1、第 PAGE52 頁 共 NUMPAGES52 頁免疫室SOP作業(yè)指導(dǎo)書1主題內(nèi)容 乙型肝炎病毒表面抗原定量測定一、目的：規(guī)范 乙型肝炎病毒表面抗原 測定的標準操作程序，確保 乙型肝炎病毒表面抗原 測定的結(jié)果準確有效。二、適用范圍：在 AutoLumo A2000 化學(xué)發(fā)光檢測儀上定量測定人血清中的 乙型肝炎病毒表面抗原 。三、臨床意義乙型病毒性肝炎是一種重要的公眾危害性疾病，據(jù)估計全球范圍內(nèi)目前大約有 3 億乙肝病毒攜帶者。感染乙型病毒性肝炎可引起廣泛的急、慢性肝臟疾病，流行病學(xué)研究已經(jīng)清楚地表明乙肝病毒與肝細胞癌的發(fā)生有聯(lián)系。HBsAg 是乙肝病毒顆粒（HBV）的外殼成分，為大小不一的多肽

2、。感染乙型肝炎病毒后，機體會產(chǎn)生各種不同模式的抗原、抗體血清學(xué)免疫應(yīng)答反應(yīng)。通過檢測這些標志物，不僅可以診斷感染，而且還可以判斷疾病的進程和預(yù)后。HBsAg 是 HBV 感染后第一個標志物，是提示樣本是否有潛在傳染性的最好的間接指標。四、方法原理本產(chǎn)品采用雙抗體夾心法原理進行檢測。用抗-HBs 抗體包被磁微粒，用辣根過氧化物酶標記的抗-HBs 抗體制備酶結(jié)合物。通過免疫反應(yīng)形成抗體-抗原-抗體-酶復(fù)合物，該復(fù)合物催化發(fā)光底物發(fā)出光子，發(fā)光強度與 HBsAg含量成正比。五、標本的采集與處理5.1.采用正確醫(yī)用技術(shù)收集血清/血漿樣本，推薦對于使用普通管采血的樣本，離心前樣本應(yīng) 37孵育至少 1h；

3、對于使用促凝管采血的樣本，離心前樣本應(yīng) 37孵育至少 0.5h，離心條件 10000g/min，10min；對于使用抗凝管采血的樣本，離心條件 10000g/min，10min?？鼓芡扑]使用肝素作為抗凝劑，避免使用枸櫞酸鈉和 EDTA 抗凝劑。5.2.樣本中的沉淀物和懸浮物可能會影響試驗結(jié)果，應(yīng)離心除去，并確定樣本未變質(zhì)方可使用。25.3. 溶血或脂血的樣本不能用于測定。5.4.樣本收集后在室溫放置不可超過 8 小時；如果不在 8 小時內(nèi)檢測需將樣本放置在 28的冰箱中；若需 48 小時以上保存或運輸，則應(yīng)凍存于-20以下，避免反復(fù)凍融。使用前恢復(fù)到室溫，輕輕搖動混勻。5.5.避免反復(fù)凍融。

4、使用前恢復(fù)到室溫，輕輕搖動混勻。六、標本拒收標準1）嚴重溶血、脂血2）標本標識不明七、儀器與材料7.1.儀器：AutoLumo A2000 化學(xué)發(fā)光檢測儀7.2.試劑：AutoLumo A2000 專用 乙型肝炎病毒表面抗原 試劑7.2.1.試劑準備：本試劑為即用型試劑，可以直接放在儀器上。7.2.2.試劑盒于 28儲存，有效期 12 個月。7.2.3.試劑盒應(yīng)防止冷凍，避免強光照射。7.2.4.試劑盒開啟使用后，28保存可使用 1 個月。7.2.5.試劑盒可適應(yīng) 1 周內(nèi)常溫運輸，運輸過程中應(yīng)輕拿輕放，避免重壓，防止雨雪淋濕和陽光曝曬。7.2.6.1. 試劑包（磁微粒混懸液、酶結(jié)合物）豎直向

5、上存放，在 2 10C 環(huán)境下冷藏保存 2 小時后，才可上機使用。首次使用后，機載或在 2 10C 環(huán)境下穩(wěn)定期為 28 天。7.2.6.2. 校準品開瓶后保存于28C，穩(wěn)定期可維持1個月；若需使用更長時間，應(yīng)根據(jù)需要進行分裝，于-20凍存（可以保存2個月），但應(yīng)避免反復(fù)凍融。八、檢驗方法8.1. 消耗品檢查：8.1.1.根據(jù)儀器說明裝載或檢查消耗品是否充足。8.1.2. 參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說明。38.2. 試劑包裝載：8.2.1. 試劑包首次上機前，輕輕地倒轉(zhuǎn)試劑包多次以混合新試劑包內(nèi)的成份，避免產(chǎn)生氣泡。不要倒轉(zhuǎn)已經(jīng)打開的試劑包。8.2.2. 儀器通過掃描試劑包條碼自動獲取測試所需的參

6、數(shù)。8.2.3. 如果特殊情況下儀器無法識別條碼，可以手工輸入。8.2.4. 參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說明。8.3. 測試：8.3.1. 將樣本容器放置在儀器配套樣本架中，每次測試樣本量為 150l。8.3.2. 裝載樣本架，在儀器軟件界面中輸入樣本信息。8.3.3. 選擇“運行”開始測試，系統(tǒng)自動進行試驗操作。8.3.4. 參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說明。8.4. 定標：8.4.1. 儀器通過掃描條碼卡自動獲取測試所需的參數(shù)。8.4.2. 如果特殊情況下儀器無法識別條碼卡，可以手工輸入。8.4.3. 將校準品轉(zhuǎn)移至樣本容器，放置在儀器配套樣本架中。8.4.4. 裝載樣本架，在儀器軟件界面中輸入定標

