1、中藥新藥臨床前毒理學評價主要內容定義任務及目的毒性作用類別相關測定數據新藥臨床前毒理學毒理學定義毒理學：是研究毒性物質對機體的有害作用及其發生、機制、結果以及危害因素的科學。主要用于對外源性物質的安全性評價和危險性評估。早期毒理學：研究不同毒物的使用，著重毒物對機體的急性危害或致死作用現代毒理學：研究在特定情況下，生命有機體接觸化學、生物或物理物質產生有害作用（毒性）的科學。藥物毒理學：是研究藥物對生命有機體有害作用的科學，用于新藥臨床前安全性評價、臨床試驗及臨床合理用藥。 任務及目的藥物毒理學的任務：包括臨床毒理學、新藥臨床試驗、藥物流行病學研究的任務。藥物毒理學的基本目的： 認識并掌握藥物

2、的毒性作用，為臨床安全用藥提供科學依據； 以在用藥過程中避免或減輕這些有毒作用的發生。毒性作用類別藥物不良反應 （adverse reaction)：凡是不符合用藥目的并為病人帶來不適或痛苦的有害反應統稱為藥物不良反應。包括：副反應、后遺效應、停藥反應、毒性反應、變態反應、特異質反應、致癌性、致畸性、致突變性；毒性作用類別藥物不良反應副反應后遺效應停藥反應毒性反應變態反應特異質反應毒性作用致癌性致畸性致突變性藥源性疾病毒性作用類別1、毒性反應 (toxic reaction ) 在治療劑量下不出現，僅在劑量過大、用藥時 間過長或體內藥物蓄積過多時才出現的反應。2、變態反應(allergic r

3、eaction) 機體對藥物的不正常免疫反應，非肽類藥物作為半抗原與機體蛋白結合后，經過敏化過程而發生的反應。 特點：因藥因人而異，與藥物效應及劑量無關，用藥理拮抗藥解救無效。毒性作用類別3、特異質反應 （idiosyncrasy）用藥者有先天性遺傳異常，對某些藥物反應特別敏感，出現的反應性質可能與常人不同。藥理遺傳異常所致。特點：與藥物的固有藥理作用基本一致、嚴重程度與劑量成比例。4、致癌性（carcinogenesis）屬于長期用藥產生的毒性，包括遺傳毒性致癌物、非遺傳毒性致癌物。（可以是遲發效應）毒性作用類別5、生殖毒性和發育毒性（(reproductive and developmen

4、tal toxicity）生殖毒性：針對育齡人群，用藥后對生殖系統及與生育相關的神經或內分泌系統產生的毒性。發育毒性：關注藥物對胚胎的影響，特別是藥物的致畸毒性。多代生殖毒性評價：涉及藥物對子代生殖系統的影響。毒性作用類別6、致突變與遺傳毒性(mutagenesis and genetic toxicity )藥物損傷遺傳物質而發生突變作用，產生對人類本身（致癌毒性）及后代的影響（致畸毒性）。相關測定數據量效關系：藥物的毒性效應與劑量在一定范圍內成比例，稱為量效關系。量反應：毒性效應的強弱呈連續增減的量變，稱為量反應。例：心率快慢等。質反應：毒性效應以全或無、陰性或陽性等表示，稱為質反應。例：

5、死亡與生存、驚厥與不驚厥。相關測定數據最大無毒性反應劑量（no observed adverse effect level, NOAEL) ： 指受試物在一定時間內，按一定方式與機體接觸，用靈敏的現代檢測方法和觀察指標未發現損害作用的最高劑量最小毒性反應劑量：出現毒性反應的最小劑量最大耐受量（maximal tolerance dose，MTD）：不引起受試動物死亡的最高劑量相關測定數據最小致死劑量（minimal lethal dose，MLD）：引起個別受試動物出現死亡的劑量半數有效量（median effective dose, ED50）：能引起50%的動物或實驗標本產生反應的濃度或劑

6、量。半數致死量（median lethal dose, LD50 ） ：能引起50%的動物死亡的濃度或劑量。相關測定數據治療指數：TI= LD50/ ED50藥物實驗動物的LD50和 ED50的比值稱為治療指數（therapeutic index, TI），用以表示藥物的安全性。安全范圍（margin of safety）： ED99LD1（或ED95LD5）之間的距離。值越大越安全。有效量曲線和致死量曲線的斜率不一樣時，以TI評價藥物的安全性并不可靠。新藥臨床前毒理學 涉及全身毒性和局部毒性研究。是為新藥臨床用藥的安全性提供試驗依據，并為臨床毒副反應監測提供重要信息。新藥臨床前毒理學 目的意

7、義局限性申報資料評價程序新藥臨床前毒理學研究目的毒性劑量 Toxic Dose安全劑量范圍 Safety margin毒性反應 Toxic reaction: 性質、程度、量毒關系、產生、達峰、持續時間及反復產生毒性反應時間、遲發性、蓄積性、耐受性 尋找毒性反應靶器官 Target Organ 毒性反應是否可逆 Reversibility解毒或解救措施 Antidote確保臨床用藥安全(重點監測指標)新藥臨床前毒理學研究意義（1）通過動物實驗以確立：出現毒性反應的癥狀、程度、劑量、時間、靶器官以及損傷的可逆性；安全劑量及安全范圍。（2）通過上述資料的獲得，達到預測人類臨床用藥的可能毒性，并制定

