1、實 習 報 告實習名稱 食品安全檢測技術課程實習-生物危害性項目檢測 系 不 生 物 與 化 學 工 程 年級專業 食品工程(本科） 學生姓名 XXX 指導老師 XXX X X X XXX年 XX月 XX 日奶粉中生物危害性項目的檢測一、實習時刻、地點和實習單位實習時刻：2010年12月06日2010年12月19日（二周）。實習地點：生物與化學工程系微生物實驗室實習單位：食品科學與工程第六組二、實習過程起止日期實習單位和部門要緊實習內容和方式組不指導老師11.18生物與化學系微生物實驗室動員大會各組成員12.612.8查找資料，制定方案，老師審定方案后，學生預備儀器、材料12.9-12.12食

2、品變質前后菌落總數檢測12.13革蘭氏染色法檢測菌落總數中陰陽性菌數量的變化12.14-12.18食品變質前后霉菌總數檢測12.19書寫實習報告以及實習筆記三、實習目的與要求1、實習目的：食品安全檢測技術實習是不可缺少的實踐性教學環節，是食品科學與工程、食品質量與安全專業的必修課。依照教學大綱要求，通過二周的實習，學生對食品的生物安全性及其操縱技術應加深理解，熟悉試樣的采集、保存、制備方法，了解常規生物性危害項目，掌握常見分析檢測方法及其操作，熟悉有關儀器設備的使用方法，并初步具有分析解決實際遇到的具體問題的能力。實習中應注重培養和提高動手能力，進一步鞏固和深化課堂理論知識，達到理論與實踐相輔

3、相成，融會貫穿，為今后參加工作奠定一定基礎，并通過實習培養學生良好的職業道德觀。2、實習要求：1、對待測樣品的生物危害性項目檢測能制訂出詳細的方案。2、合理地選擇和使用所需的儀器。3、能合理、準確地配制各種試劑并滅菌。4、能在無菌室中正確地進行各項無菌操作。5、能在規定的時刻內完成危害性項目的檢測。6、實習筆記每天記錄及時、清晰、真實。7、各組內成員要相互配合，有問題應主動向老師請教。8、每次（天）操作完成后，要對工作區域進行清理整潔工作。9、愛惜儀器、節約試劑和水電，注意安全，防止意外事故發生。10、實習結束一周后寫出實習報告。四、實習內容1、分析檢驗的依據檢測項目引用標準植物蛋白飲料衛生標

4、準 GB 163222010食品微生物學檢驗 菌落總數測定引用GB 4789.22010奶粉中霉菌和酵母計數引用GB 4789.1520102、分析檢測的方法與內容一：原理菌落總數：食品檢樣通過處理，在一定條件下(如培養基、培養溫度和培養時刻等)培養后，所得每g (mL)檢樣中形成的微生物菌落總數。二：設備和材料除微生物實驗室常規滅菌及培養設備外，其他設備和材料如下:2. 1恒溫培養箱:36 士1，30 士1 2. 2冰箱:2 5 2. 3恒溫水浴箱:46 士1 。2. 4天平:感量為0.1 g2. 5均質器。2. 6振蕩器。2. 7無菌吸管:1 mL(具0.01 mL刻度)、10 mL(具0

5、.1 mL刻度)或微量移液器及吸頭。2. 8無菌錐形瓶:容量250 mL, 500 mL2. 9無菌培養皿:直徑90 mm2. 10 pH計或pH比色管或周密pH試紙。2. 11放大鏡或/和菌落計數器。三：培養基和試劑3. 1平板計數瓊脂培養基:1成分胰蛋白陳5.0 g 酵母浸膏2.5 g 葡萄糖1.0 g瓊脂 15.0 g 蒸餾水1000 mL pH 7.0士0.22制法將上述成分加于蒸餾水中，煮沸溶解，調節pH。分裝試管或錐形瓶，121高壓滅菌15 min3.2 磷酸緩沖液: 1成分磷酸二氫鉀(KH2P04) 34.0 g 蒸餾水500 mL pH 7.22制法 貯存液:稱取34.0 g的