7、信息。8.4.5. 選擇“運行”開始測試，生成定標曲線。8.4.6. 定標曲線有效期為 28 天。8.4.7. 參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說明。8.4.8. 出現(xiàn)以下情況需要進行定標曲線的重新生成：8.4.8.1. 質(zhì)控結(jié)果經(jīng)重復(fù)測定后仍然超出范圍；8.4.8.2. 試劑盒或發(fā)光底物液的批號更改；8.4.8.3. 超出定標曲線的有效期限；8.4.8.4. 儀器重要部件更換或維修。8.5. 質(zhì)控：8.5.1. 使用至少兩個分析p 物水平的質(zhì)控品進行質(zhì)控。8.5.2. 出現(xiàn)以下情況需要進行質(zhì)控：8.5.2.1. 測試試劑盒使用超過 24 小時；8.5.2.2. 更換新的試劑盒；48.5.2.3. 重新

8、生成定標曲線；8.5.2.4. 停機。8.5.3. 各實驗室需根據(jù)自身情況建立適合本實驗室的可接受范圍，以確保合適的測試性能。8.5.4. 質(zhì)控值應(yīng)落在規(guī)定的范圍內(nèi)，如出現(xiàn)失控，應(yīng)采取糾正措施。8.6. 稀釋8.6.1. 使用手工稀釋或儀器自動稀釋功能，儀器自動稀釋的最大比例為1:100。8.6.2. 手工稀釋使用系統(tǒng)通用樣品稀釋液進行稀釋，將得到的檢測結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)計算最終結(jié)果。8.6.3. 選擇儀器自動稀釋功能，可以得到準確的檢測結(jié)果，參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說明以及幫助系統(tǒng)。8.6.4. 稀釋后的樣本含量應(yīng)不低于 0.05IU/ml。8.7.結(jié)果計算：選擇適當?shù)那€擬合方式，本試劑盒推薦

9、采用四參數(shù)擬合方式，以校準品濃度值為 x 軸，以校準品發(fā)光強度 log 值為 y 軸建立定標曲線。根據(jù)待測樣本的發(fā)光強度值回算相應(yīng)的濃度值。儀器自動操作系統(tǒng)可通過存儲的定標曲線以及樣本測試得到的發(fā)光值自動計算樣本測試結(jié)果。九、參考范圍檢測 1040 例樣本，用 ROC 曲線方法確定正常參考值為0.05IU/ml；建議各實驗室根據(jù)自己實際條件及接觸人群建立正常參考值。本試劑盒僅作為診斷的輔助手段之一，供臨床醫(yī)生參考。十、檢驗結(jié)果的解釋10.1.用本試劑盒檢測結(jié)果濃度值為 0.040.06IU/ml 的弱反應(yīng)性可疑樣本，建議復(fù)孔重新測定，如果雙孔復(fù)查濃度值均小于 0.05IU/ml，結(jié)果判為陰性，

10、如果單份或雙份測定不低于 0.05IU/ml，結(jié)果判為有反應(yīng)性，有條件的實驗室建議做中和確證實驗，同時動態(tài)觀察。10.2. 本試劑盒測定范圍為 0.05250IU/ml，濃度值大于 250IU/ml 的樣本，其結(jié)果是通過定標曲線外延得出的計算結(jié)果。如果要獲得其更準確的結(jié) 5果，需對樣本進行稀釋后重新測定，推薦稀釋比例為 1/500，使用系統(tǒng)通用樣品稀釋液進行稀釋。稀釋后仍超出線性范圍的建議手工稀釋并增大稀釋比例。10.3. 由于方法學(xué)或免疫特異性等原因，使用不同生產(chǎn)商的試劑對同一份樣本進行檢測可能會得到不同的檢測結(jié)果，因此不同試劑檢測所得結(jié)果不應(yīng)直接相互比較，以免造成錯誤的醫(yī)學(xué)解釋，建議實驗室

11、在檢測報告中注明所用試劑特征。系列監(jiān)測中，如果改變試劑類型，則應(yīng)進行額外的連續(xù)性檢測并與原有試劑結(jié)果進行平行比較以重新確定基線值。十一、檢驗方法的局限性11.1. 本試劑盒僅作為診斷的輔助手段之一，臨床診斷應(yīng)與臨床檢查、病史及其他檢測相結(jié)合。11.2. 樣本中的異嗜性抗體或類風濕因子會干擾檢測結(jié)果。此類樣本不適合用本試劑盒進行檢測。11.3. 溶血、脂血或渾濁的樣本可能會造成不正確的檢測結(jié)果。十二、產(chǎn)品性能特征12.1. 陰性參考品符合率：檢測國家陰性參考品 20 份，不出現(xiàn)假陽性。12.2.陽性參考品符合率：檢測國家陽性參考品 3 份，不出現(xiàn)假陰性。12.3. 最低檢出量：用國家靈敏度參考品

12、進行檢測，符合相應(yīng)參考品要求。12.4. 精密性：10 孔平行檢測濃度值為 0.5IU/ml 樣本，CV%15.0%；10孔平行檢測濃度值為 1.5IU/ml 樣本，CV%10.0%。12.5. 線性：在 0.05IU/ml250IU/ml 范圍內(nèi)，線性相關(guān)系數(shù)（r）不低于0.9900。12.6. 分析p 特異性：與抗-HIV（1+2）、抗-HCV、抗-HAV 等病毒性抗體無交叉反應(yīng)。2.5mg/ml 血紅蛋白、200mg/L 膽紅素、20g/L 甘油三酯和500mg/dl 膽固醇對檢測結(jié)果無顯著干擾。十三、【參考文獻】：p 1.Lok ASE, McMahon BJ. AASLD pract

