1、第六章主要組織相容性復合物主要組織相容性復合物，是表達于脊推動物有核細胞表面的一類具有高度多態性、含有多個基因座位，并緊密連鎖的基因群。這些基因表達的蛋白就是主要組織相容性抗原。最初是從小鼠中發現的，年等在用經典遺傳學方法分析腫瘤和其他組織移植引起的排斥現象時發現，機體識別某一移植物是自身的還是非自身的現象是有其遺傳基礎的。讓同一代小鼠自交，可以得到純系，在大約代以后，每一個個體的染色體的等位基因都相同，即純合子。每一自交品系只表達親代群體中的一類等位基因，不同的自交品系表達不同類的等位基因，即不同自交系個體之間是同種異型t發現自身或同一自交系中的個體間進行皮膚移植，不出現排斥現象，稱為自體移

2、植或同系移植。當不同的自交系個體之間進行皮膚移植，即同種異型移植，則出現排斥現象。負責識別某一組織是同源的并予以接受是，外來的則加以排斥的基因被稱為組織相容性抗原基因，表達這些抗原的基因就是組織相容性復合物。等鑒定出小鼠的一個遺傳區域能導致快速排斥，是編碼一種稱為多態性血型抗原II的基因，也被稱作主要組織相容性一基因，簡稱一。后來于年在人的白細胞上發現了與小鼠一具有同樣功能的人類白細胞抗原e。和因而于年獲得諾貝爾獎。研究表明脊椎動物都具有主要組織相容性復合物，但各種動物的名稱都不一樣，表一列出了一些常見動物的名稱。表6-1不同動物種的名稱種MHC名稱小鼠H2(histocompatibilit

3、ysystem!)大鼠RTl(AB)人類HLA(humanleukocyteantigens)兔RLA(rabbitleukocyteantigens)豚鼠GPLA(guineapigleukocyteantigens)家豬SLA(susdometicusleukocyteantigens)猴RhLA(rhesusmacaqueleukocyteantigens)最初是因免疫移植排斥現象而被發現，但是它對免疫應答所起的重要作用是在研究小鼠和豚鼠對合成的多肽抗原免疫應答強度影響時發現的。進一步研究表明，在抗原遞呈和免疫應答調控方面具有極為重要的功能。由于群體中不同個體之間存在高度多態性不同個體對

4、抗原的免疫應答強度和能力也存在一定的差異，因而在對疾病的易感性和抗性也有所不同。被認為是一組重要的免疫應答基因s由于具有高度多態性特點.近年來的研究顯示定型及多態性分析與器官移植配型及移植成功率合關。又是法醫個體識別的性差異.以及免疫應：答效應的的差異。忻本節A世赳罔：H響祀專一、第一類主要組織相容性抗原（一I）分子i類分子的基本結構完整的一類分子含有兩條多肽鏈：一條是a鏈，又稱重鏈，人的一I類分子的a鏈相對分子質量約x小鼠約x0另一條稱p鏈，又稱p微球蛋白pIpu相對分子質量約x是由非基因編碼。一類分子a鏈有一個寡糖基連接位點，而小鼠有個。a鏈有個主要的結構域，即a端、a、a、跨膜區及胞質區

5、（被端），總長約36個7氨基酸殘基左右。其中a1、a2、a3各含約9個氨基酸殘基，跨膜區約個殘基，胞質區約個殘基。在a與跨膜區之間含有木瓜蛋白酶剪切位點。等使用木瓜蛋白酶剪切一I類抗原分子得到細胞外部分的分子結晶，并用于射線衍射晶象分析得到分子構象圖圖一。a、a形成與抗原肽結合的區域，a和a分別形成和約個殘基的二硫鍵連接的環。由于a和p與免疫球蛋白恒定區氨基酸順序同源，所以共同構成樣區圖一。與該區域以非共價鍵（次級鍵）相聯系的P微球蛋白（P）約個氨基酸殘基，對穩定以分子空間構象有重要意義。在胞質區近羧基端含有潛在的磷酸化位點，這與細胞內信號傳遞有關。胞漿內區（約90個殘基）木瓜蛋白醃匚約為個殘

