1、 CNAS-GL037 臨床化學定量檢驗程序性能驗證指南Guidance on the Verification of QuantitativeMeasurement Procedures used in the ClinicalChemistry2019 年 02 月 15 日發布2019 年 02 月 15 日實施 CNAS-GL037:2019第 1 頁 共 11 頁前言本文件由中國合格評定國家認可委員會（CNAS）制定，是對CNAS-CL02醫學實驗室質量和能力認可準則和 CNAS-CL02-A003醫學實驗室質量和能力認可準則在臨床化學檢驗領域的應用說明中有關臨床化學定量檢驗程序進行

2、性能驗證實驗所做的具體解釋和指導，供醫學實驗室和評審員參考使用。本文件為首次發布。2019 年 02 月 15 日發布2019 年 02 月 15 日實施 CNAS-GL037:2019第 2 頁 共 11 頁臨床化學定量檢驗程序性能驗證指南1范圍本指南適用于申請認可或已獲認可的醫學實驗室對臨床化學檢驗程序進行性能驗證，也可供評審員在現場評審過程中參考使用。本指南主要適用于醫學實驗室使用的臨床化學定量檢驗方法，其他專業領域使用的定量檢驗程序/方法可參考使用。臨床化學定量檢驗程序，也稱臨床化學定量檢驗方法，在本指南中統一稱為臨床化學定量檢驗程序（以下簡稱“檢驗程序”）。本指南適用于實驗室采用的經

3、確認的檢驗程序。2規范性引用文件下列文件對于本指南的應用是必不可少的。凡是注明日期的引用文件，僅該版本適用于本指南。凡是未注明日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改部分）適用于本指南。GB/T 26124-2011臨床化學體外診斷試劑（盒）WS/T 408-2012臨床化學設備線性評價指南WS/T 416-2013干擾實驗指南WS/T 420-2013臨床實驗室對商品定量試劑盒分析性能的驗證WS/T 492-2016臨床檢驗定量測定項目精密度與正確度性能驗證3術語和定義對于本指南，GB/T 29791.1-2013（ISO 18113-1：2009，IDT）中的定義適用。下列術語和定義適用

4、于本指南。3.1可報告范圍 reportable range體外診斷醫療器械性能特征已被驗證的測量區間。GB/T29791.1-2013/ISO18113-1：2009 3.46注14總則2019 年 02 月 15 日發布2019 年 02 月 15 日實施 CNAS-GL037:2019第 3 頁 共 11 頁4.1性能驗證的時機4.1.1檢驗程序常規應用前。4.1.2任何嚴重影響檢驗程序分析性能的情況發生后，應在檢驗程序重新啟用前對受影響的性能進行驗證。影響檢驗程序分析性能的情況包括但不限于：儀器主要部件故障、儀器搬遷、設施（如純水系統）和環境的嚴重失控等。4.1.3常規使用期間，實驗室

5、可基于檢驗程序的穩定性，利用日常工作產生的檢驗和質控數據，定期對檢驗程序的分析性能進行評審，應能滿足檢驗結果預期用途的要求?，F用檢驗程序的任一要素（儀器、試劑、校準品等）變更，如試劑升級、儀器更新、校準品溯源性改變等，應重新進行驗證。4.2性能驗證的參數臨床化學定量檢驗程序的分析性能參數一般包括：測量正確度、測量精密度（含測量重復性和測量中間精密度）、測量不確定度、分析特異性（含干擾物）、分析靈敏度、檢出限和定量限、線性區間（可報告區間）等。實驗室應根據不同檢驗項目的預期用途，選擇對檢驗結果質量有重要影響的參數進行驗證。4.3性能驗證的判斷標準實驗室應根據臨床需求制定適宜的檢驗程序分析性能標準

