1、專題二十六基因工程高考生物 (北京市選考專用)第一頁，共一百二十八頁。A組自主命題北京卷題組五年高考1.(2019北京理綜,4,6分)甲、乙是嚴重危害某二倍體觀賞植物的病害。研究者先分別獲得抗甲、乙的轉基因植株,再將二者雜交后得到F1,結合單倍體育種技術,培育出同時抗甲、乙的植物新品種。以下對相關操作及結果的敘述,錯誤的是()A.將含有目的基因和標記基因的載體導入受體細胞B.通過接種病原體對轉基因的植株進行抗病性鑒定C.調整培養基中植物激素比例獲得F1花粉再生植株D.經花粉離體培養獲得的若干再生植株均為二倍體第二頁，共一百二十八頁。答案D基因工程中需將含有目的基因和標記基因的載體導入受體細胞,

2、A正確;通過接種病原體,可在個體生物學水平上對轉基因的植株進行抗病性鑒定,B正確;在花粉離體培養過程中,生長素與細胞分裂素的比例影響脫分化與再分化過程,調整培養基中生長素與細胞分裂素比例有利于獲得F1花粉再生植株,C正確;經花粉離體培養獲得的若干再生植株均為單倍體,D錯誤。素養解讀本題借助育種相關知識,考查考生運用所學知識,分析某些生物學問題、作出合理判斷的能力;試題通過抗甲、乙病害的植物新品種的培育,體現了科學思維素養中的演繹與推理要素。第三頁，共一百二十八頁。2.(2018北京理綜,5,6分)用Xho和Sal兩種限制性核酸內切酶分別處理同一DNA片段,酶切位點及酶切產物分離結果如圖。以下敘

3、述不正確的是() 圖1酶切位點圖 圖2電泳結果示意圖A.圖1中兩種酶識別的核苷酸序列不同B.圖2中酶切產物可用于構建重組DNAC.泳道中是用Sal處理得到的酶切產物D.圖中被酶切的DNA片段是單鏈DNA第四頁，共一百二十八頁。答案D圖1中,兩種限制性核酸內切酶的酶切位點不同,說明兩種限制性核酸內切酶識別的核苷酸序列不同,A正確。圖2中,兩種酶的酶切產物都為DNA片段,都可用于構建重組DNA,B正確。結合圖1的酶切位點圖,判斷兩種酶切DNA后得到的DNA片段數;再結合泳道電泳結果知,泳道是用Sal處理得到的酶切產物,C正確。能被限制性核酸內切酶酶切的DNA片段仍為雙鏈DNA,D錯誤。知識拓展為什

4、么現代基因工程不使用同一種限制酶?為防止載體或目的基因發生自身環化,我們常用不同的限制酶分別處理目的基因和載體,使目的基因兩側及載體各自具有兩個不同的末端。素養解讀本題通過陌生情境的實驗探究的形式考查辨認、比較的理解能力。突出體現科學思維與科學探究。第五頁，共一百二十八頁。3.(2017北京理綜,5,6分)為了增加菊花花色類型,研究者從其他植物中克隆出花色基因C(圖1),擬將其與質粒(圖2)重組,再借助農桿菌導入菊花中。下列操作與實驗目的不符的是()A.用限制性核酸內切酶EcoR和連接酶構建重組質粒B.用含C基因的農桿菌侵染菊花愈傷組織,將C基因導入細胞C.在培養基中添加卡那霉素,篩選被轉化的

5、菊花細胞D.用分子雜交方法檢測C基因是否整合到菊花染色體上答案C本題主要考查基因工程的相關知識。由于C基因兩端及質粒上均存在限制酶EcoR的酶切位點,因此,可采用限制酶EcoR 和DNA連接酶構建重組質粒;用含C基因的農桿菌侵染菊花愈傷組織(即農桿菌轉化法),可以將C基因導入細胞;由于質粒上存在潮霉素抗性基因(標記基因),因此,可以在培養基中添加潮霉素,篩選被轉化的菊花細胞,C符合題意;可用分子雜交方法檢測C基因是否整合到菊花染色體上。第六頁，共一百二十八頁。4.(2015北京理綜,5,6分)在應用農桿菌侵染植物葉片獲得轉基因植株的常規實驗步驟中,不需要的是()A.用攜帶目的基因的農桿菌侵染植

6、物細胞B.用選擇培養基篩選導入目的基因的細胞C.用聚乙二醇誘導轉基因細胞的原生質體融合D.用適當比例的生長素和細胞分裂素誘導愈傷組織生芽答案C用農桿菌轉化法獲得的轉基因細胞需經植物組織培養獲得轉基因個體,不需要經過原生質體融合過程,C錯誤。第七頁，共一百二十八頁。B組統一命題、省(區、市)卷題組考點1基因工程的工具與操作程序1.(2019江蘇單科,16,2分)下列生物技術操作對遺傳物質的改造,不會遺傳給子代的是()A.將胰島素基因表達質粒轉入大腸桿菌,篩選獲得基因工程菌B.將花青素代謝基因導入植物體細胞,經組培獲得花色變異植株C.將腸乳糖酶基因導入奶牛受精卵,培育出產低乳糖牛乳的奶牛D.將腺苷

7、酸脫氨酶基因轉入淋巴細胞后回輸患者,進行基因治療答案D本題以基因工程為信息載體,考查考生運用所學知識,對某些生物學問題進行解釋、推理得出正確結論的能力;試題通過基因工程技術遺傳性分析,體現了對科學思維素養中的分析與判斷要素的考查。胰島素基因表達質粒導入大腸桿菌,獲得的工程菌可將胰島素基因遺傳給子代,A不符合題意;B、C培育的轉基因植物和轉基因動物的每個細胞均含有目有基因,后代可表現轉基因性狀,B、C不符合題意;將轉入目的基因的淋巴細胞回輸患者體內后,患者的生殖細胞不含目的基因,故子代不表現轉基因性狀,D符合題意。第八頁，共一百二十八頁。2.(2015廣東理綜,25,6分)如圖為培育轉基因山羊生