6、基_-.LLLLL_rrrJIJJJ_J1S.S.1（約和個殘基）艙結合區糖基化位點Ig樣區（約100個殘基）穿膜結2類a和a行的p片層。其中構由a區肽成的結合槽表殘基的肽段。肽才能與I類分子結合決定區區最為多樣性而和結合。a圖為T的HC和P類分子結構域示意圈合。抗原表肽內圖硫鍵；叫叱心:代表相應第三三個結互域域；觥代表血橄球脊所識Z別。a和p鏈口yI類分子肽結合槽兩邊的a螺旋則與細胞受體的的樣區與細胞毒細胞或稱殺傷性細胞,的的共受體一結合。這與一類分子參與肽抗原介導的對靶細胞裂解殺傷作用相關圖一。0與aia及a區相互作用，對維持一類分子膜外正常的空間構象具有重要作用。0分子不是由基因編碼的。

7、人的0基因定位于一，小鼠在第號染色體上。0全長約含個氨基酸殘基，含一個鏈內二硫鍵由第和位的兩個半胱氨酸構成。氨基酸序列以上與的恒定區相似，所以也是免疫球蛋白超家族，成員之一。由于0分子較小，血清蛋白電泳位置處于02區，故得名。當腎在重吸收功能下降時（如腎炎、腎移植等腎功能損害時，尿中可檢測到0員在a鏈的跨膜區由約個疏水氨基酸殘基構成而在胞質區近羧基端有許多磷酸化位點如果去掉羧基端的這一部分，則會抑制一類分子的內部化，說明羧端還與一分子胞內流動有關。?m抗原骯TCRMllC-Ig-MHC-1圖6-3MHC-I類分子與拉原駄及I細胞受體形成三元體復合物向化細胞遞呈、抗原信息第二類主要、才一兀APC

8、j抗原遞懇塑胞;TCR：T細胞抗原受體:Tr；-一H細分薜性T細施II類分子是田兩條非共價鍵相聯的多肽鏈構成的：一條鏈長約個氨基酸殘基左右，另一條0鏈長度也在23個0氨基酸殘基左右。兩條鏈結構非常相似圖一。a鏈相對分子質量約為.x.x，0鏈相對分子質量約為x3x0a鏈較p鏈重，主要由于a鏈有兩個連接的糖基化基團，而p鏈僅有一個。每條鏈都分個區，如a鏈由、a、跨膜區和胞質區構成。p鏈則由p1、p2、跨膜區和胞質區構成。a1、a2、P及P區各由約個氨基酸殘基構成，其中p、p、a各含有一個鏈內二硫鍵。一II類分子的a和p區共同構成與抗原肽結合的結構域-，與一類分子的a、a區構成的肽結合區很相似，但I

9、I類分子是由兩條鏈構成圖一。I、氨基酸殘基以上的肽段可以突出到結合槽以外。一i類進行分別由構成a原肽結合。分子結合抗原肽后，其肽表位與細胞受體的結合，而II類分子肽結合槽兩邊的a螺旋則分別與的和結合，形成對細胞的約束。a和p區序列較為保守，與恒定區同源，稱樣區。II類分子的該區域與細胞表面的分子結合。是的共受體.是輔助性細胞特征性表面標記分子。因此一II類分子具有與輔助性細胞結合及抗原信號傳遞的限制性。分子這些不同的特異性識別是發揮免疫功能的分子基礎。，三、肽與分子結合的結構基礎肽與分子是非共價鍵結合，兩者相互作用的解離常數約為-/1是可達到飽和的，結合速度慢解離速度更慢。肽和之間的親和力較抗

10、原與抗體之間的親和力低得多。抗原與抗體相互作用的解離常數為-/L肽與一II類分子達到飽和結合需。一旦結合，二者可保持結合狀態幾小時，甚至幾周時間。一類分子與肽的解離速度很慢，有時甚至需要破壞P與a鏈的聯系才能將肽分開。這種相對穩定的構象進一步保證了與細胞的相互作用。每一個分子在同一時間里只能與一個肽結合，多種不同的肽可以與同樣的分子結合。某一種肽與復合物被細胞識別的功能可因加入另一種結構相似的肽面板抑制。細胞識別肽復合物是高度特異的。不同肽與同一種結合就可以形成不同的表位，可與不同的細胞結合。因而能夠識別這些抗原表位的細胞受體也有多種多樣，每種只識別某種特定的與結合的抗原肽。抗原的種類成千上萬

