1、微生物學實驗報告學院生物工程學院年級、專業、班10級生工01班姓名呂亞慧成績課程名稱微生物學實驗實驗 名稱枯草芽孢桿菌生長 曲線測定實驗指導教師李蘋教師評語教師簽字：年 月日開課時間室：A區文科樓5102012年11月22日實驗目的:1、了解細菌生長曲線特征，測定細菌繁殖的代代；2、學習液體培養基的配置以及接種方法；3、反復學習無菌操作技術；4、了解不同細菌，不同接種方法在同一培養基上生長速度的不同;5、掌握利用細菌懸液混濁度間接測定細菌生長的方法；6、學習光電比濁法測量細菌數量的方法；7、學習平板涂布技術。實驗原理i 務調整期1 1/對數期 穩定期生長寸 及測:&涮接種到1培養基上, 吒適應

2、r調理繁殖大于死亡 迅速增長呈 等比數列增長繁殖二死亡， 活菌數量最 窖接近K值繁她率小于 死亡率,活 菌數量念劇測數目測重量代謝大量合成 酶和ATF生理特征穩定, 選育菌種時期代謝產物積 累，產生次 瓣代謝產物畸救自溶 釋放代謝產 物微生物的生 長受溫度、 pH-, 氧氣等物響將少量細菌接種到一定體積的、適合的新鮮培養基中，在適宜的條件下進行培養，一定時間測 定培養液中的菌量，以菌量的對數作縱坐標，生長時間作橫坐標，繪制的曲線叫生長曲線。它反映 了單細胞微生物在一定環境條件下于液體培養時所表現出的群體生長規律。依據其生長速率的不 同，一般可把生長曲線分為延緩期、對數生長期、穩定期和衰亡期。這

3、4個時期的長短因菌種的遺 傳性、接種量和培養條件的不同而有所不同。因此通過測定微生物的生長曲線，可了解個菌的生長 規律，對于科研和生產都具有重要的指導意義。測定微生物的數量有多種不同的方法，可根據要求和實驗室條件選用。本實驗用比濁法測定， 由于細菌懸液的濃度與光密度(OD值)成正比，因此可利用分光光度計測定菌懸液的光密度來推 知菌液的濃度，并將所測的OD值與其對應的培養時間作圖，即可繪出該菌在一定條件下的生長曲 線，此法快捷、簡單。實驗器材活材料：枯草芽孢桿菌(E.coli)。培養基和試劑：牛肉膏蛋白胨液體培養基10支(每支試管培養基量相同)器材：1mL無菌移液槍、恒溫培養箱、冰箱、光電比色計

4、、標簽等。實驗方法LB液體培養基的配制：500ml稱取:酵母膏 蛋白胨 氯化鈉混合后加去離子水(或注射用水)水400ml，待加熱充分溶解后加去離子水定容至500ml將其分裝至三個錐形瓶內，在分裝至小試管內，高壓滅菌。接種：取10支裝有牛肉膏蛋白胨培養液的試管，貼上標簽(注明菌名、培養處理、培養時間、 組號)。按無菌操作法用吸管向每管準確加入0.2mL的枯草芽孢桿菌培養液，接種后，輕輕搖蕩， 使菌體混勻。培養：將接種后的培養管置于搖床上，在37C下振蕩培養。其中9支培養管分別于培養的0、 2、4、6、8、16、18、20和24h后取出，放冰箱中貯存，待測定。接種時間安排:管號生長時間(h)生長時

5、間段冷藏時間10_14:002218:00-20:0014:0020:003418:00-22:0014:0022:004614:00-20:0020:005814:00-22:0022:0061622:00-次日 14： 0014:00次日 14:0071820:00-次日 14:0014:00次日 14:0082018:00-次日 14:0014:00次日 14:0092414:00-次日 14:00次日14:0010重復試管5 (8h)14:00-22:0022:004.比濁：將培養不同時間、形成不同細胞濃度的細菌培養液，以蒸僧水作空白對照，選用540 560nm波長進行光電比濁測定。從最稀濃度的菌懸液開始依次進行測定，對濃度大的菌懸液用未 接種的肉膏蛋白胨液體培養基