8、產人-酪蛋白的流程圖。下列敘述正確的是(雙選)()A.過程所用的人-酪蛋白基因可從人cDNA文庫中獲得B.過程可選用囊胚期或原腸胚期的胚胎進行移植C.過程可使用胚胎分割技術擴大轉基因山羊群體D.過程人-酪蛋白基因在細胞質內進行轉錄、翻譯答案AC胚胎移植一般選桑椹胚或囊胚期胚胎進行移植,不能選用原腸胚,B錯誤;基因的轉錄發生在細胞核內,D錯誤。第九頁，共一百二十八頁。3.(2015重慶理綜,6,6分)下列有關人胰島素基因表達載體的敘述,正確的是()A.表達載體中的胰島素基因可通過人肝細胞mRNA反轉錄獲得B.表達載體的復制和胰島素基因的表達均啟動于復制原(起)點C.借助抗生素抗性基因可將含胰島素

9、基因的受體細胞篩選出來D.啟動子和終止密碼子均在胰島素基因的轉錄中起作用答案C由于人肝細胞中胰島素基因不能表達,所以無法利用肝細胞mRNA反轉錄獲得胰島素基因,A項錯誤;表達載體的復制啟動于復制原點,胰島素基因的轉錄啟動于啟動子,B項錯誤;抗生素抗性基因是標記基因,作用是檢測受體細胞中是否含有目的基因,從而將含有胰島素基因的受體細胞篩選出來,C項正確;啟動子是RNA聚合酶識別和結合的部位,是轉錄的起點,而終止密碼子位于mRNA上 ,在翻譯中起作用,D項錯誤。第十頁，共一百二十八頁。4.(2019江蘇單科,33,8分)(8分)圖1是某基因工程中構建重組質粒的過程示意圖,載體質粒P0具有四環素抗性

10、基因(tetr)和氨芐青霉素抗性基因(ampr)。請回答下列問題: 圖1(1)EcoR 酶切位點為,EcoR 酶切出來的線性載體P1為末端。(2)用Taq DNA聚合酶進行PCR擴增獲得的目的基因片段,其兩端各自帶有一個腺嘌呤脫氧核苷酸。載體P1用酶處理,在兩端各添加了一個堿基為的脫氧核苷酸,形成P2;P2和目的基因片段在酶作用下,形成重組質粒P3。(3)為篩選出含有重組質粒P3的菌落,采用含有不同抗生素的平板進行篩選,得到A、B、C三類菌落,其生長情況如下表(“+”代表生長,“-”代表不生長)。根據表中結果判斷,應選擇的菌落是(填表中字母)類,另外兩類菌落質粒導入情況分別是、第十一頁，共一百

11、二十八頁。(4)為鑒定篩選出的菌落中是否含有正確插入目的基因的重組質粒,擬設計引物進行PCR鑒定。圖2所示為甲、乙、丙3條引物在正確重組質粒中的相應位置,PCR鑒定時應選擇的一對引物是。某學生嘗試用圖中另外一對引物從某一菌落的質粒中擴增出了400 bp片段,原因是。菌落類型平板類型ABC無抗生素+氨芐青霉素+-四環素+-氨芐青霉素+四環素+-圖2第十二頁，共一百二十八頁。答案(1)平(2)胸腺嘧啶(T)DNA連接(3)BA類菌落含有P0C類菌落未轉入質粒(4)乙丙目的基因反向連接解析本題借助基因工程相關知識,考查考生從表格、圖形等提取信息并運用這些信息解決相關問題的能力;通過構建重組質粒的過程

12、圖示和菌落生長情況分析等體現了科學思維素養中的演繹與推理要素。(1)EcoR從識別序列的中心軸線處切割,所以產生的末端為平末端。(2)由于載體和目的基因要連接成DNA分子,所以目的基因片段的兩端各自帶有一個腺嘌呤脫氧核苷酸時,載體P1的兩端應各添加一個胸腺嘧啶脫氧核苷酸。在DNA連接酶的作用下,可將P2和目的基因連接,形成重組質粒P3。(3)重組質粒P3上有完整的氨芐青霉素基因,所以含有重組質粒P3的菌落在無抗生素和添加氨芐青霉素的培養基上能生長,而在添加四環素的培養基上不能生長,所以應選擇的是B類菌落。A類菌落在添加氨芐青霉素、四環素、氨芐青霉素+四環素的培養基上均能生長,說明A類菌落導入了

13、P0。C類菌落在添加氨芐青霉素、四環素、氨芐青霉素+四環素的培養基上均不能生長,說明C類菌落未導入質粒。(4)選擇的一對引物組合、目的基因與重組質粒的連接方向及擴增片段長度的可能情況如表:第十三頁，共一百二十八頁。引物組合擴增片段(bp)連接方向甲乙乙丙甲丙正向0350450反向4000450由表可知,PCR鑒定時應選擇的一對引物是乙丙。若擴增出了400 bp片段,則原因是目的基因反向連接。知能拓展PCR過程中,目的基因擴增n次,共產生2n個DNA,其中1個DNA上含引物,1個DNA上含引物,2n-2個DNA既含引物,也含引物。該過程共需要2n-1個引物和2n-1個引物。第十四頁，共一百二十八

14、頁。5.(2018天津理綜,10,14分)甲型流感病毒為RNA病毒,易引起流感大規模流行。我國科學家在2017年發明了一種制備該病毒活疫苗的新方法,主要環節如下。(1)改造病毒的部分基因,使其失去在正常宿主細胞內的增殖能力。以病毒RNA為模板,逆轉錄成對應DNA后,利用技術擴增,并將其中某些基因(不包括表面抗原基因)內個別編碼氨基酸的序列替換成編碼終止密碼子的序列。與改造前的基因相比,改造后的基因表達時不能合成完整長度的,因此不能產生子代病毒。將該改造基因、表面抗原等其他基因分別構建重組質粒,并保存。(2)構建適合改造病毒增殖的轉基因宿主細胞。設計合成一種特殊tRNA的基因,其產物的反密碼子能

15、與(1)中的終止密碼子配對結合,并可攜帶一個非天然氨基酸(Uaa)。將該基因與連接后導入宿主細胞。提取宿主細胞的進行分子雜交鑒定,篩選獲得成功表達上述tRNA的轉基因宿主細胞。(3)利用轉基因宿主細胞制備疫苗。將(1)中的重組質粒導入(2)中的轉基因宿主細胞,并在補加的培養基中進行培養,則該宿主細胞能利用上述特殊tRNA,翻譯出改造病毒基因的完整蛋白,產生大量子代病毒,用于制備疫苗。第十五頁，共一百二十八頁。特殊tRNA基因轉錄時,識別其啟動子的酶是(單選)。A.病毒的DNA聚合酶B.宿主的DNA聚合酶C.病毒的RNA聚合酶D.宿主的RNA聚合酶(4)上述子代病毒不能在正常宿主細胞中增殖,沒有