11、，也決定了體內及其相伴隨的細胞克隆也有成千上萬種。這就構成了在同一個體內，不同細胞之間的基因及其表型的高度多樣性rI分子結合的肽通常為氨基酸，而一II類分子結合的肽為一氨基酸甚至更長，并不影響其抗原遞呈效果。經過對不同類分子結合槽中的肽以酸洗脫，以高效液相層析分離純化，并進行肽序列分析。結果發現它們有一些共同的結構特征，如與I分子結合的肽段內，某個位點和羧基端常有相同或性質相似的殘基圖。這些殘基是肽與某種分子相生作用的“錨定殘基”d分子近氨基端與肽結合的結構域中，序列的差異導致了對抗原肽結合的特異性也有所不同。序列的差異也就是構成分子多態性的分子基礎。分子的多態性不僅影響與肽結合的特異性，也影

12、響肽一復合物與細胞結合的特異性。的主要功能將抗原肽遞呈紀細胞受體，在免疫應答中起關鍵性作用。具體的有關這些信號傳遞及其產生效應時的過程將在第八章章討論。MHC-la囤E0SraffllZIEELljyjc5g國衛衛回應mEcudE圈rammraramEmmra畫ssniEmEEramraMIIC-JESSSQQQrDjQSQSSrasrau:i3ssralirassraLRimraraas根據多個不同子有、在每一個、許體細胞中衛二節電要組織相容性抗抗原基因構及遺傳回衛CHC為DR、MH要基因1座位，同的子:有D、D、DP等主匚幾個內因座代位。I地酸處圧儀鬥XJ陰影框內為口MHC結介的錨定位也圖

13、座位從不同的同時在抗原細合槽中洗下來的肽序列分析結果是復等位亠因共顯性中洗，所以在同，體細胞中、面可存在多種不問的C子。一、的遺傳及多態性單1元型在每一個個體、每一個基因座位上都有兩種可能的基因型和中型，當然可以是相同的，也可以是不同的。由于基因位于同一條染色體上，其多基因座位上的基因型組合相對穩定，很少發生同源染色體間交換，這就構成了以單元型，也稱單倍型為特征的遺傳。同一條染色體上緊密連鎖的一系列等位基因的特殊組合，稱為單元型。例如某一個體兩條染色體的單元型可能是和，這兩個單元型基因存在于同一個體的體細胞中。共同組成該個體的基因型。由于是共顯性發達，所以個體的表型和基因型相同，也為。.連鎖不

14、平衡及單元型遺傳各基因并非完全隨機地組成單元型，某些基因常緊密的連鎖在一起、而另一些則不常連鎖在一起，這就呈現出連鎖不平衡l例如：在漢族人群中的基因頻率為，的基因頻率為，如果、基因座位上的基因隨機組合，則和基因組成的單元型預期頻率應該符合一平衡定律。一單元型理論上頻率應該為x，但是實際觀察值為。這說明一和一基因之間存在著連鎖不平衡，兩個數值相差一二。這個數值被稱為連鎖不平衡參數，用表示。對于一個隨機婚配的群體來說，認識和了解連鎖不平衡參數，具有一定的實際應用價值。在選擇器官移植供體時可對單元型進行推算。如已知基因型則根據單元型連鎖關系可以推測的可能型別。這些緊密連鎖的單元型各基因通常很少發生交

15、換，并成簇地傳遞給下一代，形成了以單元型為特征的遺傳。.基因的多態性是目前發現的最具多態性的緊密連鎖的基因群，存在于所有脊椎動物的基因組。編碼的分子主要分為類，即I類分子，II類分子和III類分子。每一類基因都有許多基因座位。如人的一類基因就有等基因座位。II類基因至少有個基因座位，主要基因座位有、等，每個座位又有許多等位基因，如人類僅、座位就已經發現至少有如如個等位基因。這僅是對人類部分群體的初步調查分析結果。人群中基因雖具有高度多態性，但每個人對每個基因座位上最多取用兩種等位基因。這兩個等位基因可能相同也可能不同。由干基因座位較多，而每一種基因座位又有多種取用的可能性，因此這種多座位及其不