6、磷酸二氫鉀溶于500 mL蒸餾水中，用大約175ml的1mol/l氫氧化鈉調節PH，用蒸餾水稀釋至1 000 mL)u貯存于冰箱。稀釋液:取貯存液1.25 mL，用蒸餾水稀釋至1 000 mL，分裝于適宜容器中，121 高壓滅菌15 min3.3無菌生理鹽水1成分 氯化鈉8.5 g 蒸餾水1 000 mL2制法 稱取8.5 g氯化鈉溶于1 000 mL蒸餾水中，121 高壓滅菌15 min 菌落總數的檢測程序4操作步驟4. 1樣品的稀釋4.1.1固體和半固體樣品:稱取25 g樣品置盛有225 mL磷酸緩沖液或生理鹽水的無菌均質杯內，8000 r/min-10000 r/min均質1 min-2

7、 min，或放入盛有225 mL稀釋液的無菌均質袋中，用拍擊式均質器拍打1 min-2 min制成1:10的樣品勻液。4.1.2液體樣品:以無菌吸管吸取25 mL樣品置盛有225 mL磷酸緩沖液或生理鹽水的無菌錐形瓶 (瓶內預置適當數量的無菌玻璃珠)中，充分混勻，制成1:10的樣品勻液。4.1.3用1 mL無菌吸管或微量移液器吸取1:10樣品勻液1 mL沿管壁緩慢注于盛有9 mL稀釋液的無菌試管中(注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面)，振搖試管或換用1支無菌吸管反復吹打使其混合均勻，制成1:100的樣品勻液。4.1.4按6.1.3操作程序，制備10倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次，換用1次1

8、 mL無菌吸管或吸頭。4.1.5依照對樣品污染狀況的可能，選擇2個一3個適宜稀釋度的樣品勻液(液體樣品可包括原液)，在進行10倍遞增稀釋時，吸取1 mL樣品勻液于無菌平皿內，每個稀釋度做兩個平皿。同時，分不吸取1 mL空白稀釋液加入兩個無菌平皿內作空白對比。4.1.6及時將巧15mL-20 mL冷卻至46 的平板計數瓊脂培養基(可放置于46 士1 恒溫水浴箱中保溫)傾注平皿，并轉動平皿使其混合均勻。4. 2培養4. 2. 1待瓊脂凝固后，將平板翻轉，36 士1 培養48 h士2h。水產品30 士1 培養72 h士3 h4.2.2假如樣品中可能含有在瓊脂培養基表面布滿生長的菌落時，可在凝固后的瓊

9、脂表面覆蓋一薄層瓊脂培養基(約4 mL)，凝固后翻轉平板，按6.2.1條件進行培養。4. 3菌落計數 可用肉眼觀看，必要時用放大鏡或菌落計數器，記錄稀釋倍數和相應的菌落數量。菌落計數以菌落形成單位(colony-forming units CFU)表示。4. 3. 1選取菌落數在30 CFU-300 CFU之間、無蔓延菌落生長的平板計數菌落總數。低于30 CFU的平板記錄具體菌落數，大于300 CFU的可記錄為多不可計。每個稀釋度的菌落數應采納兩個平板的平均數。4.3.2其中一個平板有較大片狀菌落生長時，則不宜采納，而應以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數;若片狀菌落不到平板的一半，而其

