1、風濕性疾病相關自身抗體淺析1第1頁，共49頁。Bacteria, Fungi, Parasites, Viruses FUNGUS -Epidermophyton floccosum(causes athletes foot)VIRUS- PolioBACTERIA -Clostridium difficile (causes antibiotic-associated colitis & antibiotic-associated diarrhea)PARASITE -Tapeworm2第2頁，共49頁。免疫的原始概念：指機體對病原生物有抵抗能力，即免除傳染病或瘟疫免疫的現代概念： a 機體

2、對抗原性異物進行識別與清除 b 對自身成分免疫耐受 c 維持機體內環境穩定的能力免除稅賦，免除差役 immunitas免于疫患，免除瘟疫 immunity免疫的概念中文“免疫”最早見于明免疫類方3第3頁，共49頁。“自己成分”與“非己成分”自身的 & 外界的 ？免疫系統將免疫細胞發育過程中接觸過的物質視為自己，未接觸過的物質視為非己 舉例：交感性眼炎（晶狀體蛋白）4第4頁，共49頁。表位擴展是自身免疫性疾病發生發展的一種機制機體的免疫系統可不斷擴大所識別的自身抗原表位的范圍，對自身抗原不斷發動新的免疫攻擊，使疾病遷延不愈并不斷加重在SLE的發生過程可觀察到表位擴展現象，患者體內可先發生對組蛋白

3、H1的免疫應答，繼而出現對DNA的免疫應答在類風濕關節炎、多發性硬化和胰島素依賴性糖尿病患者也觀察到了表位擴展的現象5第5頁，共49頁。自身免疫 機體免疫系統受某種因素作用使自身免疫耐受削弱或破壞 免疫系統會對自身成份包括正常或變性的組織、器官、 細胞、蛋白質或酶類等自身抗原產生免疫應答反應 出現自身抗體或致敏淋巴細胞的這種現象稱為自身免疫 自身免疫可以是正常生理性的 例如： 針對衰老或死亡的自體細胞 自身免疫也可以是病理性的，引起自身免疫病6第6頁，共49頁。自身免疫性疾病（AID)特點：（1）多數是自發或特發性的，感染、藥物等外因可能有一定的影響（2）患者血清中存在有高水平的 球蛋白（3）

4、患者血清中有高效價的自身抗體或出現與自身抗原反應的致敏 淋巴細胞（4）病損部位有變性的Ig沉積，呈現以大量淋巴細胞和漿細胞浸潤為主的慢性炎癥7第7頁，共49頁。自身免疫性疾病（AID)特點：（5）病程一般較長，發作與緩解交替出現，僅有少數為自限性（6）女性多于男性（7）部分有遺傳傾向（8）糖皮質激素等免疫抑制劑有效（9）常有其它自身免疫病同時存在（10）可復制出相似的動物疾病模型 8第8頁，共49頁。臨床角度-自身免疫性疾病診斷的復雜性多臟器、多系統受累不同時出現同一疾病的疾病譜廣泛不同AID的病理損害之間有交叉、重疊在同一時間段不同病變對治療的反應不一由于疾病本身的免疫紊亂和治療因素而繼發感

5、染當患者出現感染時表現不典型隨時間的延續可能出現的分化和進展9第9頁，共49頁。自身抗體 【概念】 由各種原因造成的機體B細胞產生針對自身組織 成分的抗體，稱為自身抗體自身抗體是自身免疫性疾病的重要標志每種自身免疫性疾病都伴有特征性的自身抗體譜10第10頁，共49頁。可變區和恒定區重鏈與輕鏈 抗體的結構11第11頁，共49頁。自身抗體與疾病的關系 某些自身抗體對某種疾病的診斷具有高度特異性，已經成為 該病的血清標記抗體或特異性抗體 某些自身抗體與疾病的活動性有相關性，少數自身抗體參與了免疫病病理性損傷 12第12頁，共49頁。特異性較強的自身抗體抗Sm抗體系統性紅斑狼瘡抗Scl-70抗體 系統

6、性硬化癥抗SSA/SSB抗體干燥綜合征抗CCP抗體類風濕關節炎13第13頁，共49頁。抗體滴度的高低可判斷疾病的活動性抗雙鏈DNASLEaCLSLE、磷脂抗體綜合征RF 類風濕關節炎14第14頁，共49頁。預測疾病的預后及臨床亞型抗Jo-1皮肌炎合并肺間質病變抗Scl-70 彌漫性系統性硬化抗rRNP 狼瘡腦病15第15頁，共49頁。自身抗體的意義 自身免疫性疾病的診斷 疾病活動性的判斷 療效的觀察及預后 指導臨床用藥等 進行不同疾病的鑒別診斷16第16頁，共49頁。自身抗體常用檢測方法17第17頁，共49頁。項目檢驗方法SLE四項ANA間接免疫熒光抗DSDNA抗體間接免疫熒光抗組蛋白抗體EL