16、致病性,因此不經滅活或減毒即可制成疫苗。與不具侵染性的流感病毒滅活疫苗相比,該病毒活疫苗的優勢之一是可引起免疫,增強免疫保護效果。答案(1)PCR多肽(或蛋白質)(2)載體總RNA(3)非天然氨基酸(Uaa)D(4)細胞第十六頁，共一百二十八頁。解析本題主要考查基因工程的相關知識。(1)利用PCR技術體外擴增DNA。若將基因中個別編碼氨基酸的序列替換為編碼終止密碼子的序列,則改造后的基因轉錄合成的mRNA中,終止密碼子提前出現,將不能控制合成完整長度的多肽(或蛋白質)。(2)目的基因只有與載體連接后才能導入宿主細胞。可提取宿主細胞的總RNA進行分子雜交鑒定,以篩選獲得成功表達題述tRNA的轉基

17、因宿主細胞。(3)由(2)知,轉基因宿主細胞含有的特殊tRNA基因轉錄的tR-NA,該tRNA的反密碼子可與終止密碼子配對,并可攜帶非天然氨基酸(Uaa),所以培養基中需補加非天然氨基酸(Uaa)。病毒中的基因進行轉錄時,識別其啟動子的酶是宿主的RNA聚合酶。(4)因該病毒疫苗具有侵染性,故可引起細胞免疫。疑難突破1.由(1)中“個別編碼氨基酸的序列替換成編碼終止密碼子的序列”可知,改造后的基因表達時不能合成完整長度的多肽。2.由(2)中特殊tRNA能與終止密碼子配對結合,并可攜帶一個非天然氨基酸(Uaa)可知,轉基因宿主細胞可利用非天然氨基酸Uaa,所以培養基中需加入非天然氨基酸Uaa。3.

18、滅活了的病毒已不具有侵染性,因此,只能引起體液免疫;而具侵染性的病毒可引起體液免疫和細胞免疫。第十七頁，共一百二十八頁。6.(2018課標全國,38,15分)回答下列問題:(1)博耶(H. Boyer)和科恩(S. Cohen)將非洲爪蟾核糖體蛋白基因與質粒重組后導入大腸桿菌細胞中進行了表達。該研究除證明了質粒可以作為載體外,還證明了 (答出兩點即可)。(2)體外重組的質粒可通過Ca2+參與的方法導入大腸桿菌細胞;而體外重組的噬菌體DNA通常需與組裝成完整噬菌體后,才能通過侵染的方法將重組的噬菌體DNA導入宿主細胞。在細菌、心肌細胞、葉肉細胞中,可作為重組噬菌體宿主細胞的是 。(3)真核生物基

19、因(目的基因)在大腸桿菌細胞內表達時,表達出的蛋白質可能會被降解。為防止蛋白質被降解,在實驗中應選用的大腸桿菌作為受體細胞,在蛋白質純化的過程中應添加的抑制劑。第十八頁，共一百二十八頁。答案(1)體外重組的質粒可以進入受體細胞;真核生物基因可在原核細胞中表達(2)轉化外殼蛋白(或答噬菌體蛋白)細菌(3)蛋白酶缺陷型蛋白酶解析本題主要考查基因工程的相關知識。(1)體外重組的質粒可以進入受體細胞,且重組質粒在不同細胞中能正常表達,說明目的基因在不同細胞中的表達機制相同,生物界共用一套遺傳密碼。(2)基因工程中,受體細胞為大腸桿菌細胞時,常用Ca2+處理大腸桿菌,使之處于感受態,即Ca2+參與的轉化

20、法。噬菌體DNA與外殼蛋白組裝成完整噬菌體。因噬菌體的宿主是細菌,故只有細菌可作為重組噬菌體的宿主細胞。(3)為防止目的基因表達的蛋白質被破壞,可選用不能合成蛋白酶的大腸桿菌作為受體細胞,在蛋白質純化過程中加入蛋白酶的抑制劑可以保護蛋白質不被水解。知識歸納目的基因導入受體細胞的方法(1)若受體細胞為植物細胞:基因槍法、花粉管通道法、農桿菌轉化法。(2)若受體細胞為動物細胞:顯微注射法。(3)若受體細胞為大腸桿菌:感受態細胞法(Ca2+參與的轉化法)。第十九頁，共一百二十八頁。7.(2017課標全國,38,15分)真核生物基因中通常有內含子,而原核生物基因中沒有,原核生物沒有真核生物所具有的切除

21、內含子對應的RNA序列的機制。已知在人體中基因A(有內含子)可以表達出某種特定蛋白(簡稱蛋白A)。回答下列問題:(1)某同學從人的基因組文庫中獲得了基因A,以大腸桿菌作為受體細胞卻未得到蛋白A,其原因是。(2)若用家蠶作為表達基因A的受體,在噬菌體和昆蟲病毒兩種載體中,不選用作為載體,其原因是。(3)若要高效地獲得蛋白A,可選用大腸桿菌作為受體。因為與家蠶相比,大腸桿菌具有(答出兩點即可)等優點。(4)若要檢測基因A是否翻譯出蛋白A,可用的檢測物質是(填“蛋白A的基因”或“蛋白A的抗體”)。(5)艾弗里等人的肺炎雙球菌轉化實驗為證明DNA是遺傳物質作出了重要貢獻,也可以說是基因工程的先導,如果

22、說他們的工作為基因工程理論的建立提供了啟示,那么,這一啟示是。第二十頁，共一百二十八頁。答案(1)基因A有內含子,在大腸桿菌中,其初始轉錄產物中與內含子對應的RNA序列不能被切除,無法表達出蛋白A(2)噬菌體噬菌體的宿主是細菌,而不是家蠶(3)繁殖快、容易培養(4)蛋白A的抗體(5)DNA可以從一種生物個體轉移到另一種生物個體第二十一頁，共一百二十八頁。解析本題主要涉及基因文庫與cDNA文庫的差異、基因工程的步驟、基因工程產物的檢測方法等知識,意在考查考生提取知識、分析和歸納知識的能力。 (1)真核生物和原核生物的基因結構不同,真核生物的基因中存在內含子等不能編碼蛋白質的序列,原核生物的基因中