16、同等位基因的組合，可以形成群體中數以百萬計的基因型和表型。不同的個體，我們甚至存幾萬個個體中找不到一對基因型和表型完全相同的人。這種高度多態性的基因群的形成是也長期進化過程中基因突變和環境中多樣性抗原的選擇壓力下形成的。已經發現人的的某些基因型與一些疾病易感性有關，而另一些基因型與某些疾病的抗性有關。例如：-II類的*基因與類風濕關節炎易感性成正相關，該基因攜帶者明顯易患類風濕性關節炎，但是*基因攜帶者卻對該病有抗性。由于分子是抗原遞呈和免疫應答中的重要分子，環境致病因子抗原的高度多樣性及其區域分布的差異性對脊椎動物群體形成了選擇壓力，從而產生高度多態性，因此也形成了對環境的多種適應性。這對群

17、體進化中種的保存具有重要意義。二、小鼠一基因結構小鼠是常用的實驗動物，所有我們應該對小鼠的（即一）結構有一定了解。年，首先把小鼠與組織移植排斥有關的抗原命名為組織相容性抗原，編碼這些抗原的基因稱為組織相容性基因（）,即基因。由于在先前的研究中發現小鼠血型抗原主要有I、II、III、W型，而II型被證實就是組織相容型抗原，其基因就是一。后來通過進一步研究確定一基因與已知的位于第號染色體斷臂上控制鼠尾的-基因連鎖（為有尾，為無尾）。證明一基因定位于號染色體斷臂上,約長，由個主要區域組成，即、I、（圖一）。其中區又可分為兩個亞區（），即和。在每個區或亞區內又有許多基因座位（）u區有一和一兩個基因座位

18、。一亞區有a和0兩個基因座位。一亞區含a和0兩個基因座位。區有個基因座位。從基因類別來說，和為一I類基因，區為II類基因，區為III類基因，主要編碼補體，、因子（f性限制蛋白（）、腫瘤壞死因子（）等。現重組。這種重組交換可以發生在染色體任何位置。可以用不同單元型的鼠之間交配繁殖，以分析其重組交換值。各基因座位之間重組可能產生新的單元型。l-AMMHC-ID7著絲粒大纟這些連鎖I的各等位基因共同構成小鼠I的單元型。單元型位于條染色體上，并給予一個代號，例如：小鼠的單元型是一，鼠的單元型是一（表一）。了解單元型對研究的結構和功能很有幫助。圖6-6小鼠主要紐織相容性復合物（H-2）結構示意圖單元型。

19、單元型位于小鼠的長度約厘0摩。不同基因型可出表6-2實驗中常用的同系小鼠的單元型鼠系名單元型H-2各等位基因kaesiC57BL/6;C57BL/10bbb-b:BALB/C;DBA/2dddd(1.AKR;CBA；C3Hkkkkk:SWRqqqqq1SJLss9-S人的又稱基因，位于第六號染色體短臂上，長約相當于大腸桿菌整個基因組的長度）。在經典遺傳學中，這么長的基因片段相當于c這意味著個體之間的雜交有以上的重組率。基因有幾十個基因座位圖一。按結構功能和組織分布情況不同分為類：.類基因在遠離著絲點約一的范圍內，經典的I類分子基因有、基因座位，每個基因座位又有幾十個以上的等位基因，見表一和圖一

20、。在類區還發現、等基因座位，稱為類樣基因I:它們編碼一分子，這些分子也是可以與P微球蛋白結合的膜蛋白，確切的功能尚在研究之中。II類基因在近著絲點的范圍內，經典II類分子主要有、等基因座位。由于II類分子是由兩條鏈a、0鏈編碼。每條鏈又有多個基因座位，女如編碼分子a鏈，有和、編碼分子0鏈，又有和、這些基因每個座位又可能有許多等位基因表一。一II類分子由a鏈和0鏈組成的異二聚體。a鏈基因有4個外顯子構成，0鏈基因由6個外顯子構成。一II類基因具有高度多態性圖一，這些多態性的產生主要由第二個外顯子編碼的a或0區氨基酸序列差異性所決定的。HLA-1類基因位實圖HLA-11類基因位實應DMADBlDP

