1、口腔生態系統的影響因素物理化學因素溫度 大多屬于嗜溫微生物氧張力 差別大，造成口腔細菌種類復雜，主要是微需氧菌、兼性厭氧菌、厭氧菌PH值 外源性物質細菌發酵牙菌斑和唾液緩沖系統營養物質的作用 內源性營養唾液及齦溝液中成分外源性營養食物中糖、氨基酸等注：齦上牙菌斑、舌背部、頰上皮生態系內/外源性營養齦下牙菌斑生態系內源性營養宿主因素宿主不可調因素抗體 唾液中主要抗體為SIgA;齦溝液中抗體的主要種類為IgG唾液蛋白質 唾液粘蛋白、溶菌酶、乳鐵蛋白、乳過氧化物酶、富組蛋白年齡激素水平壓力遺傳因素宿主可調因素 飲食習慣口腔衛生 細菌因素細菌的黏附細菌間的作用菌斑的形成牙面上獲得性薄膜的覆蓋 菌斑形成

2、的基礎細菌附著 蛋白質-蛋白質作用機制-1,6糖苷鍵的水溶性葡聚糖作為菌細胞胞外能源貯存庫和引物，誘導合成不溶水葡聚糖以促進變鏈菌的黏附聚集與共聚集 植物凝集素糖作用機制 血鏈菌和黏放菌的特異性聚集 細菌的搭橋作用 內氏放線菌血鏈菌某些菌株齲齒羅氏菌 脂磷壁酸 葡糖基轉移酶-脂磷壁酸-葡萄糖復合體各菌屬、種的繁殖 菌斑成熟 成熟菌斑的標志是柵欄狀結構，約出現在菌斑形成后56天，可見谷穗樣結構 細菌從菌斑脫附著、傳播或定植到其他部位牙菌斑的分類齦上菌斑平滑牙面菌斑 優勢菌為鏈球菌點隙裂溝菌斑 變鏈菌更多；優勢菌群轉向乳桿菌齦下菌斑附著性齦下菌斑 G+球菌或桿菌居多非附著性齦下菌斑 主要細菌為G-

3、厭氧菌及能動菌屬由牙菌斑形成簡述生態連續當獲得性薄膜覆蓋牙面后，漂浮在口腔內的細菌隨即陸續附著其上，最早定植在獲得性薄膜上的是先鋒菌，如血鏈菌；先鋒菌初始定植之后出現快速生長態勢，鏈球菌生長成鏈并開始與牙面垂直，導致牙表面環境的改變，進而允許新的不同種屬的細菌進入發育著的菌斑，如放線菌、韋榮菌；當纖毛菌定植并取代了原先棲息在菌斑深層的鏈球菌，并與牙面垂直排列呈柵欄狀結構，隨時菌斑內氧含量減少，氧化還原電勢降低，而有利于厭氧菌的生長；柵欄結構的出現標志菌斑的成熟，成熟菌斑內無論細菌的數目、組成比例均趨于穩定的極期群落狀態。菌斑的基本結構基底層 無細胞的均質結構，獲得性薄膜構成 中間層 絲狀菌彼此

4、平行且與牙面垂直；中間堆有大亮的球菌和短桿菌表層 G+G-球菌和短桿菌，脫落的上皮，食物殘屑，衰亡的細胞唾液對口腔菌群的影響唾液蛋白質的影響 黏蛋白對細菌的生長有選擇性非免疫性凝集素凝集細菌，影響細菌的黏附非特異性抑制因素溶菌酶降解G+細菌細胞壁的主要結構肽糖乳鐵蛋白結合鐵離子，抑菌乳過氧化物酶與硫氰酸根生成次氰酸鹽，抑制細菌糖酵解所需用酶富組蛋白抗真菌和抑制細菌作用特異性免疫因子免疫球蛋白，如SIgA黏附作用蛋白質-蛋白質作用機制黏性放線菌 菌毛-富脯蛋白、富酪蛋白供給細菌生長所需要的內外源性營養物質調節菌斑PH值碳酸鹽、磷酸鹽牙周病中牙齦膠原的變化膠原含量減少酸溶性膠原下降，鹽溶性膠原無明