23、不存在內含子。真核生物在基因表達時,轉錄出的RNA需要將內含子對應的RNA序列切除后才可進行翻譯。從人的基因組文庫中獲得的基因 A 中含有內含子,而作為原核生物的大腸桿菌不能切除內含子對應的RNA序列,故基因 A 在大腸桿菌中無法表達出蛋白A。 (2)病毒對宿主細胞的侵染具有特異性,噬菌體是專門侵染細菌的病毒,不能侵染家蠶細胞,故可選用可感染家蠶的昆蟲病毒作為載體。 (3)與真核生物相比,大腸桿菌等原核生物具有繁殖快、容易培養、遺傳物質相對較少等優點,因此在基因工程中常用原核生物作為受體細胞。(4)檢測基因A 是否翻譯出蛋白A,一般用抗原抗體雜交的方法,即用蛋白 A 的抗體與從細胞中提取的蛋白

24、質進行雜交,觀察是否出現雜交帶。(5)肺炎雙球菌轉化實驗的實質是 S型菌的 DNA 進入 R 型菌體內,并可在 R 型菌體內完成表達,這證明了 DNA 可以從一種生物個體轉移到另一種生物個體,為基因工程奠定了理論基礎。第二十二頁，共一百二十八頁。知識拓展真核生物基因中通常有內含子,原核生物的基因中不含有內含子,原核生物不能切除轉錄的RNA中內含子對應的RNA序列,故基因工程中不能將真核生物的基因直接導入原核生物,而常使用反轉錄的方法先獲得真核生物的cDNA(不含內含子),再進行下一步操作。第二十三頁，共一百二十八頁。8.(2016課標全國,40,15分)某一質粒載體如圖所示,外源DNA插入到A

25、mpr或Tetr中會導致相應的基因失活(Ampr表示氨芐青霉素抗性基因,Tetr表示四環素抗性基因)。有人將此質粒載體用BamH酶切后,與用BamH酶切獲得的目的基因混合,加入DNA連接酶進行連接反應,用得到的混合物直接轉化大腸桿菌。結果大腸桿菌有的未被轉化,有的被轉化。被轉化的大腸桿菌有三種,分別是含有環狀目的基因、含有質粒載體、含有插入了目的基因的重組質粒的大腸桿菌。回答下列問題:(1)質粒載體作為基因工程的工具,應具備的基本條件有(答出兩點即第二十四頁，共一百二十八頁。可),而作為基因表達載體,除滿足上述基本條件外,還需具有啟動子和終止子。(2)如果用含有氨芐青霉素的培養基進行篩選,在上

26、述四種大腸桿菌細胞中,未被轉化的和僅含環狀目的基因的細胞是不能區分的,其原因是;并且和的細胞也是不能區分的,其原因是。在上述篩選的基礎上,若要篩選含有插入了目的基因的重組質粒的大腸桿菌單菌落,還需使用含有的固體培養基。(3)基因工程中,某些噬菌體經改造后可以作為載體,其DNA復制所需的原料來自。答案(1)能自我復制、具有標記基因(2)二者均不含有氨芐青霉素抗性基因,在該培養基上均不生長含有質粒載體含有插入了目的基因的重組質粒(或答含有重組質粒)二者均含有氨芐青霉素抗性基因,在該培養基上均能生長四環素(3)受體細胞第二十五頁，共一百二十八頁。解析(1)質粒作為載體應具備的基本條件有:能自我復制、

27、具有標記基因、含有一至多個限制酶切割位點等。(2)由題意可知,未被轉化的和僅含環狀目的基因的細胞中均不含有氨芐青霉素抗性基因,所以在含有氨芐青霉素的培養基上均不能生長。質粒載體上含有氨芐青霉素抗性基因和四環素抗性基因,插入了目的基因的重組質粒中僅含有氨芐青霉素抗性基因,所以含有質粒載體和含有插入了目的基因的重組質粒的細胞均能在含有氨芐青霉素的培養基上生長,但前者可以在含有四環素的培養基上生長而后者不能,所以可用含有四環素的培養基,篩選出含有插入了目的基因的重組質粒的大腸桿菌單菌落。(3)噬菌體屬于病毒,病毒增殖過程中所需的原料、酶等均來自受體細胞。知識歸納標記基因要點總結:一般將一些抗性基因作

28、為標記基因;標記基因的主要作用是鑒定和篩選含有目的基因的受體細胞;標記基因表達產物對什么物質有抗性,在篩選培養時則在培養基中加入什么物質;標記基因若被插入了外源DNA片段,則該標記基因會被破壞,無法表達。第二十六頁，共一百二十八頁。9.(2016江蘇單科,33,9分)如表所示是幾種限制酶識別序列及其切割位點,圖1、圖2中標注了相關限制酶的酶切位點,其中切割位點相同的酶不重復標注。請回答下列問題: 圖1 圖2第二十七頁，共一百二十八頁。(1)用圖中質粒和目的基因構建重組質粒,應選用兩種限制酶切割,酶切后的載體和目的基因片段,通過酶作用后獲得重組質粒。為了擴增重組質粒,需將其轉入處于態的大腸桿菌。

29、(2)為了篩選出轉入了重組質粒的大腸桿菌,應在篩選平板培養基中添加,平板上長出的菌落,常用PCR鑒定,所用的引物組成為圖2中。(3)若BamH酶切的DNA末端與Bcl酶切的DNA末端連接,連接部位的6個堿基對序列為,對于該部位,這兩種酶(填“都能”“都不能”或“只有一種能”)切開。(4)若用Sau3A切圖1質粒最多可能獲得種大小不同的DNA片段。答案(1)Bcl和Hind連接感受(2)四環素引物甲和引物丙(3)TGATCCAC-TAGG都不能(4)7第二十八頁，共一百二十八頁。解析本題主要考查基因工程的相關知識。(1)分析4種限制酶識別的序列可知:BamH和Bcl識別序列中含有Sau3A的識別

30、序列,這三種酶切割DNA后可以產生相同的黏性末端。為保證質粒上含有標記基因,切割質粒時不能選用BamH和Sau3A,應選用Bcl和Hind兩種限制酶切割;酶切后的載體和目的基因片段,需用DNA連接酶連接形成重組質粒,為了擴增重組質粒,需將其轉入處于感受態的大腸桿菌中。(2)重組質粒中四環素抗性基因結構完整,氨芐青霉素抗性基因結構被破壞,在篩選平板培養基中添加四環素可以篩選出轉入了重組質粒的大腸桿菌。PCR擴增目的基因時,需用引物甲和引物丙兩種引物。(3)BamH酶切產生的黏性末端為,Bcl酶切產生的黏性末端為,經DNA連接酶連接后,連接部位的6個堿基對序列為,此序列不能被BamH和Bcl識別,