13、ice guidelines：chronic hepatitis B.Hepatology, 2022, 34: 1225-1241.2.Lavanchy D. Hepatitis B virus epidemiology, disease burden, treatment, and6 current and emerging prevention and control measures. J Viral Hepat, 2022, 11:97-107.合出版社.4.陶義訓(xùn), 1997 年第二版,免疫學(xué)與免疫學(xué)檢驗.人民衛(wèi)生出版社.5.中華醫(yī)學(xué)會傳染病與寄生蟲病學(xué)分會、肝病學(xué)分會. 病毒性肝

14、炎防治方案. 中華傳染病雜志, 2022, 19:56-62.主題內(nèi)容 乙型肝炎病毒表面抗體定量測定一、 目的：規(guī)范 乙型肝炎病毒表面抗體 測定的標準操作程序，確保 乙型肝炎病毒表面抗體 測定的結(jié)果準確有效。二、 適用范圍：在 AutoLumo A2000 化學(xué)發(fā)光檢測儀上定量測定人血清中的 乙型肝炎病毒表面抗體 。三、臨床意義乙型病毒性肝炎是一種重要的公眾危害性疾病，據(jù)估計全球范圍內(nèi)目前大約有 3 億乙肝病毒攜帶者。感染乙型病毒性肝炎可引起廣泛的急、慢性肝臟疾病，流行病學(xué)研究已經(jīng)清楚地表明乙肝病毒與肝細胞癌的發(fā)生有聯(lián)系。表面抗體(Anti-HBs)是一種保護性抗體，是乙肝感染后痊愈或趨向治愈

15、的象征；全程（3 針）疫苗接種結(jié)束后 1 個月檢測保護性表面抗體(Anti-HBs)的濃度，能夠判定免疫效果。關(guān)于表面抗體與保護力的關(guān)系，世界標準未完全統(tǒng)一，目前普遍認為普通人群表面抗體濃度值10mIU/ml，就有足夠的保護作用；高危人群表面抗體濃度值100mIU/ml，具有足夠的保護作用。肝移植、血液透析及免疫抑制等病人定期檢測表面抗體濃度值，每次檢測值100mIU/ml 為宜。四、方法原理7本產(chǎn)品采用雙抗原夾心法原理進行檢測。用表面抗原包被磁微粒，用辣根過氧化物酶標記表面抗原制備酶結(jié)合物。通過免疫反應(yīng)形成抗原-抗體-酶標抗原復(fù)合物，該復(fù)合物催化發(fā)光底物發(fā)出光子，發(fā)光強度與表面抗體的含量成正

16、比。五、標本的采集與處理5.1.采用正確醫(yī)用技術(shù)收集血清/血漿樣本，推薦對于使用普通管采血的樣本，離心前樣本應(yīng) 37孵育至少 1h；對于使用促凝管采血的樣本，離心前樣本應(yīng) 37孵育至少 0.5h，離心條件 10000g/min，10min；對于使用抗凝管采血的樣本，離心條件 10000g/min，10min?？鼓芡扑]使用肝素鈉作為抗凝劑，避免使用枸櫞酸鈉和 EDTA 抗凝劑。5.2.樣本中的沉淀物和懸浮物可能會影響試驗結(jié)果，應(yīng)離心除去，并確定樣本未變質(zhì)方可使用。5.3. 溶血或脂血的樣本不能用于測定。5.4. 樣本收集后在室溫放置不可超過 8 小時；如果不在 8 小時內(nèi)檢測需將樣本放置在 2

17、8的冰箱中；若需 48 小時以上保存或運輸，則應(yīng)凍存于-20以下，避免反復(fù)凍融。使用前恢復(fù)到室溫，輕輕搖動混勻。六、標本拒收標準1）嚴重溶血、脂血2）標本標識不明七、儀器與材料7.1.儀器：適用于 AutoLumo A2000 化學(xué)發(fā)光檢測儀。7.2.試劑：AutoLumo A2000 專用 乙型肝炎病毒表面抗體 試劑7.2.1.試劑準備：本試劑為即用型試劑，可以直接放在儀器上。7.2.2.試劑盒于 28儲存，有效期 12 個月。7.2.3.試劑盒應(yīng)防止冷凍，避免強光照射。7.2.4.試劑盒開啟使用后，28保存可使用 1 個月。7.2.5.試劑盒可適應(yīng) 1 周內(nèi)常溫運輸，運輸過程中應(yīng)輕拿輕放，

18、避免重壓，防止雨雪淋濕和陽光曝曬。7.2.6.1. 試劑包（磁微?；鞈乙?、酶結(jié)合物）豎直向上存放， 8在 2 10C 環(huán)境下冷藏保存 2 小時后，才可上機使用。首次使用后，機載或在 2 10C 環(huán)境下穩(wěn)定期為 28 天。7.2.6.2. 校準品開瓶后保存于28C，穩(wěn)定期可維持1個月；若需使用更長時間，應(yīng)根據(jù)需要進行分裝，于-20凍存（可以保存2個月），但應(yīng)避免反復(fù)凍融。八、檢驗方法8.1. 消耗品檢查：8.1.1. 根據(jù)儀器說明裝載或檢查消耗品是否充足。8.1.2. 參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說明。8.2. 試劑包裝載：8.2.1. 試劑包首次上機前，輕輕地倒轉(zhuǎn)試劑包多次以混合新試劑包內(nèi)的成份，避

19、免產(chǎn)生氣泡。不要倒轉(zhuǎn)已經(jīng)打開的試劑包。8.2.2. 儀器通過掃描試劑包條碼自動獲取測試所需的參數(shù)。8.2.3. 如果特殊情況下儀器無法識別條碼，可以手工輸入。8.2.4. 參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說明。8.3. 測試：8.3.1. 將樣本容器放置在儀器配套樣本架中，每次測試樣本量為 50l。8.3.2. 裝載樣本架，在儀器軟件界面中輸入樣本信息。8.3.3. 選擇“運行”開始測試，系統(tǒng)自動進行試驗操作。8.3.4. 參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說明。8.4. 定標：8.4.1. 儀器通過掃描條碼卡自動獲取測試所需的參數(shù)。8.4.2. 如果特殊情況下儀器無法識別條碼卡，可以手工輸入。8.4.3. 將校準