8、防治措施；同時推算臨床研究的安全參考劑量和安全范圍的目的。新藥臨床前評價局限性1、種屬差異：假陽性或假陰性2、實驗動物數量有限3、健康狀態不同4、研究方法的局限藥理毒理研究申報資料 藥理毒理研究資料綜述，主要藥效學試驗，一般藥理試驗，急性毒性試驗，長期毒性試驗，過敏性、溶血性、刺激性等特殊安全性研究，復方制劑中多成分的相互影響試驗、致突變試驗，生殖毒性試驗，致癌試驗，依賴性試驗，動物藥代動力學試驗。藥物毒性臨床前評價程序1、急性毒性試驗(acute)2、長期毒性試驗(chronic)3、特殊毒性試驗(遺傳、生殖、致癌)4、其它毒性試驗(過敏、刺激 etc.)急性毒性試驗1、闡明藥物毒性作用及強

9、度、計算相對毒性參數相對毒性參數：治療指數TI =LD50/ED50越小越有效安全系數SF=LD5/ED95可靠或確實安全系數CSF =LD1/ED99安全范圍SM=(LD1/ED99-1) X 100%越大越安全LD5基本無害量 ED95基本有效量LD1肯定無害量 ED99肯定有效量急性毒性試驗2、了解毒性靶器官3、為長毒、特殊毒性試驗劑量設計：很多實驗參考LD50,主要藥效學劑量限度、一般藥理學和藥動學劑量設計也要參考急性毒性的LD50 ;短期致癌試驗高劑量=MTD4、為期臨床試驗起始劑量選擇：細胞毒類抗癌藥，I期臨床起始劑量= 1/10 LD505、為臨床毒副反應監護提供參考：中毒癥狀,

10、起始、持續、恢復時間；中毒靶器官；對抗試驗為臨床急救提供依據 急性毒性試驗基本原則:執行GLP 具體問題具體分析 隨機、對照、重復 動物:獲得盡量多信息前提下，使用盡量少動物 嚙齒類-小鼠或大鼠 非嚙齒類-犬或猴二種動物(嚙齒類及非嚙齒類)小鼠18-22g; 大鼠120-150g; 犬用成年犬 初始體重不應超過或低于平均體重的20%各半 急性毒性試驗受試物:工藝穩定、符合臨床用質量標準標明名稱、來源、批號、含量（或規格）、保存條件及配制方法等，附質檢報告輔料、溶劑、試劑等應標明批號、規格和生產廠家，符合試驗要求 例如：原料藥 臨床擬用劑型復方制劑：復方 + 拆方 (增毒？新毒？)易降解：含降解

11、產物量最高的受試物進行急毒試驗，并與臨床樣品的急毒試驗結果比較急性毒性試驗給藥途徑：臨床擬用途徑 + 原型藥物較完全進入循環途徑（如靜脈注射）嚙齒類ig給藥前應禁食12h，不禁水劑量和分組給藥劑量：未見毒性量嚴重毒性量設空白和/或溶媒（輔料）對照小動物4-6個劑量組, 組距0.65-0.85,求LD50大動物可用50%等量遞升法(近似致死劑量法), 求出ALD和MTD，不必達到致死量急性毒性試驗給藥容積：不等濃度等容量給藥動物給藥途徑 給藥量 小鼠 ig0.2-1.0 ml/10giv、ip、sc0.1-0.5 ml/10g大鼠 ig1.0-2.0 ml/100giv、ip、sc0.5-1.0

12、 ml/100g靜脈注射(iv)；腹腔注射(ip)；口服(po)；皮下注射(sc)；灌胃(ig)急性毒性試驗觀察指標及時間藥后4h內詳觀, 后每天上下午各一,觀察14d記錄毒性反應、死亡情況, 中毒癥狀、發生時間、持續時間、嚴重程度、恢復期及動物最短、最長死亡時間其它指標：一般指標、體重變化等急性毒性試驗急性毒性研究的一般觀察和指征觀 察可能涉及的器官、組織、系統 . 鼻孔呼吸阻塞，呼吸頻率和深度改變，體表顏色改變CNS，感官，神經肌肉等 .運動功能：運動頻率和特點的改變CNS，感官，神經肌肉等.驚厥(抽搐)：隨意肌明顯的無意識收縮或驚厥性收縮CNS,呼吸衰竭,神經肌肉,自主神經 .反射感官，