10、余一半中菌落分布又專門均勻，即可計算半個平板后乘以2，代表一個平板菌落數。4.3.3當平板上出現菌落間無明顯界線的鏈狀生長時，則將每條單鏈作為一個菌落計數。5結果與報告5. 1菌落總數的計算方法若只有一個稀釋度平板上的菌落數在適宜計數范圍內，計算兩個平板菌落數的平均值，再將平均值乘以相應稀釋倍數，作為每g （mL)樣品中菌落總數結果。5.1.1若有兩個連續稀釋度的平板菌落數在適宜計數范圍內時，按公式(1)計算:、式中:N一樣品中菌落數;C一平板(含適宜范圍菌落數的平板)菌落數之和;n1第一稀釋度(低稀釋倍數)平板個數;n2第一稀釋度(高稀釋倍數)平板個數;d一稀釋因子(第一稀釋度)。5.1.2

11、若所有稀釋度的平板上菌落數均大于300 CFU，則對稀釋度最高的平板進行計數，其他平板可記錄為多不可計，結果按平均菌落數乘以最高稀釋倍數計算。5.1.3若所有稀釋度的平板菌落數均小于30 CFU，則應按稀釋度最低的平均菌落數乘以稀釋倍數計算。5.1.4若所有稀釋度(包括液體樣品原液)平板均無菌落生長，則以小于1乘以最低稀釋倍數計算。5.1.5若所有稀釋度的平板菌落數均不在30 CFU-300 CFU之間，其中一部分小于30 CFU或大于30FU時，則以最接近30 CFU或300 CFU的平均菌落數乘以稀釋倍數計算。5. 2菌落總數的報告5. 2. 1菌落數小于100 CFU時，按“四舍五入”原

12、則修約，以整數報告。5.2.2菌落數大于或等于100 CFU時，第3位數字采納“四舍五入”原則修約后，取前2位數字，后面用0代替位數;也可用10的指數形式來表示，按“四舍五入”原則修約后，采納兩位有效數字。5.2.3若所有平板上為蔓延菌落而無法計數，則報告菌落蔓延。5. 2. 4若空白對比上有菌落生長，則此次檢測結果無效。5.2.5稱重取樣以 CFU/g為單位報告，體積取樣以CFU/mL為單位報告。稀釋度計數10-1無法計數10-23810-34空白06奶粉中霉菌總數的測定6、1檢驗原理食品檢樣通過處理，在一定條件下（如培養基、培養溫度和培養時刻等）培養后，所得每g（mL）檢樣中形成的微生物菌

13、落總數。6、2檢驗儀器和試劑除微生物實驗室常規滅菌及培養設備外，其他設備和材料如下：6、2、1 冰箱：2 5 。6、2、2 恒溫培養箱： 28 1 。6、2、3 均質器。6、2、4 恒溫振蕩器。6、2、5 顯微鏡：10100。6、2、6 電子天平：感量0.1 g。6、2、7 無菌錐形瓶:容量500 mL、250 mL。6、2、8 無菌廣口瓶：500 mL。6、2、9 無菌吸管：1 mL(具0.01 mL 刻度)、10 mL(具0.1 mL 刻度)。6、2、10 無菌平皿：直徑90 mm。6、2、11 無菌試管: 10 mm75 mm。6、2、12 無菌牛皮紙袋、塑料袋。6、2、13 馬鈴薯-葡

14、萄糖-瓊脂培養基：6、2、13、1 成分馬鈴薯(去皮切塊) 300 g；葡萄糖 20.0 g；瓊脂 20.0 g；氯霉素 0.1 g蒸餾水 1000 mL6、2、13、2 制法將馬鈴薯去皮切塊，加1000mL 蒸餾水，煮沸10 min20 min。用紗布過濾，補加蒸餾水至1000 mL。加入葡萄糖和瓊脂，加熱溶化，分裝后，121 滅菌20 min。傾注平板前，用少量乙醇溶解氯霉素加入培養基中。6、2、14 孟加拉紅培養基：6、2、14、1 成分蛋白胨 5.0 g；葡萄糖 10.0 g；磷酸二氫鉀 1.0 g；硫酸鎂（無水） 0.5 g瓊脂 20.0 g；孟加拉紅 0.033 g；氯霉素 0.1