20、品轉(zhuǎn)移至樣本容器，放置在儀器配套樣本架中。8.4.4. 裝載樣本架，在儀器軟件界面中輸入定標信息。8.4.5. 選擇“運行”開始測試，生成定標曲線。8.4.6. 定標曲線有效期為 28 天。8.4.7.參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說明。98.4.8. 出現(xiàn)以下情況需要進行定標曲線的重新生成：8.4.8.1. 質(zhì)控結(jié)果經(jīng)重復(fù)測定后仍然超出范圍；8.4.8.2. 試劑盒或發(fā)光底物液的批號更改；8.4.8.3. 超出定標曲線的有效期限；8.4.8.4. 儀器重要部件更換或維修。8.5. 質(zhì)控：8.5.1. 使用至少兩個分析p 物水平的質(zhì)控品進行質(zhì)控。8.5.2. 出現(xiàn)以下情況需要進行質(zhì)控：8.5.2.1.

21、 測試試劑盒使用超過 24 小時；8.5.2.2. 更換新的試劑盒；8.5.2.3. 重新生成定標曲線；8.5.2.4.停機。8.5.3. 各實驗室需根據(jù)自身情況建立適合本實驗室的可接受范圍，以確保合適的測試性能。8.5.4. 質(zhì)控值應(yīng)落在規(guī)定的范圍內(nèi)，如出現(xiàn)失控，應(yīng)采取糾正措施。8.6. 稀釋8.6.1. 使用手工稀釋或儀器自動稀釋功能，儀器自動稀釋的最大比例為1:100。8.6.2. 手工稀釋使用系統(tǒng)通用樣品稀釋液進行稀釋，將得到的檢測結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)計算最終結(jié)果。8.6.3. 選擇儀器自動稀釋功能，可以得到準確的檢測結(jié)果，參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說明以及幫助系統(tǒng)。8.6.4. 稀釋后的樣本

22、含量應(yīng)不低于 5mIU /ml。8.7.結(jié)果計算：選擇適當?shù)那€擬合方式，本試劑盒推薦采用四參數(shù)擬合方式，以校準品濃度值為 x 軸，以校準品發(fā)光強度 log 值為 y 軸建立定標曲線。根據(jù)待測樣本的發(fā)光強度值回算相應(yīng)的濃度值。儀器自動操作系統(tǒng)可通過存儲的定標曲線以及樣本測試得到的發(fā)光值自動計算樣本測試結(jié)果。九、參考范圍10正常參考值：10mIU/ml建議各實驗室根據(jù)自己實際條件及接觸人群建立正常參考值。本試劑盒僅作為診斷的輔助手段之一，供臨床醫(yī)生參考。十、檢驗結(jié)果的解釋10.1.用本試劑盒檢測結(jié)果濃度值為 8.012.0 mIU/ml 的弱反應(yīng)性可疑樣本，建議雙份重新測定，如果雙份復(fù)查濃度值均

23、小于 10 mIU/ml，結(jié)果判為陰性，如果單份或雙份測定不低于 10 mIU/ml，結(jié)果判為陽性，同時建議動態(tài)觀察。10.2. 本試劑盒測定范圍為 51000mIU/ml，濃度值大于 1000mIU/ml 的樣本，其結(jié)果是通過定標曲線外延得出的計算結(jié)果。如果要獲得其更準確的結(jié)果，需對樣本進行稀釋后重新測定，推薦稀釋比例為 1/100，使用系統(tǒng)通用樣品稀釋液進行稀釋。稀釋后仍超出線性范圍的建議手工稀釋并增大稀釋比例。10.3. 由于方法學(xué)或免疫特異性等原因，使用不同生產(chǎn)商的試劑對同一份樣本進行檢測可能會得到不同的檢測結(jié)果，因此不同試劑檢測所得結(jié)果不應(yīng)直接相互比較，以免造成錯誤的醫(yī)學(xué)解釋，建議實

24、驗室在檢測報告中注明所用試劑特征。系列監(jiān)測中，如果改變試劑類型，則應(yīng)進行額外的連續(xù)性檢測并與原有試劑結(jié)果進行平行比較以重新確定基線值。十一、檢驗方法的局限性11.1.本試劑盒僅作為診斷的輔助手段之一，臨床診斷應(yīng)與臨床檢查、病史及其他檢測相結(jié)合。11.2. 樣本中的異嗜性抗體或類風濕因子會干擾檢測結(jié)果。此類樣本不適合用本試劑盒進行檢測。11.3.溶血、脂血或渾濁的樣本可能會造成不正確的檢測結(jié)果。十二、產(chǎn)品性能特征12.1.符合率：與 SFDA 批準的試劑平行檢測 1024 份臨床樣本，陰性符合率99.58%，陽性符合率 99.02%，總符合率 99.41%。12.2.最低檢出限：10mIU/ml

25、。1112.3.精密性：10 孔平行檢測濃度值為 10mIU/ml 樣本，CV%15.0%；10 孔平行檢測濃度值為 100mIU/ml 樣本，CV%10.0%。12.4. 線性：在 51000mIU/ml 范圍內(nèi)，線性相關(guān)系數(shù)（r）不低于 0.9900。12.5. 分析p 特異性：與抗-HIV（1+2）、抗-HCV、抗-HAV 等病毒性抗體無交叉反應(yīng)。2.5mg/ml 血紅蛋白、200mg/L 膽紅素、10g/L 甘油三酯和 500mg/dl膽固醇對檢測結(jié)果無顯著干擾。12.6. HOOK 效應(yīng)：測定 HBsAb 濃度值為 30000mIU/ml 的樣本，未出現(xiàn) HOOK效應(yīng)引起的假陰性結(jié)果