7、ISA抗核小體抗體ELISAENA系列抗RNP免疫印跡、 ELISA抗SM免疫印跡、 ELISA抗SSA免疫印跡、 ELISA抗SSB免疫印跡、 ELISA抗JO-1免疫印跡、 ELISA抗SCL-70免疫印跡、 ELISA抗核糖體P蛋白免疫印跡、 ELISARA三項AKA（抗角質蛋白抗體）間接免疫熒光抗RA33ELISA抗CCP（抗環瓜氨酸肽抗體）ELISAANCA四項P-ANCA（熒光模型為核周模型）間接免疫熒光C-ANCA（熒光模型為細胞質模型）間接免疫熒光MPO-ANCA（髓過氧化酶抗體）ELISAPR3-ANCA（抗蛋白酶3抗體）ELISA常見的自身抗體及其檢測方法(1)18第18頁

8、，共49頁。(2)自身免疫肝炎七項檢驗方法ANA間接免疫熒光抗LMA抗（肝細胞膜抗體）間接免疫熒光ASMA（抗平滑肌抗體）間接免疫熒光抗LKM（抗肝腎微粒體抗體）間接免疫熒光抗SLA（抗可溶性肝抗原抗體）間接免疫熒光AMA（線粒體抗體）間接免疫熒光抗LSP（抗肝臟特異性蛋白抗體）間接免疫熒光RF三項RF-IgGELISARF-IgAELISARF-IgMELISA抗磷脂綜合征三項（ASP）ELISAPT-IgG（凝血素抗體）ELISAPT-IgMELISA抗2-糖蛋白1抗體ELISA常見的自身抗體及其檢測方法19第19頁，共49頁。抗核抗體(ANA)均質型與AHA（抗組蛋白抗體）、抗DNA有關

9、，引起LE形成主要見于SLE、藥物性狼瘡核膜型 與抗ds-DNA有關， 多見于SLE，特別是有腎炎者20第20頁，共49頁。抗核抗體(ANA)斑點型與抗ENA有關，應進一步查特異性抗體核仁型多見于系統性硬皮病21第21頁，共49頁。類風濕因子（RF）的檢測及應用 RF是一種抗IgG分子Fc片段抗原決定簇的抗體是以變性IgG為靶抗原的自身抗體可與人或動物的變性IgG結合，而不與正常IgG發生凝集最多見于類風濕關節炎患者有IgM、IgG、IgA和IgE型IgM型為主要類型22第22頁，共49頁。類風濕因子（RF）檢測方法：a.膠乳凝集試驗：只能定性或定量，靈敏度及特異性不變，只能檢測IgM型RFb

10、.速率散射比濁法：定量檢測，準確、快速，準確性和敏感性高于膠乳凝集試驗，也只能檢測IgM型RF。c.ELISA法：可檢出不同Ig類型的RF23第23頁，共49頁。類風濕因子（RF）臨床應用 RF在RA中的陽性率為70左右 是診斷RA的重要標準之一 RF定量與病情的活動性和嚴重性成正比 持續高滴度的RF常提示RA病情活動，骨侵蝕發生率高，常可伴有皮下結節或血管炎等關節外表現，提示預后不良24第24頁，共49頁。類風濕因子（RF）RF并非RA獨有的特異性抗體，對RA的診斷不具特異性SLE 30% SS 70%90%SSc 20%30% MCTD 50%60%5%以下的正常人RF(+)一定是RA R

11、F(-)一定就不是RA25第25頁，共49頁。RA自身抗體譜及臨床意義RF 60-70RA中出現，量與RA活動性及嚴重性呈正相關。 亦在其它CTD出現 抗CCP在50RA中出現（抗環瓜氨酸肽抗體） 特異性較高AKA（抗角蛋白抗體）在40RA陽性APF（抗核周因子） 在52RA陽性抗RA33RA陽性率為35抗Sa在部分RA陽性 以上抗體陽性有助于早期RA及不典型RA的診斷和早期開展治療，改善預后26第26頁，共49頁。抗ENA抗體譜 是以核內可提取核抗原為靶抗原的自身抗體的總稱 它主要包括抗Sm、抗RNP、抗SSA、抗SSB、抗Jo-1、抗Scl-70、抗組蛋白抗體、抗核小體抗體、抗核糖體P-蛋