31、因此不能被兩種酶切開。(4)圖1質粒中含有Sau3A酶的3個識別序列,如圖:(A、B、C分別表示相鄰切點間的DNA片段)第二十九頁，共一百二十八頁。用Sau3A酶切,若在一個切點處切割可得到:B+C+A、C+A+B、A+B+C三種DNA片段(但其大小相同),若在兩個切點處切割可得到:A、B+C、A+C、B、A+B、C六種DNA片段(其大小均不同);若在三個切點處均切割,可得到A、B、C三種大小不同的DNA片段,綜上所述,用Sau3A酶切質粒最多可能獲得7種大小不同的DNA片段。疑難突破準確識別出BamH酶和Bcl酶識別序列中含有Sau3A酶的識別序列,是準確解第三十頁，共一百二十八頁。考點2P

32、CR技術及基因工程的應用1.(2019課標全國,38,15分)基因工程中可以通過PCR技術擴增目的基因。回答下列問題。(1)基因工程中所用的目的基因可以人工合成,也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。(2)生物體細胞內的DNA復制開始時,解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時,使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。(3)目前在PCR反應中使用Taq酶而不使用大腸桿菌DNA聚合酶的主要原因是。答案(1)基因組文庫cDNA文庫(2)解旋酶加熱至9095 氫鍵(3)Taq酶熱穩定性高,而大腸桿菌DNA聚合酶在高溫下會失活第

33、三十一頁，共一百二十八頁。解析本題借助基因工程的相關知識,考查考生對生物學問題進行解釋的能力;通過PCR與體內DNA復制的比較,體現了科學思維中分析與推斷要素。(1)基因文庫包括基因組文庫和cDNA文庫。(2)體內DNA復制時,需用解旋酶打開氫鍵使雙鏈DNA解旋,而PCR擴增目的基因時,是借助高溫加熱至9095 使DNA變性解旋。(3)PCR反應體系中進行互補鏈的合成時,溫度需控制在7075 ,則應使用耐高溫的DNA聚合酶,即Taq酶,而不能使用大腸桿菌DNA聚合酶(高溫下會失活)。易錯警示PCR過程與細胞內的DNA復制過程的主要區別(1)PCR過程需要的引物是人工合成的能與DNA母鏈的一段堿

34、基序列互補配對的一小段(單鏈)DNA或RNA;(2)PCR過程中DNA的解旋依靠溫度變化而非解旋酶。第三十二頁，共一百二十八頁。2.(2019天津理綜,9,12分)B基因存在于水稻基因組中,其僅在體細胞(2n)和精子中正常表達,但在卵細胞中不轉錄。為研究B基因表達對卵細胞的影響,設計了如下實驗。據圖回答:(1)B基因在水稻卵細胞中不轉錄,推測其可能的原因是卵細胞中(單選)。A.含B基因的染色體缺失B.DNA聚合酶失活C.B基因發生基因突變D.B基因的啟動子無法啟動轉錄第三十三頁，共一百二十八頁。(2)從水稻體細胞或中提取總RNA,構建文庫,進而獲得B基因編碼蛋白的序列。將該序列與Luc基因(表

35、達的熒光素酶能催化熒光素產生熒光)連接成融合基因(表達的蛋白質能保留兩種蛋白質各自的功能),然后構建重組表達載體。(3)在過程、轉化篩選時,過程中T-DNA整合到受體細胞染色體DNA上,過程在培養基中應加入卡那霉素。(4)獲得轉基因植株過程中,以下鑒定篩選方式正確的是(多選)。A.將隨機斷裂的B基因片段制備成探針進行DNA分子雜交B.以Luc基因為模板設計探針進行DNA分子雜交C.以B基因編碼蛋白的序列為模板設計探針與從卵細胞提取的mRNA雜交D.檢測加入熒光素的卵細胞中是否發出熒光(5)從轉基因植株未成熟種子中分離出胚,觀察到細胞內僅含一個染色體組,判定該胚是由未受精的卵細胞發育形成的,而一

36、般情況下水稻卵細胞在未受精時不進行發育,由此表明。第三十四頁，共一百二十八頁。答案(1)D(2)精子cDNA(3)(4)BCD(5)B基因表達能使卵細胞不經受精直接發育成胚解析本題借助基因工程相關知識,考查運用所學知識對某些生物學問題進行推理、解釋,并作出合理判斷或得出正確結論的能力;試題通過B基因表達對卵細胞的影響體現了科學思維素養中的演繹與推理要素。(1)B基因的啟動子無法啟動轉錄,會導致B基因在水稻卵細胞中不轉錄。(2)利用水稻體細胞或精子中提取的總RNA,經逆轉錄法構建的基因文庫為cDNA文庫。(3)過程需將基因表達載體導入農桿菌,所以可在培養基中加入卡那霉素以篩選成功導入了基因表達載

37、體的農桿菌。過程農桿菌感染水稻愈傷組織,農桿菌Ti質粒的T-DNA可整合到受體細胞染色體DNA上。(4)水稻細胞中本來就有B基因,正常植株也會出現雜交帶,故A錯誤;B、D選項是檢測Luc基因及其產物,B、D正確;C選項檢測對象是卵細胞中mRNA,正常水稻植株卵細胞中無B基因的mRNA,C正確。(5)一般情況下,水稻卵細胞在未受精時不能發育成胚,而轉基因植株未受精的卵細胞能發育成胚,說明B基因表達能使卵細胞不經受精直接發育成胚。第三十五頁，共一百二十八頁。3.(2019江蘇單科,29,8分)利用基因編輯技術將病毒外殼蛋白基因導入豬細胞中,然后通過核移植技術培育基因編輯豬,可用于生產基因工程疫苗。