26、。十三、【參考文獻】：p 1.Lok ASE, McMahon BJ. AASLD practice guidelines：chronic hepatitis B.Hepatology, 2022, 34: 1225-1241.2.Lavanchy D. Hepatitis B virus epidemiology, disease burden, treatment, andcurrent and emerging prevention and control measures. J Viral Hepat, 2022, 11:97-107.合出版社.4.陶義訓(xùn), 1997 年第二版,免疫學(xué)

27、與免疫學(xué)檢驗.人民衛(wèi)生出版社.5.中華醫(yī)學(xué)會傳染病與寄生蟲病學(xué)分會、肝病學(xué)分會. 病毒性肝炎防治方案.主題內(nèi)容 毒 乙型肝炎病毒 e 抗原 定量測定一、 目的：規(guī)范 乙型肝炎病毒 e 抗原 測定的標準操作程序，確保 乙型肝炎病毒 e 抗原測定的結(jié)果準確有效。二、 適用范圍：在 AutoLumo A2000 化學(xué)發(fā)光檢測儀上定量測定人血清中的 乙型肝炎病毒e 抗原 。三、臨床意義乙型肝炎病毒 e 抗原（HBeAg），一般通稱 e 抗原。它乙型肝炎病毒的核心，是核心抗原的亞成分，或是核心抗原裂解后的產(chǎn)物，是可溶性蛋白 1 。當核心抗原裂解時，可溶性蛋白部分（即 e 抗原）就溶于血清中，存 12在于

28、血液循環(huán)中。有研究表明，在 PegIFN2a 治療過程中，HBeAg 水平對乙肝治療應(yīng)答有較好的預(yù)測價值 2 。許多專家關(guān)注聚乙二醇干擾素治療過程中HBeAg 或 HBsAg 濃度的動態(tài)變化，認為這種量的變化往往是抗原消失或血清轉(zhuǎn)換的前提，具有療效預(yù)測作用。對于乙肝治療過程中 HBeAg 和 HBsAg濃度明顯下降的患者應(yīng)鼓勵繼續(xù)治療，以爭取獲得更好的療效 3 。四、 方法原理本產(chǎn)品采用雙抗體夾心法原理進行檢測。用抗-HBe 制備磁微粒，辣根過氧化物酶標記抗-HBe 制備酶結(jié)合物。通過免疫反應(yīng)形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，該復(fù)合物催化發(fā)光底物液發(fā)出光子，發(fā)光強度與 HBeAg 的含量成正比。

29、五、標本的采集與處理5.1. 采用正確醫(yī)用技術(shù)收集血清/血漿樣本，推薦對于使用普通管采血的樣本，離心前樣本應(yīng) 37孵育至少 1h；對于使用促凝管采血的樣本，離心前樣本應(yīng) 37孵育至少 0.5h，離心條件 10000g/min，10min；對于使用抗凝管采血的樣本，離心條件 10000g/min，10min?？鼓芡扑]使用肝素鈉作為抗凝劑，避免使用枸櫞酸鈉和 EDTA 抗凝劑。5.2. 樣本中的沉淀物和懸浮物可能會影響試驗結(jié)果，應(yīng)離心除去。5.3. 嚴重溶血、脂血或渾濁的樣本不能用于測定。5.4. 樣本收集后在室溫放置不可超過 8 小時；如果不在 8 小時內(nèi)檢測需將樣本放置在 28的冰箱中；若需

30、 48 小時以上保存或運輸，則應(yīng)采用正確離心條件提取血清或血漿凍存于-20以下，避免反復(fù)凍融。使用前恢復(fù)到室溫，輕輕搖動混勻。六、標本拒收標準1）嚴重溶血、脂血2）標本標識不明七、儀器與材料7.1.儀器：適用于 Lucy2、Lumo、AutoLumo A2000 化學(xué)發(fā)光檢測儀。7.2.試劑：AutoLumo A2000 專用 乙型肝炎病毒 e 抗原 試劑7.2.1.試劑準備：本試劑為即用型試劑，可以直接放在儀器上。7.2.2.試劑盒于 28儲存，有效期 12 個月。137.2.3.試劑盒應(yīng)防止冷凍，避免強光照射。7.2.4.試劑盒開啟使用后，28保存可使用 1 個月。7.2.5.試劑盒可適應(yīng)

31、 1 周內(nèi)常溫運輸，運輸過程中應(yīng)輕拿輕放，避免重壓，防止雨雪淋濕和陽光曝曬。7.2.6.1. 試劑包（磁微粒混懸液、酶結(jié)合物）豎直向上存放，在 210C 環(huán)境下冷藏保存 2 小時后，才可上機使用。首次使用后，機載或在 2 10C 環(huán)境下穩(wěn)定期為 28 天。7.2.6.2. 要進行分裝，于-20凍存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。八、檢驗方法8.1. 消耗品檢查：8.1.1. 根據(jù)儀器說明裝載或檢查消耗品是否充足。8.1.2. 參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說明。8.2. 試劑包裝載：8.2.1. 試劑包首次上機前，輕輕地倒轉(zhuǎn)試劑包多次以混合新試劑包內(nèi)的成分，避免產(chǎn)生氣泡。不要倒轉(zhuǎn)已經(jīng)打開的試劑包。8.2.2. 儀