21、ADPR7LMP2MBTAPILMP7D0JB2DDRB：DPR11HLA-I類區域HLA-n區域HLA-IB類區域HLA-AHLA-DRC2BdrbiC4ACDRB2C4BEDRB3BfFDRB4GDRR5HDRB6JDRB7DRB8DRB9HM-DQAlDQA2DQB1DQR2DQB3DOBDMADMBDNAHIA-DPA1DPA2DPB1DPB2DMAR表6-3HLA區域中的基因位點212處理和ABCD(tDRpDQ(XSQODPnHrot類HLA-H癸圖e-與類基主哽基因座位的等位基因多態件統汁性抗丿蛋白的功能與和I類基因都高度相關。數立界1人基主遞呈岀的等而皋憫數是胞質非糖基化蛋白，

22、相對分子質量很大，為.X組成的一個形似長筒狀的復合物。每條多肽鏈亞基相對分子質量約為XX0是真核細胞中普遍存在的蛋白酶體。這種蛋白酶體有非溶酶體降解蛋白作用，也稱多催化活性蛋白酶復合物。它是一巨大胞內的蛋白酶，是由一II類區和基因編碼的。基因的開放閱讀框編碼一個長氨基酸殘基的蛋白產物。編碼的蛋白質有個殘基。內源性抗原指胞質內合成的蛋白抗原、經過降解成肽段通常為一肽后，不具有信號肽結構。這種肽段要進入內質網與新合成一類分子結合需要在的幫助下才能完成。一類分子只有與抗原肽結合后才能表達于細胞表面，將抗原肽遞呈給淋巴細胞，誘發特異性免疫應答。有一種基因突變的細胞瘤的細胞株,其表面則不能表達一類分子。

23、而屬于一超基因家族成員、是位于內質網上的膜蛋白。它以和異二聚體形式發揮作用。目前已確認的至少有種基因型，至少有種基因型。因此至少有種表型。的長約2k約個氨基酸殘基,則有長鏈型約個殘基和短鏈型個殘基兩類。不同的表型對同一種抗原肽的親和力可能不一樣，并表現出對不同抗原免疫應答強弱的差異。Hl類基因在第六號染色體近著絲點一范圍內，位于類基因和II類基因之間。該區域內發現有基因座位60多個，部分基因功能已經清楚，但仍有相當部分在研究之中。已發現的基因有補體、見第四章、腫瘤壞死因子基因、淋巴毒素、羥化酶一、基因和熱體克蛋白基因，。就目前研究結果看Hi類區基因在免疫應答和調控中也起著相當重要的作用，值得深

24、入研究。四、的發現及基因的命名年在多次輸過血病人體內檢出含白細胞抗體的血清。他所試的27份這種血清樣本中行20份樣本幾乎能與所有的供血者的白細胞發生凝集反應，另外7份樣本只能與大約60的法國人的白細胞反應，而不能與這7位病人自身的白細胞起凝集反應。他把這份血清中的抗體稱為抗體。當抗原陰性的病人接受抗原輸血后便誘發產生抗抗體。家系調查中表明抗原酌遺傳遵守孟德爾定律。這就是首次發現人的白細胞抗原，后來命名為抗原。年友倡導下，舉行了第一屆國際組織相容性專題討論會，。在年第三屆后，在世界衛生組織（）的支持下，成立了命名委員會。對特異性命名，通常在基因座位后加上數字，數字代表不同等位甚因，女口：2一12

25、等。的定型以往主要有血清學和細胞學方法。有些座位所用的定型方法很局限，且僅在小范圍內異體等位基因抗血清定型發現的，這些仍需要進一步鑒定，則常在座位名后加一個小寫，如：w,等。命名委員會的任務是根據研究的不斷進展，確定新發現的座位和等位基因命名，并修訂和補充原來的命名。19年第十一屆國際專題討論會，第一次引用了分型，女如聚合酶鏈反應t分型技術，序列特異性寡核苷酸探針l雜交分型技術，以及測序分型技術，使分型進入核酸的基因密碼分析水平。較以往的以分析蛋白質和細胞功能的免疫學方法為主的分型技術前進了大步，分型相對更準確可靠。基因型的確定由于序列的分析已經相當精確，每個座位每個型的特TOC o 1-5