38、下圖為基因編輯豬培育流程,請回答下列問題:(1)對1號豬使用處理,使其超數排卵,收集并選取處在時期的卵母細胞用于核移植。第三十六頁，共一百二十八頁。(2)采集2號豬的組織塊,用處理獲得分散的成纖維細胞,放置于37 的CO2培養箱中培養,其中CO2的作用是。(3)為獲得更多基因編輯豬,可在胚胎移植前對胚胎進行。產出的基因編輯豬的性染色體來自號豬。(4)為檢測病毒外殼蛋白基因是否被導入4號豬并正常表達,可采用的方法有(填序號)。DNA測序染色體倍性分析體細胞結構分析抗原抗體雜交答案(8分)(1)促性腺激素 減數第二次分裂中期(2)胰蛋白酶(膠原蛋白酶)維持培養液的pH(3)分割2(4)第三十七頁，

39、共一百二十八頁。解析本題通過基因工程、動物細胞工程和胚胎移植技術培育轉基因豬為信息載體,主要考查考生知識的綜合運用能力;通過對轉基因克隆豬培育過程的分析,體現了對科學探究中方案探討的考查。(1)1號豬提供卵母細胞,對其使用促性腺激素處理,可實現超數排卵。用于核移植的卵母細胞通常應發育至減數第二次分裂中期。(2)動物細胞培養前需用胰蛋白酶或膠原蛋白酶將動物組織分散成單個細胞,動物細胞培養時,培養箱中一定濃度的CO2用于維持培養液的pH。(3)采用胚胎分割技術,可獲得更多的基因編輯豬。因2號豬為基因提供者,故基因編輯豬的性染色體組成與2號豬相同。(4)可通過DNA測序技術檢測病毒外殼基因是否導入4

40、號豬;采用抗原抗體雜交技術,利用與該病毒外殼蛋白特異性結合的抗體,檢測病毒外殼基因是否在4號豬體內正常表達。方法技巧目的基因是否表達成功的檢測方法分子層次:直接檢測目的基因是否翻譯成蛋白質,方法是抗原抗體雜交法。個體層次:直接檢測相關性狀,如轉基因抗蟲植物直接接種相應害蟲后,觀察其是否抗蟲。第三十八頁，共一百二十八頁。4.(2018江蘇單科,32,8分)為生產具有特定性能的-淀粉酶,研究人員從某種海洋細菌中克隆了-淀粉酶基因(1 656個堿基對),利用基因工程大量制備-淀粉酶,實驗流程見圖。請回答下列問題:(1)利用PCR技術擴增-淀粉酶基因前,需先獲得細菌的。(2)為了便于擴增的DNA片段與

41、表達載體連接,需在引物的端加上限制性酶切位點,且常在兩條引物上設計加入不同的限制性酶切位點,主要目的是。(3)進行擴增時,反應的溫度和時間需根據具體情況進行設定,下列選項中的設定與引物第三十九頁，共一百二十八頁。有關,的設定與擴增片段的長度有關。(填序號)變性溫度退火溫度延伸溫度變性時間退火時間延伸時間(4)下圖表示篩選獲得的工程菌中編碼-淀粉酶的mRNA 的部分堿基序列:5-AUGCCAUCAACAAAUACUAACACUU-3圖中虛線框內mRNA片段包含個密碼子,如虛線框后的序列未知,預測虛線框后的第一個密碼子最多有種。(5)獲得工程菌表達的-淀粉酶后,為探究影響酶活性的因素,以濃度為1%

42、的可溶性淀粉為底物測定酶活性,結果如下:緩沖液50 mmol/L Na2HPO4 -KH2PO450 mmol/L Tris-HCl50 mmol/L Gly-NaOHpH6.06.57.07.57.58.08.59.09.09.510.010. 5酶相對活性%25.440.249.863.270.195.599.585.368.163.741.520.8第四十頁，共一百二十八頁。根據上述實驗結果,初步判斷該-淀粉酶活性最高的條件為。答案(1)基因組DNA(2)5使DNA片段能定向插入表達載體,減少自連(3)(4)813(5)pH為8.5,緩沖液為50 mmol/L Tirs-HCl第四十一頁

43、，共一百二十八頁。解析(1)由題干信息可知某種海洋細菌含有-淀粉酶基因,因此在擴增-淀粉酶基因前需先從細菌中提取細菌的基因組DNA。(2)由于引物的作用是引導子鏈的延伸,將脫氧核苷酸連接到引物上時,是與引物的3端相連的,由此確定需在引物的5端加上限制性酶切位點。常在兩條引物上加入不同的限制酶切位點的主要目的是使DNA片段能定向插入表達載體,防止自身相連。(3)進行PCR擴增時,退火的溫度與引物長短和堿基種類有關。延伸時間長短的設定與擴增片段的長度有關。(4)密碼子是指mRNA上決定一個氨基酸的三個相鄰的堿基,該mRNA上5端為AUG(起始密碼子),因此可依據三個堿基是一個密碼子來分析圖中虛線框

44、中的堿基,可得出共有8個密碼子。由于虛線框后的第一個密碼子的第一個堿基已經固定為U,因此還有2個堿基未知,共可能有的種數為44=16,又因為UAG、UGA、UAA為終止密碼子,因此決定氨基酸的密碼子最多有13種。(5)據表格數據可知:-淀粉酶在pH為8.5、緩沖液為50 mmol/L Tris-HCl的條件下相對活性為99.5%,初步判斷此條件下酶活性最高。第四十二頁，共一百二十八頁。5.(2017天津理綜,9,20分)玉米自交系(遺傳穩定的育種材料)B具有高產、抗病等優良性狀,但難以直接培育成轉基因植株,為使其獲得抗除草劑性狀,需依次進行步驟、實驗。.獲得抗除草劑轉基因玉米自交系A,技術路線

45、如下圖。(1)為防止酶切產物自身環化,構建表達載體需用2種限制酶,選擇的原則是(單選)。Ti質粒內,每種限制酶只有一個切割位點G基因編碼蛋白質的序列中,每種限制酶只有一個切割位點酶切后,G基因形成的兩個黏性末端序列不相同酶切后,Ti質粒形成的兩個黏性末端序列相同A.B.C.D.第四十三頁，共一百二十八頁。(2)如表所示是4種玉米自交系幼胚組織培養不同階段的結果。據表可知,細胞脫分化時使用的激素是,自交系的幼胚最適合培養成愈傷組織作為轉化受體。(3)農桿菌轉化愈傷組織時,T-DNA攜帶插入其內的片段轉移到受體細胞。篩選轉化的愈傷組織,需使用含的選擇培養基。(4)轉化過程中,愈傷組織表面常殘留農桿