5、顯變化機制：膠原破壞增加膠原產生受到抑制膠原類型變化型膠原的含量明顯上升型膠原出現三聚體 正常膠原 1()22()型膠原的含量下降機制：不同膠原對膠原酶的敏感性不同參與膠原破壞的因素膠原酶細菌來源的膠原酶甘氨酸殘基，膠原降解為小片段宿主來源的膠原酶一個作用點，分為1/4和3/4兩個片段揮發性巰基復合物硫化氫；甲基硫醇牙周病時增多，是引起口臭的主要原因；抑制脯氨酸轉運，降低膠原合成增加膠原對酶降解的敏感度細菌內毒素涎腺及唾液的功能分泌功能內分泌功能 腮腺素外分泌功能 下頜下腺60% 腮腺20%25% 舌下腺、小涎腺消化和營養功能協助咀嚼和吞咽直接參與消化作用維持味覺功能 提供營養維持口腔軟硬組織

6、的代謝功能保護功能潤滑作用清除作用維持黏膜的完整修復軟組織維持牙齒礦化調節口腔菌群平衡維持口腔緩沖能力唾液蛋白質的作用保持水分潤滑作用維持味覺形成軟組織薄膜形成硬組織獲得性膜消化作用修復軟組織保護牙體硬組織調節菌斑PH值抑制微生物診斷作用口腔疾病：分泌量成分改變（涎腺疾病）全身性疾病：流率和成分（舍格倫綜合癥、糖尿病、乙型肝炎）藥物檢測測定激素、毒物水平（類固醇類）唾液黏蛋白的分類結構組成分子量疏水結構與HA親和力意義MG11000KD有強結合牙面，參與獲得性膜的形成，覆蓋黏膜MG2250KD無弱細菌黏附聚集，調節菌群齦溝液的生理作用和功能生理作用：通過GCF流沖齦溝內的外來物質；具有抗微生物

7、的非特異性或特異性成分；在牙齦防御機制中，其所含補體系統可促進抗體的活化；含有可以促進上皮附著于牙面的血漿蛋白；能提供齦下細菌豐富的營養成分；提供牙石礦化物質。臨床意義：作為牙周病變判定指數堿性磷酸酶-葡萄糖苷酸酶天門冬氨酸基轉移酶前列腺素 生物礦化的種類與機制機制：在生物體內，鈣磷等無機離子不斷積累達一定飽和度，在多種生物因子的調控下通過化學反應產生難溶性鹽，和有機基質中的生物大分子結合，形成機體的礦化組織形成晶核晶核生長聚集固相轉化種類：生理性礦化病理性礦化再礦化牙釉質和牙本質生物礦化的比較牙釉質的生物礦化牙本質的生物礦化機制牙本質晶體誘導釉質機制的釉質結晶；釉質機制的蛋白成分降解，水和有

8、機質排除成牙本質細胞合成膠原蛋白形成前期牙本質；以此為支架形成礦物晶體沉積步驟成釉細胞分泌釉原蛋白和非釉原蛋白HA晶體形成成釉細胞后退留出間隙釉柱形成釉原蛋白減少成牙本質細胞分泌膠原蛋白合成磷蛋白磷蛋白和膠原蛋白結合或降解磷酸鈣與磷蛋白結合形成HA晶體外顯子、內含子的概念及其與mRNA的關系內含子（intron）：即插入序列，位于基因內部，能被轉錄，但在轉錄后，與之相應的那部分轉錄產物在拼接中被去掉。外顯子（exon）：基因中與成熟的mRNA相對應的DNA片段，包括蛋白質編碼部分、5和3末端不翻譯的前導序列和尾隨序列。中心法則物種的遺傳信息及表型（即物種的多樣化）是由DNA決定的以DNA為模板