26、h z異性通常又有許多等位基因，如一I類等位基因命名*0*、*,這表示“座位名/*型特異性/等位基因序號”一II類基因由于有編碼a鏈和p鏈之分，所以基因命名與類不同，在基因座位名上要注明a鏈或p鏈。有時編碼a鏈或p鏈各有幾個基因座位，則分別以序號綴后，女如:*，*，,*,*等。這些通過都可以檢索到序列和蛋白質序列。III類抗原主要是一些可溶性分子，其分型不同于一1、II類抗原，是由補體遺傳專題討論會，命名的。,第三節的檢測原理及應用的檢測包括表型檢測和基因型檢測。對及其表達產物,的檢測無論是對臨床分析和實際應用，還是免疫遺傳學研究都具有重要價值。2世紀年代前對的檢測是以血清學和細胞學方法為基礎

27、的表型分析為主，這些經典方法檢測準,確性和重復性常令人不太滿意。由于是共顯性基因，基因型通常與表型是一致的假基因例外，所以近十幾年來血清學和細胞學方法有被水平上的基因定型方法取代的趨勢。基因定型方法在準確性和重復性方面都較好。下面以為例介紹分型技術及其應用。一、一類抗原的檢測I類抗原、基因座位上的檢測，國際上常規使用補體依賴的微量淋巴細胞毒試驗，。它是依據型特異性抗體介導的補體系統對靶細胞溶解的原理進行的。試驗必須有抗標準血清抗體）這些標難分型血清中抗體與待檢淋巴細胞上相應的結合，使抗體分子的空間構象改變面暴露補體結合部位，此時加入的補體（通常是兔補體，被活化使淋巴細胞膜上形成孔道面導致細胞死

28、亡。隨后加人細胞染液，如伊紅或臺盼藍，受損或死亡的細胞可被染色，即為細胞毒陽性，說明待檢個體的抗原型類與已知標準血清型一致。如果細胞未受損，活的細胞不被染色，則為陰性，說明型別與標準血清不一致。,這,種方法常遇到的問題是標準血清來源困難及是否標準的問題。這些血清多取自經產婦或接受標準抗原免疫的志愿者血清。二、一II類抗原的檢測II類抗原的、分型方法與類基本相同。不同的是由于II類抗原主要表達于細胞從各種抗原遞呈細胞，如巨噬細胞等。因此在檢測時首先要分離這些細胞，一般都用分離的細胞。但由于類抗原表達于所有的有核細胞，所以細胞表面除有II類抗原外，還有類、抗原。在檢測時所用的標準II類、分型血清，

29、必須先用多個個體血小板混合物吸收除去類抗體。其余操作方法與類相同。對和特異性進行檢測不能用上述法，要用細胞學方法分型。方法的原理基于混合淋巴細胞反應，。同種異體淋巴細胞的一P抗原不同時，將兩種淋巴細胞混合培養，將會刺激對方細胞發生分裂增殖反應，通過檢測淋巴細胞增殖的程度來了解兩者抗原同源性程度。實際操作中常采用單向方法和預致敏淋巴細胞分型法t.單向將已知型別的標準定型細胞通常為純合子分型細胞，g事先以絲裂霉素處理或經強度的射線照射處理，使標準細胞失去增殖能力，但仍保持完整的細胞形態和抗原性。以此處理過的標準細胞與待檢淋巴細胞混合培養一，在終止前一h加一氚標胸腺嘧啶核苷）收集細胞，以液體閃爍計數

30、儀測定同位素摻入情況數。以處理過的標準細胞與其自身細胞做同樣的細胞混合試驗為對照，計算出刺激指數。實驗組對照組當I時為陰性，表明二者一或型相向。同胞兄妹中呈這種陰性反應的為理想的移植供體。如果有一個單元型不一致的同胞兄抹，建議的極限值可達0大于此值則不能用于器官移植供體。個單元型完全不一致的非親緣關系個體之間值可達以上。此外，也有人用相對應答為指標來表示型別差異的情況。.預致敏淋巴細胞分型法單向法操作時間太長，而且標準細胞來源困難，于是發明了分型法。該法原理是將標準細胞與另一不相關個體淋巴細胞作單向法培養，時間延長到一4反應細胞的分裂增殖逐漸停止，而出現形態上靜止的小淋巴記憶細胞，稱之為處理細