6、。實驗室制定性能標準時宜考慮相關制造商或研發者聲明的標準、國家標準、行業標準、地方標準、團體標準、公開發表的臨床應用指南和專家共識等。實驗室性能驗證的結果應滿足實驗室制定的判斷標準。如果性能指標的驗證結果不符合實驗室制定的判斷標準，應分析原因，糾正后再實施驗證。注：如果驗證結果符合制造商或研發者聲明的性能指標，但不滿足實驗室制定的判斷標準，結果不可接受。5實驗前準備5.1人員實驗操作人員應熟悉方法原理與日常操作，包括樣本處理、校準、維護程序、質量控制等，確保檢測系統工作狀態正常。對于操作較簡單的檢測程序或儀器，建議操作人員的熟悉過程為 13天。對于操作較復雜的檢測程序或儀器，建議操作人員的熟悉

7、過程更長，如35天。2019 年 02 月 15 日發布2019 年 02 月 15 日實施 CNAS-GL037:2019第 4 頁 共 11 頁5.2驗證方案負責實施性能驗證的人員應了解驗證方案，制定驗證計劃，并組織實施。5.3儀器設備實驗相關分析儀器及輔助設備的性能指標（如加樣精密度、攜帶污染等）應與標稱值相符。5.4試劑和校準品除特殊要求外，驗證過程宜使用同一批號的試劑和校準品。5.5質量控制驗證過程中應使用適宜的質控品進行室內質量控制。6性能驗證要求6.1正確度驗證實驗室可采用偏倚評估、回收試驗、與參考方法比對等方式進行正確度的驗證。6.1.1偏倚評估6.1.1.1樣本按照如下優先順

8、序選用具有互換性的標準物質或基質與待測樣本相類似的標準物質：1)有證標準物質（CRM），包括國家標準物質（如GBW）、國際標準物質（如WHO、IFCC）、CNAS認可的標準物質生產者（RMP）提供的有證標準物質、與我國簽署互認協議的其他國家計量機構提供的有證標準物質（如NIST、JSCC）等；2)標準物質（RM），如廠商提供的工作標準品；3)正確度控制品；4)正確度驗證室間質評樣本，如CNAS認可的PTP提供的正確度驗證樣本。宜根據測量區間選用至少2個濃度水平的標準物質樣本。6.1.1.2驗證方法每個濃度水平的標準物質樣本至少每天重復測定2次，連續測定5天，記錄檢測結果，計算全部檢測結果的均值

9、，并按公式（1）計算偏倚。2019 年 02 月 15 日發布2019 年 02 月 15 日實施 CNAS-GL037:2019第 5 頁 共 11 頁偏倚 =結果均值 參考值(1)6.1.2回收試驗6.1.2.1樣本臨床樣本（基礎樣本）和被測物標準品。6.1.2.2樣本配制通過稱重法配制標準溶液，在臨床基礎樣本中加入不同體積標準溶液（標準溶液體積應少于總體積的 10%），制備至少 2個水平的樣本（樣本終濃度在測量區間內）。6.1.2.3驗證方法每個樣本重復測定3次或以上，計算均值濃度，按公式（2）計算回收率。R C (V0 V ) C0 V0100%V C S（2）式中： R回收率；V加入

10、標準液體積；V0基礎樣本的體積；C基礎樣本加入標準液后的測定結果（均值）；C0基礎樣本的測定結果；CS標準液的濃度。6.1.3與參考方法比對6.1.3.1樣本適宜的臨床樣本，不少于8份，被測物濃度在測量區間內均勻分布，并關注醫學決定水平。6.1.3.2參考方法公認的參考方法，如CNAS認可的參考實驗室使用的參考方法。6.1.3.3驗證方法按照制造商說明書或作業指導書規定的方法對實驗方法進行校準/校準驗證，宜在相同時段內完成對同一樣本的兩種方法平行檢測，每份樣本每個檢測方法重復檢測3次，計算每份樣本兩種方法檢測結果的均值，并按照公式（1）計算偏倚。2019 年 02 月 15 日發布2019 年

11、 02 月 15 日實施 CNAS-GL037:2019第 6 頁 共 11 頁6.2可比性驗證當實驗室無法開展正確度驗證時，可通過參加能力驗證、比對試驗等途徑，證明其測量結果與同類實驗室結果的一致性。如與 CNAS認可的 PTP（或可提供靶值溯源性證明材料的PTP）提供的PT項目結果進行比對，或與CNAS認可的實驗室使用的經性能驗證符合要求的在用檢測程序進行比對。6.2.1樣本患者/受試者樣本不少于20份，被測物濃度、活性等在測量區間內均勻分布，并關注醫學決定水平。使用PT樣本時應不少于5份。6.2.2參比系統經驗證分析性能符合預期標準，日常室內質控、室間質評/能力驗證合格的檢測系統。優先選