32、器通過掃描試劑包條碼自動獲取測試所需的參數(shù)。8.2.3. 如果特殊情況下儀器無法識別條碼，可以手工輸入。8.2.4. 參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說明。8.3. 測試：8.3.1. 將樣本容器放置在儀器配套樣本架中，每次測試樣本量為 50l。8.3.2.裝載樣本架，在儀器軟件界面中輸入樣本信息。8.3.3. 選擇“運行”開始測試，系統(tǒng)自動進行試驗操作。8.3.4. 參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說明。8.4. 定標：8.4.1.儀器通過掃描條碼卡自動獲取測試所需的參數(shù)。8.4.2. 如果特殊情況下儀器無法識別條碼卡，可以手工輸入。8.4.3. 將校準品轉(zhuǎn)移至樣本容器，放置在儀器配套樣本架中。8.4.4. 裝

33、載樣本架，在儀器軟件界面中輸入定標信息。148.4.5. 選擇“運行”開始測試，生成定標曲線。8.4.6. 定標曲線有效期為 28 天。8.4.7. 參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說明。8.4.8. 出現(xiàn)以下情況需要進行定標曲線的重新生成：8.4.8.1. 質(zhì)控結(jié)果經(jīng)重復(fù)測定后仍然超出范圍；8.4.8.2. 試劑盒或發(fā)光底物液的批號更改；8.4.8.3. 超出定標曲線的有效期限；8.4.8.4. 儀器重要部件更換或維修。8.5. 質(zhì)控：8.5.1. 使用至少兩個分析p 物水平的質(zhì)控品進行質(zhì)控。8.5.2.出現(xiàn)以下情況需要進行質(zhì)控：8.5.2.1. 測試試劑盒使用超過 24 小時；8.5.2.2.更換新

34、的試劑盒；8.5.2.3. 重新生成定標曲線；8.5.2.4. 停機。8.5.3.各實驗室需根據(jù)自身情況建立適合本實驗室的可接受范圍，以確保合適的測試性能。8.5.4. 質(zhì)控值應(yīng)落在規(guī)定的范圍內(nèi)，如出現(xiàn)失控，應(yīng)采取糾正措施。8.6. 稀釋8.6.1. 使用手工稀釋或儀器自動稀釋功能，儀器自動稀釋的最大比例為1:100。8.6.2. 手工稀釋使用系統(tǒng)通用樣品稀釋液進行稀釋，將得到的檢測結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)計算最終結(jié)果。8.6.3. 選擇儀器自動稀釋功能，可以得到準確的檢測結(jié)果，參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說明以及幫助系統(tǒng)。8.7.結(jié)果計算：選擇適當?shù)那€擬合方式，本試劑盒推薦采用四參數(shù)擬合方式，以校準品濃

35、度值為 x 軸，以校準品發(fā)光強度值的 log 值為 y 軸建立定標曲線。根據(jù)待測樣本的發(fā)光強度值回算相應(yīng)的濃度值。儀器自動操作系統(tǒng)可通過 15存儲的定標曲線以及樣本測試得到的信號值自動計算樣本測試結(jié)果。九、參考范圍檢測 500 例乙肝患者樣本和 500 例正常人樣本，用 ROC 曲線方法確定正常參考值為lt;0.1PEI U/ml；建議各實驗室根據(jù)自己實際條件及接觸人群建立正常參考值。本試劑盒僅作為診斷的輔助手段之一，供臨床醫(yī)生參考。十、檢驗結(jié)果的解釋10.1. 用本試劑盒檢測結(jié)果為參考值附近等可疑樣本，建議重新測定，動態(tài)觀察。10.2. 由于方法學(xué)或免疫特異性等原因，使用不同生產(chǎn)商的試劑對同

36、一份樣本進行檢測可能會得到不同的檢測結(jié)果，因此不同試劑檢測所得結(jié)果不應(yīng)直接相互比較，以免造成錯誤的醫(yī)學(xué)解釋，建議實驗室在發(fā)給臨床醫(yī)生的檢測報告中注明所用試劑特征。系列監(jiān)測中，如果改變試劑類型，則應(yīng)進行額外的連續(xù)性檢測并與原有試劑結(jié)果進行平行比較以重新確定基線值。10.3. 根據(jù) WHO 文獻報道 4 ，1PEI U/ ml1.05IU/ml。十一、檢驗方法的局限性11.1. 本產(chǎn)品檢測結(jié)果僅供臨床參考，不應(yīng)作為臨床診治的唯一依據(jù)，對患者的臨床管理應(yīng)結(jié)合其癥狀/體征、病史、其他實驗室檢查、治療反應(yīng)及流行病學(xué)等信息綜合考慮。11.2. 樣本中的異嗜性抗體或類風濕因子會干擾檢測結(jié)果，必須結(jié)合患者病史

37、，臨床檢查和其他臨床資料來綜合評估檢測結(jié)果。11.3. 嚴重溶血、脂血或渾濁的樣本可能會造成不正確的檢測結(jié)果。十二、產(chǎn)品性能特征12.1. 陰性參考品符合率：符合中國食品藥品檢定研究院陰性參考品的要求；12.2. 陽性參考品符合率：符合中國食品藥品檢定研究院陽性參考品的要求；12.3. 最低檢出量：符合中國食品藥品檢定研究院最低檢出量參考品的要求；12.4. 空白限：不大于 0.05PEI U/ml；12.5. 線性：在 0.1200PEI U/ml 范圍內(nèi)，線性相關(guān)系數(shù) r0.9900；12.6. 準確性：測定結(jié)果在規(guī)定范圍內(nèi)；1612.7. 分析p 特異性：與 HIV 抗體、HCV-IgG