31、胞。這種細胞就是預致敏淋巴細胞。這種細胞可以進行凍存備用。當這種細胞再次與第一次培養時相同的抗原細胞共培養時，則迅速出現二次反應。即可表現快速增殖，可以節省大量時間和標準細胞。結果的分析也用一摻入法，但以陽性結果定為與型別相同有人稱之為“陽性分型法”。而單向定型法是以陰性結果表明與型別相同又稱為“陰性定型法”）三、基因定型法年第屆國際專題討論會上提出了的分型方法，這類方法近年來在研究和實際應用方面發展非常快，有取代其他方法的趨勢。.限制性內切酶酶切片段長度多態性檢測法不同的基因型的堿基序列是不同的，這些不同的序列可能被不同的限制性內切酶識別，則形成不同長度的酶切片段。在酶切后電泳并以相應的基因

32、探針雜交，與標準基因型對照，即可得知檢測的結果。以往常采用白細胞基因組直接酶切并雜交分析，但因基因組太大，太復雜，酶切位點或是太多而使片段混雜或是太少不能精確區分，而且必須要與標記的探針雜交分析相結合才能完成這種方法，實際應用時太繁瑣。近年來，由于聚合酶鏈反應技術的應用，使方法有了較大進展。目前發展起來的一分型法是一個簡便快速的分型方法。首先在要分型的基因兩端保守區選擇設計一對或幾對引物，然后以擴增該區段的，得到等長的擴增片段。再選擇適當的限制性內切酶對該片段酶切，得到不同長度的片段，電泳就可直接觀察到不同的條帶類型。從已知序列即可推測該個體的基因型。如果格局與已知的不一致，則可能是一種新的等

33、位基因。同.或一法是方法與等位基因特異性寡核苷酸，探針或順序特異性寡核苷酸，探針雜交法。先以擴增待分析的基因片段，擴增的產物點樣固定于尼龍膜或硝酸纖維膜），然后以同位素或非放射件標記的探針與之雜交，根據陽性斑點判斷個體基因型。出了等位基因非常多，就需要很多的探針對每個樣品要進行多次雜交（甚至十幾次）才能完成定型分析，操作也十分繁瑣。于是在此基礎上發展起來一種反向雜交法h將各種不向的探針固定于同一張膜上，再將產物標記，以產物待檢測基因反過來與探針雜交。這樣做的好處是只要進行一次雜交，即可完成多個等位基因分析，但不同探計的雜交條件的統一非常重要（如溫度，離子強度等）。即產物自接測序法以擴增所要分析

34、的基因片段，然后，直接對進行序列分析，可以直接得到基因型別。近年來由于測序儀的自動化程度不斷提高，大大的方便了的基因分型。四、檢測的應用的分型和檢測對人類免疫遺傳學研究非常重要，對了解人類各民族起源和遷徙及臨床醫學實踐和法醫學個體識別都非常重要。實際應用中主要有以下幾方面：器1官移植配型同種異體器官移植時，供體與受體之間不同，則會產生排斥反應。因而需要在人群中通過配型來選擇供體。同卵雙生的同胞之間型完全相同，移植物可以長期存活。在家庭內選擇供器官者，兩者通常會有一個單元型相同，排斥反應就會較無親緣關系的供體弱。在具有多個供體可供選供的情況下，通過定型分析可以選擇最人程度相配者，即同源性最高者。有關問題我們將在后面討論見第十章）.與疾病易感性的關系早在世紀年代后湖，人們就注意到與某些免疫性疾病相關，如以上的強直性脊椎炎患者帶有一抗原，而正常人攜帶者只有%左右。類風濕性關節炎病人基因攜帶為7,而正常人只有中國人群）世界各國學者大約對多種疾病進行了關聯分析，巳發現有多種疾病上數病因和機理瘓購的某種性常用險病ii.sk其：直直