12、用符合以上要求的CNAS認可實驗室的檢測系統。6.2.3驗證程序按照WS/T492-2016規定的方法進行驗證。實驗系統均值與參比系統均值的差異在可接受范圍內。檢測PT樣本時，每個樣本應重復測定不少于3次。6.3精密度驗證精密度驗證應包括重復性和中間精密度。6.3.1樣本可采用新鮮或凍存的樣本。當樣本中待測物不穩定或樣本不易得到時，也可考慮使用基質與實際待檢樣本相似的樣本，如質控品。應至少評估2個水平樣本的不精密度。當2個水平樣本的不精密度有顯著差異時，建議增加為3個水平。所選樣本的被測物水平應在測量區間內，適宜時，至少有1個樣本的被測物水平在醫學決定水平左右。注1：通常較高值樣本的不精密度較

13、小，較低值樣本的不精密度偏大。對低值有臨床意義的檢測項目，宜評估有判斷價值的低水平樣本的不精密度。注2：如檢測結果沒有明確的醫學決定水平，可在參考區間上限左右選一個濃度，再根據檢驗項目的特點在測量區間內選擇另一個濃度。注3：如與廠商或文獻報導的不精密度比較，所選樣本水平宜與被比較的樣本水平接近。2019 年 02 月 15 日發布2019 年 02 月 15 日實施 CNAS-GL037:2019第 7 頁 共 11 頁6.3.2重復性驗證6.3.2.1試劑和校準品應使用同一批號的試劑和校準品，如適用，只進行一次校準。6.3.2.2驗證方法對樣本進行至少10次重復測定，計算均值、SD和CV。6

14、.3.2.3質量控制實驗過程中應至少檢測一個質控品。當質控結果失控時，不論實驗結果是否滿意都應棄去不用，重新進行試驗以取得全部實驗數據。6.3.2.4數據收集在進行數據分析前，檢查數據中的離群值。任何結果與均值的差值（離均差）超過4SD時，可認為是離群值。進行重復性評估實驗時，若離群值數量1，應懷疑是否為方法不穩定或操作者不熟悉所致，解決問題后再進行新的評估實驗。6.3.2.5數據分析依據實驗數據計算均值和標準差。6.3.3同時驗證重復性和中間精密度6.3.3.1驗證方法每天檢測 1個分析批，每批檢測 2個水平的樣本，每個樣本重復檢測 35次，連續檢測5天。在每一批次測量中，應同時測量質控品。

15、6.3.3.2數據收集在進行數據分析前，可參考WS/T 492-2016，檢查數據中由偶然誤差引起的離群值。6.3.3.3數據分析 =1 1()2批內標準差批間方差= （3）（4）1)2 = =1( )212實驗室內標準差1 = 12 +（5）2019 年 02 月 15 日發布2019 年 02 月 15 日實施 CNAS-GL037:2019第 8 頁 共 11 頁式中： D實驗天數n每天重復次數xdi第d天第i次重復結果d天所有結果的均值所有結果的均值6.4線性區間驗證6.4.1樣本樣本基質應與待檢臨床實驗樣本相似，不可采用含有對測定方法具有明確干擾作用物質的樣本，如溶血、脂血、黃疸或含

16、有某些特定藥物的樣本。在已知線性區間內選擇57個濃度水平，應覆蓋定量限（低限和高限）。6.4.2樣本準備可將高濃度樣本與低濃度樣本按預定比例進行稀釋得到系列樣本。如果高/低濃度樣本的值未知，可將每種血清編碼，用編碼代表每個血清的相對濃度。對于等濃度間隔樣本，可用連續整數（如 1、2、3、4與 5）代表連續樣本。進行數據處理時，可用樣本號代替濃度值。示例：下表中描述的樣本制備過程是按照等濃度間隔的設計進行的，每個濃度水平的樣本量為1.00ml。表：5個濃度水平的樣本制備樣本號12345低濃度血清(ml)1.000.000.750.250.500.500.250.750.001.00高濃度血清(m