38、 抗體、HAV-IgM 抗體無交叉反應(yīng)。12.8. 精密度：變異系數(shù)不高于 15.0%；12.9. 干擾物質(zhì)：40mg/dl 膽紅素、2.5mg/ml 血紅蛋白、500mg/dl 甘油三酯對檢測結(jié)果無顯著影響；12.10. 抗凝劑的影響：使用肝素抗凝的血漿對檢測結(jié)果無顯著影響；12.11. HOOK 效應(yīng)：測定含量為 1600PEI U/ml 的樣本，不會出現(xiàn) HOOK 效應(yīng)；12.12. 方法學(xué)對比：與 SFDA 批準上市的試劑盒對比檢測 1119 份臨床樣本，陰性符合率 100%，陽性符合率 99.23%，總體符合率為 99.73%。十三、【參考文獻】：p 1.Lok ASE, McMah

39、on BJ. AASLD practice guidelines：chronic hepatitis B.Hepatology, 2022, 34: 1225-1241.2.Moucari R, Mackiewicz V, Lada O, et al. Early serum HBsAg drop: a strongpredictor of sustained virological response to pegylated interferon alfa-2a inHBeAg-negative patients.Hepatology,2022,49:1151-1157.3.干擾素治療慢性乙

40、型肝炎專家討論組. 干擾素治療慢性乙型肝炎專家建議J.中華傳染病雜志, 2022, 25(10): 577-583.4.Ante, Reissinger, Peter, et al. Collaborative Study to Establish a WorldHealthOrganization International Standard for Hepatitis B e Antigen (HBeAg)J.Expert Committee on Biological Standardization, 2022, (2228):1-37主題內(nèi)容 毒 乙型肝炎病毒 e 抗體 定量測定17

41、一、 目的：規(guī)范 乙型肝炎病毒 e 抗體 測定的標準操作程序，確保 乙型肝炎病毒 e 抗體測定的結(jié)果準確有效。二、 適用范圍：在 AutoLumo A2000 化學(xué)發(fā)光檢測儀上定量測定人血清中的 乙型肝炎病毒e 抗體 。三、臨床意義乙型肝炎病毒（HBV）屬嗜肝 DNA 病毒科, 具有明顯的種屬及嗜肝特性（盡管其亦可感染肝以外的組織、器官或細胞，如脾、睪丸、人外周血單個核細胞等），可致持續(xù)性病毒感染。HBV 的感染導(dǎo)致血漿中出現(xiàn)特異性的乙肝病毒 e 抗體及其它一系列特異性的血清學(xué)標志物。e 抗體是乙型肝炎病毒e 抗體的簡稱（抗-HBe），它是由 e 抗原刺激人體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生出來的特異性抗體，這種

42、特異的 e 抗體能夠和 e 抗原結(jié)合。四、方法原理本產(chǎn)品采用競爭法原理進行檢測。用 e 抗體和 e 抗原包被磁微粒，用辣根過氧化物酶標記 e 抗體制備酶結(jié)合物。通過免疫反應(yīng)形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，該復(fù)合物催化發(fā)光底物發(fā)出光子，發(fā)光強度與 e 抗體的含量成反比。五、標本的采集與處理5.1. 采用正確醫(yī)用技術(shù)收集血清/血漿樣本，推薦對于使用普通管采血的樣本，離心前樣本應(yīng) 37孵育至少 1h；對于使用促凝管采血的樣本，離心前樣本應(yīng) 37孵育至少 0.5h，離心條件 10000g/min，10min；對于使用抗凝管采血的樣本，離心條件 10000g/min，10min?？鼓芡扑]使用肝素鈉作為

43、抗凝劑，避免使用枸櫞酸鈉和 EDTA 抗凝劑。5.2. 樣本中的沉淀物和懸浮物可能會影響試驗結(jié)果，應(yīng)離心除去，并確定樣本未變質(zhì)方可使用。5.3.溶血或脂血的樣本不能用于測定。5.4.樣本收集后在室溫放置不可超過 8 小時；如果不在 8 小時內(nèi)檢測需將樣本放置在 28的冰箱中；若需 48 小時以上保存或運輸，則應(yīng)凍存于-20以下，避免反復(fù)凍融。使用前恢復(fù)到室溫，輕輕搖動混勻。六、標本拒收標準181）嚴重溶血、脂血2）標本標識不明七、儀器與材料7.1.儀器：適用于 AutoLumo A2000 化學(xué)發(fā)光檢測儀。7.2.試劑：AutoLumo A2000 專用 乙型肝炎病毒 e 抗體 試劑7.2.1

44、.試劑準備：本試劑為即用型試劑，可以直接放在儀器上。7.2.2.試劑盒于 28儲存，有效期 12 個月。7.2.3.試劑盒應(yīng)防止冷凍，避免強光照射。7.2.4.試劑盒開啟使用后，28保存可使用 1 個月。7.2.5.試劑盒可適應(yīng) 1 周內(nèi)常溫運輸，運輸過程中應(yīng)輕拿輕放，避免重壓，防止雨雪淋濕和陽光曝曬。7.2.6.1.試劑包（磁微?；鞈乙?、酶結(jié)合物）豎直向上存放，在 2 10C 環(huán)境下冷藏保存 2 小時后，才可上機使用。首次使用后，機載或在 2 10C 環(huán)境下穩(wěn)定期為 28 天。7.2.6.2. 陰陽性對照開瓶后保存于28C，穩(wěn)定期可維持1個月；若需使用更長時間，應(yīng)根據(jù)需要進行分裝，于-20凍

45、存（可以保存2個月），但應(yīng)避免反復(fù)凍融。7.2.6.3. 試劑在 2 8C 保存可穩(wěn)定至標簽上所標示的有效期。7.3.質(zhì)控液：推薦使用安圖配套質(zhì)控品或第三方質(zhì)控品 BioRAD QC 八、檢驗方法8.1. 消耗品檢查：8.1.1. 根據(jù)儀器說明裝載或檢查消耗品是否充足。8.1.2. 參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說明。8.2. 試劑包裝載：8.2.1. 試劑包首次上機前，輕輕地倒轉(zhuǎn)試劑包多次以混合新試劑包內(nèi)的成份，避免產(chǎn)生氣泡。不要倒轉(zhuǎn)已經(jīng)打開的試劑包。8.2.2. 儀器通過掃描試劑包條碼自動獲取測試所需的參數(shù)。198.2.3.如果特殊情況下儀器無法識別條碼，可以手工輸入。8.2.4. 參考相應(yīng)的儀器