13、神經肌肉 .眼檢指征自主神經；出血，感染 .心血管指征自主神經,CNS,心輸出量降低等.唾液分泌自主神經 .豎毛自主神經 .痛覺喪失感官，CNS .肌張力自主神經等 .胃腸指征自主神經，胃腸動力等.皮膚刺激性，炎癥，過敏等急性毒性試驗結果處理：實驗資料用Bliss法計算LD50。必要時求不同性別LD50劑量反應、時間反應關系反應可能涉及組織、器官或系統肉眼病變和組織病檢，初步判斷毒性靶器官病檢報告應附：病檢者簽名+單位蓋章+病理照片 確定NOAEL、 MTD、ALD etc，初步判斷受試物的安全范圍 急性毒性試驗綜合評價判斷反應與藥物作用相關性：時間、發生率、劑量-反應關系動物種屬及背景數據病

14、理學檢查結果同類藥物特點安全范圍、毒性嚴重程度及可恢復性毒性作用靶器官毒性可能涉及部位大體解剖和組織病理學檢查結果長期毒性試驗第一階段（1）兩種品系、35天染毒、毒性量效曲線，推薦臨床使用途徑；（2）器官毒性試驗、死亡情況、體重變化、血液學、臨床生化學、組織學檢查；（3）致突變活性第二階段篩選；（4）生殖毒性試驗；（5）受試動物的藥代動力學研究；（6）行為試驗；（7）協同、增效、拮抗作用。長期毒性試驗第二階段（1）動物長期毒性試驗（半年以上）；（2）哺乳類動物致突變試驗；（3）嚙齒類動物2年至癌試驗；（4）人類藥代動力學試驗；（5）人類臨床試驗；（6）短期和長期用藥的流行病學資料。長期毒性試驗

15、基本原則執行GLP 整體性研究結果與其它藥理毒理試驗互為印證、說明和補充 具體問題具體分析 隨機、對照、重復 長期毒性試驗動物in vitro體系篩選實驗動物種屬或品系理想動物對受試物生物轉化與人體相近對受試物敏感已有大量歷史對照數據 二種動物，嚙齒類首選大鼠，非嚙齒類用Beagle犬, 必要時用猴、豬等符合等級要求 來源、品系、遺傳背景清楚，有動物質量合格證 大鼠6-9 w， Beagle犬6-12 m,體重CV20各半 必要時，可用疾病模型動物進行試驗 Duration 6m, natural death ( rat: 1y-15%, 1.5y-50%, 2y-70-80%) 長期毒性試驗

16、給藥途徑與臨床用藥途徑一致臨床iv , 大鼠給藥1月，ip代替im或sc應變換注射部位必要時改變給藥途徑但應說明原因分組三個給藥組, 單位：mg(ml,IU)/kg 或 /m2不等濃度等容量給藥低劑量組高于有效劑量，不出現毒性中劑量組輕微或中等度毒性高劑量組明顯/嚴重毒性，或個別動物死亡空白對照溶媒或賦形劑溶媒或賦形劑有毒性時則增加正常對照組陽性對照長期毒性試驗測試次數能反映動態變化 一般行為、食量每天觀察記錄大鼠體重每周一次大動物生理指標每半月一次大動物ECG 導聯，給藥前、給藥期間、停藥及恢復期均要檢測發現有陽性指標應加大觀察密度 綜合評價長毒結果結合藥學，藥理學、PK、 TK和其它毒理學

17、研究(+臨床研究)，綜合評價 找到：不良反應(T&D&R)、毒性靶器官 (O)、安全范圍(S)、臨床需重點檢測指標()及臨床監護或解救措施(A)特殊毒性試驗研究是否會引起畸胎、腫瘤，對遺傳物質是否有損傷等；特殊毒性試驗存在著種屬差異性致突變試驗(遺傳毒性試驗)生殖毒性試驗致癌試驗特殊毒性試驗致突變試驗微生物回復試驗(Ames試驗）哺乳動物培養細胞基因突變試驗果蠅伴性隱性致死試驗染色體畸變試驗嚙齒動物顯性致死試驗精原細胞染色體畸變試驗動物微核試驗 程序外DNA合成(UDS)試驗SOS顯色試驗特殊毒性試驗生殖毒性試驗一般生殖毒性試驗致畸敏感期毒性試驗圍產期毒性試驗致癌試驗短期致癌試驗哺乳動物培養細胞惡性轉化試驗小鼠肺腫瘤誘發短期試驗長期致癌試驗特殊毒性試驗其他試驗皮膚給藥毒性試驗 皮膚給藥的急性毒性試驗 皮膚給藥的長期毒性試驗 皮膚刺激試驗 皮膚過敏試驗 皮膚光敏性試驗特殊毒性試驗腔道用藥毒性試驗眼刺激試驗 滴鼻劑和吸入劑急性毒性試驗 滴鼻劑和吸入劑刺激試驗 直腸、陰道用藥急性毒性試驗 直腸、陰道用藥刺激試驗 藥物依賴性試驗 身體依賴性試驗 自然戒斷試驗 替代試驗 催促試驗 誘導試驗 精神依賴性試驗特殊毒性試驗過敏性試驗皮膚過敏試驗豚鼠：GPMT(Guinea Pig Maximization Test,用佐劑) BT(Buehler Test)小鼠：MEST（Mouse ear