17、l)6.4.3驗證方法每個濃度水平的樣本重復測定 34次。所有樣本應在一次運行中或幾次間隔很短的運行中隨機測定，最好在1天之內完成。6.4.4數據分析分別計算每個樣本檢測結果的均值，排除離群值。6.4.5多項回歸分析2019 年 02 月 15 日發布2019 年 02 月 15 日實施 CNAS-GL037:2019第 9 頁 共 11 頁對數據組進行多項回歸分析，得到一階、二階或三階多項式。一階多項式為直線，二階多項式表示上升曲線或下降曲線，三階多項式表示S形曲線（在測量范圍兩端具有明顯的非線性）。多項式方程如下：階數一階多項式回歸自由度（Rdf）Y = a + b1X234二階Y = a

18、 + b1X + b2XY = a + b1X + b2X22三階+ b3X36.4.6線性檢驗多元回歸方程中以 bi表示的系數為回歸系數。在二階與三階方程中，b2與b3為非線性系數。對回歸方程進行線性檢驗就是對每個非線性系數作t檢驗，判斷非線性系數與0是否有顯著性差異。b1不反映非線性，故不對其進行檢驗。對b2與b3的檢驗方法可參考WS/T 408-2012，5.2.2。6.4.7判斷標準線性驗證實驗結果為一階方程式為線性，檢測樣本的最低值和最高值之間為線性區間，應滿足4.3的要求。6.5可報告范圍驗證定量分析方法的可報告范圍是臨床實驗室發出檢驗報告的依據之一，可報告范圍的驗證包括可報告低限

19、（定量下限）與可報告高限（定量上限樣本最大稀釋倍數）。6.5.1樣本宜選擇與待測樣本具有相同基質的樣本。6.5.2樣本準備以血清樣本為例。低值樣本準備：將待測樣本（含被分析物）用混合人血清（含被分析物濃度水平較低）或 5%牛血清白蛋白生理鹽水溶液進行稀釋，產生接近于方法測量區間低限（定量下限）濃度水平的樣本，通常為 35個濃度水平，濃度間隔應小于測量區間低限的20%。高值樣本準備：使用混合血清或 5%牛血清白蛋白生理鹽水溶液或測定方法要求的稀釋液對高值待測樣本（必要時可添加被分析物，并計算出理論值）進行稀釋，使其接近于線性范圍的上1/3區域內，并記錄稀釋倍數。至少選用3個高2019 年 02

20、月 15 日發布2019 年 02 月 15 日實施 CNAS-GL037:2019第 10 頁 共 11 頁濃度樣本，稀釋倍數應為方法性能標明的最大稀釋倍數并適當增加或減小稀釋比例。6.5.3驗證方法在一次運行中將每個低值樣本重復測定510次，每個高值樣本重復測定3次。6.5.4數據分析分別計算每個低值樣本的均值、SD、CV值。對高值樣本，計算乘以稀釋倍數后的還原濃度和相對偏差。6.5.5可報告范圍的確定6.5.5.1可報告范圍低限（定量下限）以方法性能標示的總誤差或不確定度為可接受界值，從低值樣本結果數據中選取總誤差或不確定度等于或小于預期值的最低濃度水平作為可報告范圍低限。部分檢驗項目，如促甲狀腺激素（TSH）、肌鈣蛋白（TnI），在低濃度水平具有重要臨床意義，在驗證可報告范圍低限（定量下限）時，應特別關注其結果與預期標準的符合性。6.5.5.2可報告范圍高限選取還原濃度與理論濃度的偏差（%）等于或小于方法預期偏倚值時的最大稀釋倍數為方法推薦的最大稀釋倍數，測量區間的高限與最大稀釋倍數的乘積為該方法可報告范圍的高限。可報告范圍高限的確定應考慮臨床需求。注：超出可報告范圍時，實驗室檢測結果不能滿足其預期總誤差或不確定度的要求。6.6分