。小白鼠每次可采血 0.20.3ml；大白鼠每次可采血 0.40.6ml。3. 耳緣靜脈采血 耳緣靜脈采血為最常用的取血法之一，多用于家兔中等量取血，并可重復(fù)采取。右手持注射器，用耳緣靜脈注射的方法將針頭逆血流方向刺入耳緣靜脈抽取血液，或用刀片割破耳緣靜脈末端血管取血。一次可采血510ml。取血后，用棉球壓迫止血。4. 心臟采血 心臟采血主要用于家兔、狗等較大動物。兔心臟采血法：將麻醉好的家兔仰臥固定于手術(shù)臺上，剪去心前區(qū)的被毛。右手持注射器，在胸骨左緣第三肋間處將針頭垂直刺入心臟，隨心臟的搏動血液自動進(jìn)入注射器。取血后，迅速拔出針頭，用消毒紗布覆蓋穿刺部位。一次可取血 2025ml。5. 大靜脈采血 經(jīng)動物頸靜脈、股靜脈等血管采血，方法與前肢皮下頭靜脈等處的靜脈注射法基本相同，只是在抽血時(shí)仍保持對靜脈近心端的壓迫，使血管持續(xù)充盈，采血后再松開橡皮帶。此法也用于前肢皮下頭靜脈和后肢小隱靜脈等部位采血。6. 大動脈采血 經(jīng)動物頸動脈、股動脈等血管采血，方法與頸部動脈插管術(shù)相同。只是插管內(nèi)不充肝素