46、菌,導致未轉化愈傷組織也可能在選擇培養基上生長。含有內含子的報告基因只能在真核生物中正確表達,其產物能催化無色物質K呈現藍色。用K分別處理以下愈傷組織,出現藍色的是(多選)。A.無農桿菌附著的未轉化愈傷組織激素結果自交系2,4-D(2.0 mg/L)6-BA(0.5 mg/L)IBA(2.0 mg/L)愈傷組織形成率(%)芽的分化率(%)根的誘導率(%)甲991390乙858087丙888312丁168583第四十四頁，共一百二十八頁。B.無農桿菌附著的轉化愈傷組織C.農桿菌附著的未轉化愈傷組織D.農桿菌附著的轉化愈傷組織(5)組織培養獲得的轉基因植株(核DNA中僅插入一個G基因)進行自交,在

47、子代含G基因的植株中,純合子占。繼續篩選,最終選育出抗除草劑純合自交系A。答案(1)A(2)2,4-D乙(3)除草劑(4)BD(5) 第四十五頁，共一百二十八頁。解析(1)利用雙酶切可有效防止出現限制酶切割后的產物(目的基因、載體)發生自身環化及目的基因與載體的任意連接現象。這要求每種限制酶在Ti質粒內只有一個切割位點,含目的基因的DNA片段被兩種限制酶切割形成的黏性末端堿基序列不同。(2)細胞脫分化形成愈傷組織。表格信息顯示,使用了2,4-D促使細胞脫分化。作為轉化受體的幼胚,不僅要易脫分化,而且還要易再分化生芽、生根,故乙的幼胚最適合培養成愈傷組織作為轉化受體。(3)構建的基因表達載體中有

48、抗生素抗性基因和除草劑抗性基因(除草劑抗性基因位于T-DNA片段上),因利用農桿菌轉化法轉基因時,只有T-DNA整合到植物細胞染色體DNA上,故需使用含除草劑的培養基篩選轉化的愈傷組織。(4)因“含有內含子的報告基因只能在真核生物中正確表達”,只有細胞內含有報告基因(成功轉化)的愈傷組織,用K處理后出現藍色,故選BD。(5)轉基因植株相當于攜帶G基因的雜合子,轉基因植株自交,后代有3/4植株攜帶G 基因,其中純合子占1/3。易錯警示轉基因植物培育過程中,篩選成功轉化的植物受體細胞的標準利用農桿菌轉化法完成植物細胞轉基因時,因只有Ti質粒的T-DNA整合到受體細胞的染色體DNA上,故篩選轉化的植

49、物受體細胞只能借助T-DNA片段上的特殊基因作為篩選標準,而Ti質粒上的非T-DNA片段未導入植物受體細胞,在對轉化后的受體細胞篩選時不能以此作為選擇標準。第四十六頁，共一百二十八頁。6.(2017江蘇單科,33,8分)金屬硫蛋白(MT)是一類廣泛存在的金屬結合蛋白,某研究小組計劃通過多聚酶鏈式反應(PCR)擴增獲得目的基因,構建轉基因工程菌,用于重金屬廢水的凈化處理。PCR擴增過程示意圖如下,請回答下列問題:(1)從高表達MT蛋白的生物組織中提取mRNA,通過獲得用于PCR擴增。(2)設計一對與MT基因兩端序列互補配對的引物(引物1和引物2),為方便構建重組質粒,在引物第四十七頁，共一百二十

50、八頁。中需要增加適當的位點。設計引物時需要避免引物之間形成,而造成引物自連。(3)圖中步驟1代表,步驟2代表退火,步驟3代表延伸,這三個步驟組成一輪循環。(4)PCR擴增時,退火溫度的設定是成敗的關鍵。退火溫度過高會破壞的堿基配對。退火溫度的設定與引物長度、堿基組成有關,長度相同但的引物需要設定更高的退火溫度。(5)如果PCR反應得不到任何擴增產物,則可以采取的改進措施有(填序號:升高退火溫度降低退火溫度重新設計引物)。答案(1)逆轉錄cDNA(2)限制性核酸內切酶堿基互補配對(3)變性(4)引物與模板GC含量高(5)第四十八頁，共一百二十八頁。解析本題主要考查目的基因的獲取及PCR技術的有關

51、知識。(1)依據題中表述現象分析,mRNA合成目的基因的過程應為逆轉錄過程,由mRNA直接逆轉錄形成的DNA為cDNA。(2)構建重組質粒時需要限制酶和DNA連接酶,因此推測在引物中需要增加適當的限制酶識別的位點。設計引物時需要注意避免引物1和引物2之間形成堿基互補配對。(3)圖中步驟1代表變性。(4)退火溫度過高會破壞引物與模板鏈之間的堿基互補配對。由于含G/C堿基對多的DNA穩定性強,因此在PCR過程中設置的溫度應視G/C的含量而定。(5)溫度過高不利于引物與模板結合;引物設計不合理也會影響PCR擴增反應。知識歸納關于引物的幾個問題:引物是一小段DNA或RNA,它能與DNA母鏈的一段堿基序

52、列互補配對,其長度通常為2030個核苷酸。由于PCR利用了DNA的熱變性原理,因此溫度的高低直接影響DNA變性、復性和延伸的過程,特別是復性的過程即題中的退火過程,它關乎引物是否能與模板鏈結合,只有二者結合后才有可能進行“延伸”。結合DNA的結構特點,A與T之間有2個氫鍵、C與G之間有3個氫鍵,可知引物中含堿基不同則耐溫程度不同,其中含C/G較多的引物,PCR擴增時溫度可適當提高。第四十九頁，共一百二十八頁。7.(2016天津理綜,7,12分)人血清白蛋白(HSA)具有重要的醫用價值,只能從人血漿中制備。如圖是以基因工程技術獲取重組HSA(rHSA)的兩條途徑。(1)為獲取HSA基因,首先需采

53、集人的血液,提取合成總cDNA,然后以cDNA為模板,使用PCR技術擴增HSA基因。下圖中箭頭表示一條引物結合模板的位置及擴增方向,請用箭頭在方框內標出另一條引物的位置及擴增方向。(2)啟動子通常具有物種及組織特異性,構建在水稻胚乳細胞內特異表達rHSA的載體,需要選擇的啟動子是(填寫字母,單選)。A.人血細胞啟動子B.水稻胚乳細胞啟動子C.大腸桿菌啟動子D.農桿菌啟動子第五十頁，共一百二十八頁。(3)利用農桿菌轉化水稻受體細胞的過程中,需添加酚類物質,其目的是。(4)人體合成的初始HSA多肽,需要經過膜系統加工形成正確空間結構才有活性。與途徑相比,選擇途徑獲取rHSA的優勢是。(5)為證明r