9、，“復制”多套mRNA用于蛋白質的合成以mRNA序列為氨基酸裝配藍圖，合成特定蛋白質PCR的應用PCR技術的最大特點是從微量DNA樣本中大量擴增靶DNA片段分離已知基因檢測微量基因遺傳性疾病、腫瘤的診斷遺傳性乳光牙本質致病基因的情況DSPP，即牙本質涎磷蛋白基因，位于人類染色體4q21區域內，由五個外顯子組成，外顯子14編碼牙本質涎蛋白（DSP），外顯子5編碼牙本質涎蛋白的羧基部分和整個牙本質磷蛋白（DPP）；DSPP基因中，多基因位點突變導致DSP、DPP合成障礙，進而導致牙本質發育不全。口腔的非特異性免疫系統組織屏障物理屏障 口腔黏膜化學屏障 唾液、齦溝液無機鹽（硫氰酸鹽、硝酸鹽、亞硝酸鹽

10、）有機物（如糖蛋白、乳鐵蛋白）天然抗體（IgM）生物屏障作用 口腔固有菌叢固有免疫細胞 細胞：粒細胞、肥大細胞、單核-巨噬細胞、朗格漢斯細胞、自然殺傷細胞固有免疫分子SIgA的功能黏膜免疫保護性被膜（與黏蛋白結合）減少微生物的黏附（抗原決定簇）增強溶菌酶和乳鐵蛋白的殺菌作用抗原調節和免疫排斥調節黏膜抗原的攝取免疫排斥調節IgE的產生口腔耐受IgA介導的抗原分泌口腔黏膜防御的功能黏膜的完整性 物理屏障復雜的免疫防御機制 防御素、細胞因子黏膜上皮細胞的生理脫落 更新周期1014天相對不游走的常住免疫活性細胞 肥大細胞、朗格漢斯細胞、樹突狀細胞、淋巴細胞固有菌叢 生物屏障口腔免疫應答特點口腔是一個有

11、菌的環境 固有菌叢的機會致病性口腔健康與口腔黏膜的完整性密切相關 物理屏障口腔分泌液的局部免疫功能 沖洗、稀釋、殺菌病變主要以局部為主，但亦可有全身表現或為全身疾病的局部表現既使病變局限的保護性反應，又造成根尖周和牙周組織損傷口腔特異性抗原物質的分類自然抗原 微生物 自身抗原 腫瘤抗原 同種異體抗原 異種抗原人工抗原甲醛甲酚、樟腦酚等刺激性較強的口腔藥物齲病與免疫的關系非特異性免疫因子有機成分 黏蛋白、溶菌酶、乳過氧化氫酶、乳鐵蛋白、富組蛋白無機成分 碳酸鹽、磷酸鹽、氟離子緩沖作用（中和牙面上細菌代謝產生的酸性物質）清除細菌及其代謝產物減少牙面的理化反應性特異性免疫因子SIgA水平低，患齲易感

12、性和患齲率增加患齲時SIgA濃度增加，齲病活動期增加顯著齲病發生時，血清抗變鏈菌IgG和IgM升高治療后血清IgG和IgM降低，SIgA濃度上升免疫防齲的概念和分類定義：運用人工接種的方法，使機體產生或獲得特異性免疫能力，達到防齲的目的。分類：人工自動免疫產生免疫時間長；交叉免疫亞單位疫苗多肽疫苗抗特異型抗體疫苗基因工程重組疫苗核酸疫苗人工被動免疫短時間內可獲得大量抗體；免疫不持久；免疫排斥異種免疫單克隆抗體雞卵黃抗體（IgY）轉基因植物抗體簡述T細胞在口腔疾病中的作用消除抗原成分，預防診治口腔疾病，切斷隔離局部感染，避免引起全身感染和威脅生命免疫應答是病變局限，但同時造成局部組織的損傷，破壞

13、了正常的結構（如牙周膠原的喪失，牙槽骨吸收，結締組織重塑）致敏T細胞介導參與超敏反應，致組織損傷，生理功能紊亂T-cell組成比例失調，功能紊亂導致自身抗體的產生，引起自身免疫性疾病T-cell可發揮抗腫瘤免疫效應T-cell過度損傷導致免疫缺陷性疾病骨源性細胞的分類及來源成骨細胞 間充質細胞骨襯里細胞 間充質細胞骨細胞 間充質細胞破骨細胞 造血系統的單核細胞成骨細胞分化基質成分的名稱膠原蛋白：型膠原非膠原蛋白：骨鈣素、骨涎蛋白、骨橋蛋白、蛋白多糖、激素和生長因子受體破骨細胞的鑒定抗酒石酸磷酸酶染色陽性細胞表面降鈣素受體陽性可在骨表面形成骨吸收陷窩成骨細胞在骨改建中的作用（成骨細胞和破骨細胞間