15、 g；蒸餾水 1000 mL6、2、14、2 制法上述各成分加入蒸餾水中，加熱溶化，補足蒸餾水至1000 mL，分裝后，121滅菌20 min。傾注平板前，用少量乙醇溶解氯霉素加入培養基中。6、3操作方法6.3.1 樣品的稀釋6.3.1.1 以無菌吸管吸取25 mL 樣品至盛有225 mL 無菌蒸餾水的錐形瓶（可在瓶內預置適當數量的無菌玻璃珠）中，充分混勻，制成1:10 的樣品勻液。6.3.1.2 取1 mL 1:10 稀釋液注入含有9 mL 無菌水的試管中, 另換一支1 mL 無菌吸管反復吹吸,此液為1:100 稀釋液。6.3.1.3 按2.3.3.1.2 操作程序，制備10 倍系列稀釋樣品

16、勻液。每遞增稀釋一次，換用1 次1 mL 無菌吸管。6.3.1.4 依照對樣品污染狀況的可能，選擇2 個3 個適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣品可包括原液），在進行10 倍遞增稀釋的同時，每個稀釋度分不吸取1 mL 樣品勻液于2 個無菌平皿內。同時分不取1 mL樣品稀釋液加入2 個無菌平皿作空白對比。6.3.1.5 及時將15 mL20 mL 冷卻至46 的馬鈴薯-葡萄糖-瓊脂或孟加拉紅培養基(可放置于461恒溫水浴箱中保溫)傾注平皿，并轉動平皿使其混合均勻。6.3.2 培養待瓊脂凝固后，將平板倒置，281培養5d，觀看并記錄。6.3.3 菌落計數肉眼觀看，必要時可用放大鏡，記錄各稀釋倍數和相應的

17、霉菌和酵母數。以菌落形成單位（colonyforming units，CFU）表示。選取菌落數在10 CFU150 CFU 的平板，依照菌落形態分不計數霉菌和酵母數。霉菌蔓延生長覆蓋整個平板的可記錄為多不可計。菌落數應采納兩個平板的平均數。6、4記錄與數據處理6、4、1奶粉變質前實驗記錄： 10-3稀釋度平板上的平均菌落數為2個 10-2 稀釋度平板上的平均菌落數為38個數據處理：奶粉中霉菌總數：由10-2 稀釋度平板上的平均菌落數為20個可知則奶粉中霉菌總數為（2.0103個/ mL ） 同理，由10-3稀釋度平板上只長了2個菌落可知奶粉中霉菌含量為（2.0103個/ mL ）結論：取平均值

18、可知：奶粉中霉菌含量為2.0103個/ mL6、4、2 奶粉變質后實驗記錄：10-5稀釋度平板上的平均菌落數為4個 10-4 稀釋度平板上的平均菌落數為37個數據處理：奶粉中霉菌總數：由10-4稀釋度平板上的平均菌落數為37個可知奶粉中霉菌總數為（3.7105個/ mL ） 同理，由10-5 稀釋度平板上只長了4個菌落可知奶粉中霉菌含量為（4.0105個/ mL ）結論：取平均值可知：奶粉中霉菌含量為3.85105個/ mL五、實習收獲和重要心得體會 本次生產實習對我們這些立即融入社會的大學生來講，起到了舉足輕重的作用，它使我們對以后的工作方向有了一個大致的了解。隨著實驗的接著即霉菌含量的測定的實驗進一步加強了我的經歷，鞏固了我的知識。現在我不僅會制備培養基、用十倍稀釋法稀釋樣液，還能特不熟練的倒平板、通過平板上的菌落數計算微生物的含量，并能熟練使用革蘭氏染色法檢測細菌中的陰性菌與陽性菌。總的來講，有以下幾點收獲：第一，掌握了一些培養基的配置方法，例如細菌用的牛肉膏蛋白胨培養基、可用于食品中霉菌和酵母菌計數、分離的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基（PDA）等。第二，學