54、HSA具有醫用價值,須確認rHSA與的生物學功能一致。答案(1)總RNA(或mRNA)(2)B(3)吸引農桿菌移向水稻受體細胞,有利于目的基因成功轉化(4)水稻是真核生物,具有膜系統,能對初始rHSA多肽進行高效加工(5)HSA第五十一頁，共一百二十八頁。解析本題主要考查基因工程的相關知識。(1)總cDNA是以mRNA為模板逆轉錄合成的,所以需要提取人的總RNA或mRNA;PCR擴增的原理是DNA雙鏈復制,DNA雙鏈復制時,兩條子鏈的延伸方向相反,所以引物的位置及方向如答案所示。(2)要使rHSA基因在水稻胚乳細胞內特異性表達,需要選擇水稻胚乳細胞的啟動子。(3)酚類物質可吸引農桿菌移向水稻受

55、體細胞,使農桿菌Ti質粒上的T-DNA轉移到受體細胞并整合到受體細胞染色體的DNA上,有利于目的基因成功轉化。(4)大腸桿菌為原核生物,無內質網和高爾基體,不能對多肽進行高效加工,而水稻是真核生物,具有內質網和高爾基體,可對多肽鏈進行高效加工。(5)要證明rHSA具有醫用價值,須確認rHSA與HSA的生物學功能一致。易錯警示注意PCR技術的原理是DNA雙鏈復制,DNA雙鏈復制時,兩條母鏈分別作為模板,新合成的兩條子鏈延伸的方向相反,由此確定引物的位置及擴增方向。第五十二頁，共一百二十八頁。8.(2015課標全國,40,15分)已知生物體內有一種蛋白質(P),該蛋白質是一種轉運蛋白,由305個氨

56、基酸組成。如果將P分子中158位的絲氨酸變成亮氨酸,240位的谷氨酰胺變成苯丙氨酸,改變后的蛋白質(P1)不但保留P的功能,而且具有了酶的催化活性。回答下列問題:(1)從上述資料可知,若要改變蛋白質的功能,可以考慮對蛋白質的進行改造。(2)以P基因序列為基礎,獲得P1基因的途徑有修飾基因或合成基因。所獲得的基因表達時是遵循中心法則的,中心法則的全部內容包括 的復制;以及遺傳信息在不同分子之間的流動,即:。(3)蛋白質工程也被稱為第二代基因工程,其基本途徑是從預期蛋白質功能出發,通過和,進而確定相對應的脫氧核苷酸序列,據此獲得基因,再經表達、純化獲得蛋白質,之后還需要對蛋白質的生物進行鑒定。第五

57、十三頁，共一百二十八頁。答案(1)氨基酸序列(或結構)(1分,其他合理答案也給分)(2)PP1(每空2分,共4分)DNA和RNA(或遺傳物質)(2分)DNARNA、RNADNA、RNA蛋白質(或轉錄、逆轉錄、翻譯)(3分)(3)設計蛋白質的結構推測氨基酸序列(每空2分,共4分)功能(1分)解析(1)蛋白質的功能與結構相關,若要改變蛋白質的功能,需要對其結構進行改造。(2)確定目的基因的堿基序列后,可通過對現有基因進行改造或者重新合成來獲得目的基因。中心法則的內容包括遺傳信息的復制、轉錄、逆轉錄和翻譯。(3)蛋白質工程的基本途徑是從預期蛋白質功能出發,通過設計蛋白質的結構和推測氨基酸序列,進而確

58、定相對應的脫氧核苷酸序列。獲得蛋白質之后要對蛋白質的生物功能進行鑒定。第五十四頁，共一百二十八頁。C組教師專用題組1.(2013江蘇單科,22,3分)小鼠雜交瘤細胞表達的單克隆抗體用于人體試驗時易引起過敏反應,為了克服這個缺陷,可選擇性擴增抗體的可變區基因(目的基因)后再重組表達。下列相關敘述正確的是(多選)()A.設計擴增目的基因的引物時不必考慮表達載體的序列B.用PCR方法擴增目的基因時不必知道基因的全部序列C.PCR體系中一定要添加從受體細胞中提取的DNA聚合酶D.一定要根據目的基因編碼產物的特性選擇合適的受體細胞答案BD本題主要考查PCR技術的有關知識。利用PCR技術擴增目的基因的前提

59、是要有一段已知目的基因的核苷酸序列,以便根據這一序列設計引物,但不需知道目的基因的全部序列,需要考慮載體的序列;因PCR反應在高溫條件下進行,故反應體系中需加入耐高溫的DNA聚合酶;因某些目的基因編碼的產物需經特殊的加工修飾過程,故一定要根據目的基因編碼產物的特性選擇合適的受體細胞。第五十五頁，共一百二十八頁。2.(2014天津理綜,4,6分)為達到相應目的,必須通過分子檢測的是()A.攜帶鏈霉素抗性基因受體菌的篩選B.產生抗人白細胞介素-8抗體的雜交瘤細胞的篩選C.轉基因抗蟲棉植株抗蟲效果的鑒定D.21三體綜合征的診斷答案B根據受體菌是否對鏈霉素產生抗性進行攜帶鏈霉素抗性基因受體菌的篩選,不

60、需要分子檢測,A錯誤;用特定選擇培養基篩選出的雜交瘤細胞,還需要進行克隆化培養和抗體檢測,才能獲得足夠多的能分泌抗人白細胞介素-8抗體的雜交瘤細胞,B正確;轉基因抗蟲棉是否具有抗蟲特性,需要做抗蟲的接種實驗,C錯誤;21三體綜合征可通過用顯微鏡直接觀察體細胞中的21號染色體數目的方法進行檢測,D錯誤。第五十六頁，共一百二十八頁。3.(2014廣東理綜,25,6分)利用基因工程技術生產羧酸酯酶(CarE)制劑的流程如圖所示,下列敘述正確的是(雙選)()A.過程需使用逆轉錄酶B.過程需使用解旋酶和PCR獲取目的基因C.過程使用的感受態細胞可用NaCl溶液制備D.過程可利用DNA分子雜交鑒定目的基因