1、微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告學(xué)院生物工程學(xué)院年級(jí)、專業(yè)、班10級(jí)生工01班姓名呂亞慧成績(jī)課程名稱微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn) 名稱枯草芽孢桿菌生長 曲線測(cè)定實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)教師李蘋教師評(píng)語教師簽字：年 月日開課時(shí)間室：A區(qū)文科樓5102012年11月22日實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1、了解細(xì)菌生長曲線特征，測(cè)定細(xì)菌繁殖的代代；2、學(xué)習(xí)液體培養(yǎng)基的配置以及接種方法；3、反復(fù)學(xué)習(xí)無菌操作技術(shù)；4、了解不同細(xì)菌，不同接種方法在同一培養(yǎng)基上生長速度的不同;5、掌握利用細(xì)菌懸液混濁度間接測(cè)定細(xì)菌生長的方法；6、學(xué)習(xí)光電比濁法測(cè)量細(xì)菌數(shù)量的方法；7、學(xué)習(xí)平板涂布技術(shù)。實(shí)驗(yàn)原理i 務(wù)調(diào)整期1 1/對(duì)數(shù)期 穩(wěn)定期生長寸 及測(cè):&涮接種到1培養(yǎng)基上, 吒適應(yīng)

2、r調(diào)理繁殖大于死亡 迅速增長呈 等比數(shù)列增長繁殖二死亡， 活菌數(shù)量最 窖接近K值繁她率小于 死亡率,活 菌數(shù)量念劇測(cè)數(shù)目測(cè)重量代謝大量合成 酶和ATF生理特征穩(wěn)定, 選育菌種時(shí)期代謝產(chǎn)物積 累，產(chǎn)生次 瓣代謝產(chǎn)物畸救自溶 釋放代謝產(chǎn) 物微生物的生 長受溫度、 pH-, 氧氣等物響將少量細(xì)菌接種到一定體積的、適合的新鮮培養(yǎng)基中，在適宜的條件下進(jìn)行培養(yǎng)，一定時(shí)間測(cè) 定培養(yǎng)液中的菌量，以菌量的對(duì)數(shù)作縱坐標(biāo)，生長時(shí)間作橫坐標(biāo)，繪制的曲線叫生長曲線。它反映 了單細(xì)胞微生物在一定環(huán)境條件下于液體培養(yǎng)時(shí)所表現(xiàn)出的群體生長規(guī)律。依據(jù)其生長速率的不 同，一般可把生長曲線分為延緩期、對(duì)數(shù)生長期、穩(wěn)定期和衰亡期。這

3、4個(gè)時(shí)期的長短因菌種的遺 傳性、接種量和培養(yǎng)條件的不同而有所不同。因此通過測(cè)定微生物的生長曲線，可了解個(gè)菌的生長 規(guī)律，對(duì)于科研和生產(chǎn)都具有重要的指導(dǎo)意義。測(cè)定微生物的數(shù)量有多種不同的方法，可根據(jù)要求和實(shí)驗(yàn)室條件選用。本實(shí)驗(yàn)用比濁法測(cè)定， 由于細(xì)菌懸液的濃度與光密度(OD值)成正比，因此可利用分光光度計(jì)測(cè)定菌懸液的光密度來推 知菌液的濃度，并將所測(cè)的OD值與其對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)時(shí)間作圖，即可繪出該菌在一定條件下的生長曲 線，此法快捷、簡(jiǎn)單。實(shí)驗(yàn)器材活材料：枯草芽孢桿菌(E.coli)。培養(yǎng)基和試劑：牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基10支(每支試管培養(yǎng)基量相同)器材：1mL無菌移液槍、恒溫培養(yǎng)箱、冰箱、光電比色計(jì)

4、、標(biāo)簽等。實(shí)驗(yàn)方法LB液體培養(yǎng)基的配制：500ml稱取:酵母膏 蛋白胨 氯化鈉混合后加去離子水(或注射用水)水400ml，待加熱充分溶解后加去離子水定容至500ml將其分裝至三個(gè)錐形瓶?jī)?nèi)，在分裝至小試管內(nèi)，高壓滅菌。接種：取10支裝有牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)液的試管，貼上標(biāo)簽(注明菌名、培養(yǎng)處理、培養(yǎng)時(shí)間、 組號(hào))。按無菌操作法用吸管向每管準(zhǔn)確加入0.2mL的枯草芽孢桿菌培養(yǎng)液，接種后，輕輕搖蕩， 使菌體混勻。培養(yǎng)：將接種后的培養(yǎng)管置于搖床上，在37C下振蕩培養(yǎng)。其中9支培養(yǎng)管分別于培養(yǎng)的0、 2、4、6、8、16、18、20和24h后取出，放冰箱中貯存，待測(cè)定。接種時(shí)間安排:管號(hào)生長時(shí)間(h)生長時(shí)

5、間段冷藏時(shí)間10_14:002218:00-20:0014:0020:003418:00-22:0014:0022:004614:00-20:0020:005814:00-22:0022:0061622:00-次日 14： 0014:00次日 14:0071820:00-次日 14:0014:00次日 14:0082018:00-次日 14:0014:00次日 14:0092414:00-次日 14:00次日14:0010重復(fù)試管5 (8h)14:00-22:0022:004.比濁：將培養(yǎng)不同時(shí)間、形成不同細(xì)胞濃度的細(xì)菌培養(yǎng)液，以蒸僧水作空白對(duì)照，選用540 560nm波長進(jìn)行光電比濁測(cè)定。從最稀濃度的菌懸液開始依次進(jìn)行測(cè)定，對(duì)濃度大的菌懸液用未 接種的肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基