14、的關系）參與破骨細胞在骨表面的附著和調節促進骨吸收因子的受體在成骨細胞表面表達，成骨細胞收到骨代謝調節因子作用后：胞體變圓，從礦化的骨表面移開分泌蛋白酶，消化骨表面類骨質合成的骨涎蛋白和骨橋蛋白含有Ary-Gly-Asp氨基酸序列，與破骨細胞中玻連蛋白受體結合，提供附著位點合成破骨細胞骨吸收刺激因子前列腺素血小板衍生的生長因子參與破骨細胞分化成熟的調節TGF-在骨形成和骨吸收過程中的作用骨沉積及骨吸收偶聯過程的關鍵細胞激肽之一，涉及到牙周組織的迅速改建促進基質蛋白（膠原、纖維黏連素）蛋白酶抑制劑的生成減少基質金屬蛋白酶的合成導致成骨細胞的分化和增殖抑制破骨細胞的形成和骨吸收力在骨改建中的作用機

15、械力引起牙周組織及細胞生物學行為的改變應變量過大或過小均會導致骨代謝處于負增長機械力引起細胞骨架的改變機械力引起骨組織中基因表達的改變原代培養細胞的特點可見細胞分裂，但不旺盛與體內原組織在形態結構和功能活動上相似細胞群是異質的細胞相互依存性強，獨立生存性弱多呈二倍體核型培養細胞的體外生長環境無污染環境保持細胞生存環境無任何污染、代謝物及時清除等是維持細胞生存的基本條件。基質貼壁依賴性玻璃基質；塑料；飼養細胞（滋養細胞）；生物性基質處理培養表面；金屬氣體環境和氫離子濃度O2正常培養液僅為培養瓶容量的1/10CO2 PH7.27.4液相環境平衡鹽溶液；天然培養基；合成培養基溫度維持36.50.5

16、滲透壓290310mOsm/kg細胞培養的無菌操作培養前準備所用器具和培養用液進行嚴格的消毒滅菌所用器具和培養用液悉數放置入操作場所，避免往返拿取培養室的消毒每日以0.2%的苯扎溴銨拖洗地板一次，紫外燈照射30分鐘超凈工作臺使用前后以7.5%的酒精擦洗，紫外燈照射30分鐘污物缸、試管架等酒精擦洗后，紫外燈照射消毒洗手和著裝操作前75%的酒精消毒手與前臂無菌服、口罩、帽子每次實驗后進行清洗消毒培養過程的無菌操作酒精燈、酒精棉球的準備所有操作如開啟封閉瓶口、安裝吸管帽、移液器頭都應放在火焰就近的地方輕輕灼燒已使用與未使用的物品需分開放置不同液體吸取需要用不同的吸管不要過早地打開消毒物的包裝用過的吸管應將管口朝下取材的基本注意事項：取材部位要準確無菌操作，避免污染盡快培養減少對細胞的損傷（銳器剪切分離；避免撕扯）避免組織干燥（剪切時浸泡于培養液中）對組織來源進行鑒別（制備組織雪域電鏡標本，對供體情況進行記錄）傳代培養的過程懸浮細胞：可采用加入等量新鮮培養基后直接吹打分散進行傳代，或用離心法后加入新培養基后再吹打分散進行傳代貼壁細胞：倒去瓶中的舊培養液除去懸浮在細胞表面的碎片胰蛋白酶消化使細胞脫壁加入胰蛋白酶抑制物，防止過度消化加入血清的培養液，反復吹打制成懸液。分裝，補充新鮮培養基標記，37 CO2培養箱培養。 觀察細胞凍存和復蘇的基本原則慢凍快融細胞凍存液的使用二甲亞砜或甘油組織工程