46、系統(tǒng)操作說明。8.3. 測試：8.3.1. 將樣本容器放置在儀器配套樣本架中，每次測試樣本量為 50l。8.3.2. 裝載樣本架，在儀器軟件界面中輸入樣本信息。8.3.3. 選擇“運行”開始測試，系統(tǒng)自動進行試驗操作。8.3.4. 參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說明。8.4. 定 Cutoff 值8.4.1. 儀器通過掃描條碼卡自動獲取測試所需的參數(shù)。8.4.2. 如果特殊情況下儀器無法識別條碼卡，可以手工輸入。8.4.3. 將陰陽性對照轉(zhuǎn)移至樣本容器，放置在儀器配套樣本架中。8.4.4. 裝載樣本架，在儀器軟件界面中輸入 Cutoff 值信息。8.4.5.選擇“運行”開始測試，生成 Cutoff 值

47、。8.4.6. Cutoff 值有效期為 28 天。8.4.7. 參考相應(yīng)的儀器系統(tǒng)操作說明。8.4.8. 出現(xiàn)以下情況需要重新生成 Cutoff 值：8.4.8.1. 質(zhì)控結(jié)果經(jīng)重復(fù)測定后仍然超出范圍；8.4.8.2. 試劑盒或發(fā)光底物液的批號更改；8.4.8.3.超出 Cutoff 值有效期限；8.4.8.4.儀器重要部件更換或維修。8.5. 質(zhì)控：8.5.1. 使用至少兩個分析p 物水平的質(zhì)控品進行質(zhì)控。8.5.2.出現(xiàn)以下情況需要進行質(zhì)控：8.5.2.1. 測試試劑盒使用超過 24 小時；8.5.2.2. 更換新的試劑盒；8.5.2.3. 重新生成 Cutoff 值；8.5.2.4 停

48、機。8.5.3. 各實驗室需根據(jù)自身情況建立適合本實驗室的可接受范圍，以確保合適的測試性能。208.5.4. 質(zhì)控值應(yīng)落在規(guī)定的范圍內(nèi)，如出現(xiàn)失控，應(yīng)采取糾正措施。8.6.結(jié)果計算：有效性判斷：8.6.1.陰性對照孔平均發(fā)光值/陽性對照孔平均發(fā)光值大于 3；8.6.2. 陰性對照各孔相對發(fā)光強度 CV%不超過 10%（如 CV%超過10%，則刪除不平行點直到 CV%小于 10%或重新實驗）。九、參考范圍S/CO=待測樣本發(fā)光值/ Cutoff 值；當 S/COgt;1.00 時，結(jié)果判為陰性；S/CO1.00 時，結(jié)果判為陽性。十、 檢驗結(jié)果的解釋10.1. 用本試劑盒檢測結(jié)果 COI 為 0

49、.801.20 的弱反應(yīng)性可疑樣本，建議復(fù)孔重新測定，如果雙孔復(fù)查 COI 均大于 1.00，結(jié)果判為陰性，如果單孔或復(fù)孔測定不大于 1.00，結(jié)果判為陽性，同時建議動態(tài)觀察。10.2. 由于方法學(xué)或免疫特異性等原因，使用不同生產(chǎn)商的試劑對同一份樣本進行檢測可能會得到不同的檢測結(jié)果，因此不同試劑檢測所得結(jié)果不應(yīng)直接相互比較，以免造成錯誤的醫(yī)學(xué)解釋，建議實驗室在檢測報告中注明所用試劑特征。系列監(jiān)測中，如果改變試劑類型，則應(yīng)進行額外的連續(xù)性檢測并與原有試劑結(jié)果進行平行比較以重新確定基線值。十一、檢驗方法的局限性11.1. 本試劑盒僅作為診斷的輔助手段之一，臨床診斷應(yīng)與臨床檢查、病史及其他檢測相結(jié)合

50、。11.2. 樣本中的異嗜性抗體或類風濕因子會干擾檢測結(jié)果。此類樣本不適合用本試劑盒進行檢測。11.3. 溶血、脂血或渾濁的樣本可能會造成不正確的檢測結(jié)果。十二、產(chǎn)品性能特征12.1.符合率：與 SFDA 批準的試劑平行檢測 1024 份臨床樣本，陰性符合率98.98%，陽性符合率 98.8%，總符合率 98.93%。12.2.最低檢出限：檢定系列國家最低檢出限參考品或經(jīng)國家參考品標化的企 21業(yè)最低檢出限參考品，結(jié)果符合相應(yīng)參考品的要求。12.3.精密性：10 孔平行檢測 0.5 PEI U/ml 樣本，CV%10.0%；10 孔平行檢測 5 PEI U/ml 樣本，CV%20.0%。12.

51、4. 分析p 特異性：與抗-HIV（1+2）、抗-HCV、抗-HAV 等病毒性抗體無交叉反應(yīng)。1.25mg/ml 血紅蛋白、200mg/L 膽紅素、20g/L 甘油三酯和500mg/dl 膽固醇對檢測結(jié)果無干擾。十三、【參考文獻】：p 1.Lok ASE, McMahon BJ. AASLD practice guidelines：chronic hepatitis B.Hepatology, 2022, 34: 1225-1241.2.Lavanchy D. Hepatitis B virus epidemiology, disease burden, treatment, and current and