12、白抗體、抗著絲點抗體,抗dsDNA。 不同的自身免疫性疾病可以產生不同的抗ENA抗體，ENA抗體的檢測對自身免疫性疾病的診斷和鑒別具有重要意義27第27頁，共49頁。抗ENA抗體譜檢測方法 免疫印跡法（IBT）、ELISA法、雙擴散法、對流免疫電流、金標法等。 免疫印跡技術不需要純化抗原，靈敏度高、特異性強、操作簡單，是廣泛采用檢測抗ENA抗體的技術28第28頁，共49頁。臨床意義nRNPSmSS-ASS-BScl-70Jo-1CENP BdsDNA核小體組蛋白核糖體P蛋白29第29頁，共49頁。nRNP高滴度的抗U1-nRNP抗體是混合性結締組織病（MCTD）的標志陽性率為95-100滴度與

13、疾病活動性相關在30-40的系統性紅斑狼瘡患者中也可檢出抗U1-nRNP抗體，但幾乎總伴有抗Sm抗體30第30頁，共49頁。Sm抗Sm抗體是系統性紅斑狼瘡的特異性標志，與抗dsDNA抗體一起，是系統性紅斑狼瘡的診斷指標，但陽性率僅為5-10抗Sm抗體的檢測對早期,不典型的SLE或治療后的回顧性診斷具有很大幫助31第31頁，共49頁。SS-A抗SS-A抗體與各類自身免疫性疾病相關最常見于干燥綜合征（40-80）、也見于系統性紅斑狼瘡（30-40）和原發性膽汁性肝硬化（20）中，偶見于慢性活動性肝炎在100的新生兒紅斑狼瘡中可出現抗SS-A抗體。該抗體可經胎盤傳給胎兒引起炎癥反應和新生兒先天性心臟

14、傳導阻滯32第32頁，共49頁。SS-B抗SS-B抗體幾乎僅見于干燥綜合征（40-80） 和SLE（10-20）的患者中男女比例約為29:1在干燥綜合征中抗SS-A抗體和抗SS-B抗體常同時出現33第33頁，共49頁。Scl-70見于25-75的進行性系統性硬化癥（彌散型）患者因實驗方法和疾病活動性而異在局限型硬化癥中不出現34第34頁，共49頁。Jo-1見于多肌炎、肌炎陽性率為25-35常與合并肺間質纖維化相關35第35頁，共49頁。dsDNA診斷疾病-IFT判斷疾病活動性-ELISA對系統性紅斑狼瘡具有很高的特異性除抗Sm抗體外，抗dsDNA抗體也可作為該病的一個血清學指標陽性率為40-9

15、0%36第36頁，共49頁。自身抗體檢測結果正確解讀檢測方法局限性：假陽性，假陰性臨床意義局限性：非特異性，生理性，疾病前期臨床表現陽性，實驗室檢查陰性實驗室檢查陽性，臨床表現陰性37第37頁，共49頁。自身免疫病自身抗體非常復雜SLE患者中存在100多種自身抗體Semin Arthritis Rheum. 2004 Oct;34(2):501-37.38第38頁，共49頁。自身免疫病自身抗體非常復雜APS患者中存在30種自身抗體J Autoimmun, 2008. 30(1-2): p. 74-83.39第39頁，共49頁。N Engl J Med 2003;349:1526-33.疾病預警

16、自身抗體在SLE發病前9.4年出現40第40頁，共49頁。疾病預警AMA在PBC發病前10年出現41第41頁，共49頁。臨床復雜性急性肝衰患者出現2和PBC特異性抗體42第42頁，共49頁。臨床復雜性抗CCP抗體在丙肝中8.543第43頁，共49頁。指標陰性是否意味著疾病的排除？指標陽性意味著什么？矛和盾？44第44頁，共49頁。特異性的局限各指標與對應疾病之間： 如 SLE 抗Sm抗體特異性99% 敏感性僅為25%RA RF陽性可出現在SLE, pSS, SSc, 慢性肺結核， 高球蛋白血癥等，5%正常人可出現低滴度的RF 45第45頁，共49頁。“自相矛盾”的結果ANA (間接免疫熒光法)陽性，靶抗原陰性ANA (間接免疫熒光法)陰性，靶抗原陽性（膜條法）， 占10%，為客觀存在ANCA：熒光法陰性，但靶抗原陽性（5%）46第46頁，共49頁。特異性指標陽