1、1第五章 藥物的雜質分析Chapter 5 Analysis of Impuries in Drugs藥物分析學 總論2基本要求掌握藥物雜質限量的定義與計算方法，掌握藥物雜質檢查的依據與方法。熟悉藥物雜質的來源與分類，熟悉氯化物、重金屬、砷鹽和溶劑殘留的檢查原理、方法和注意事項，熟悉雜質分析認證的項目。了解雜質鑒定的方法。3目 錄第一節 藥物中的雜質與雜質限量1第二節 藥物中雜質的檢查方法2第三節 降解物和雜質的分離與鑒定34一、藥物的雜質與純度第一節 藥物中的雜質與雜質限量 藥物的含量是否可用100%-雜質含量%表示？5理化常數含量測定雜質檢查外觀性狀藥物純度的綜合評定注意藥物純度與化學純度

2、的區別6 二、雜質的來源 7示例：安乃近的生產 原料藥生產中引入的雜質 可能引入的雜質為中間體MAA中存在少量的AA與甲醛、亞硫酸氫鈉縮合產生的4N去甲基安乃近，以及微量MAA、雙甲氨基安替比林甲烷(MAA-CH2-MAA)、甲醛亞硫酸氫鈉和亞硫酸氫鈉等。試劑、溶劑、還原劑等4-氨基氨替比林4-甲酰甲氨基氨替比林4-甲氨基氨替比林4-甲酰氨基氨替比林8示例 腎上腺素注射液 抗氧劑焦亞硫酸鈉 穩定劑EDTA-2Na腎上腺素磺酸 制劑生產中引入的雜質腎上腺素 亞硫酸根9 藥物貯藏中引入的雜質易發生氧化反應的結構：醚、醛、酚羥基、 巰基、亞硝基、 雙鍵等氧化反應：利血平氧化產物無降壓作用水解：鹽酸普

3、魯卡因水解產物對氨基苯甲酸及 二乙氨基乙醇 嚴格控制藥品的貯藏條件，是保證臨床用藥安全、有效的一個重要方面。 法莫替丁注射液， 恩拉霉素預混劑10利血平鹽酸普魯卡因11在藥物的純度研究中，必須重視異構體和多晶型對藥物有效性和安全性的影響，應控制藥物中低效、無效以及有毒的異構體和晶型。12三、雜質的種類與分類按來源分一般雜質在自然界中分布較廣泛，在多種藥物的生產和貯藏過程中容易引入的雜質。如酸、堿、水分、氯化物、硫酸鹽、重金屬、砷鹽等特殊雜質在個別藥物的生產和貯藏過程中引入的雜質。如阿司匹林中的游離水楊酸、甲硝唑中的2-甲基-5-硝基咪唑等。 工藝雜質葡萄糖注射液中的5-羥基糠醛13按毒性分信號

4、雜質本身一般無害，但其含量的多少可以反映出藥物的純度水平，稱其為“信號”雜質。如氯化物、硫酸鹽等屬于信號雜質。毒性雜質對人體有毒害的雜質。如重金屬、砷鹽、氰化物等應嚴格加以控制，以保證用藥安全。 14有機雜質殘留溶劑 無機雜質 按化學類別和特性分類合成中未反應完全的原料、中間體、副產物、降解產物等 生產中使用的有機溶劑 來源于生產過程，一般是已知的和確定的，直接影響藥物的穩定性，反映生產工藝情況 15四、雜質的限量定義藥物中所含雜質的最大允許量。計算百分之幾或百萬分之幾（ppm）表示 藥物中的雜質在不影響療效和不發生毒性的原則下允許有一定限量。通常不測定其準確含量，只檢查雜質的量是否超過限量，

5、所以稱為雜質的限量檢查。檢查方法：取一定量雜質對照品與一定量供試品在相同條件下處理后，比較結果，以確定雜質含量是否超過規定量。藥物中雜質的限量除考慮雜質本身的性質外，還要結合實際的生產水平，參考各國藥典的標準來制訂。16檢查方法限度檢查法定量測定對照法比較法靈敏度法 17 樣品管 標準管注意事項：平行操作原則。 對照法 18 在供試品溶液中加入一定量的試劑，在一定反應條件下不得有正反應出現，從而判斷供試品中所含雜質是否符合限量規定靈敏度法取一定量供試品依法檢查，測定特定待檢雜質的參數與規定的限量比較，不得更大。比較法 乳酸中草酸鹽檢查葡萄糖中亞硫酸鹽與可溶性淀粉檢查 腎上腺素中酮體的檢查取本品

6、，加鹽酸溶液（92000）制成每 1ml 中含 2.0mg 的溶液，照分光光度法在 310nm的波長處測定，吸收度不得過 0.05。 19示例1 茶苯海明中氯化物的檢查已知：求：L？解： 20示例2 谷氨酸鈉中重金屬的檢查已知：S1.0g C10g/ml L10106求：V？解： 21示例3 腎上腺素中酮體的檢查解：已知：=435A=0.05求：L？ 22計算中應注意單位一致稀釋體積 ppm的表示方法 23 第二節 藥物中雜質的檢查方法藥物中雜質檢查的原理24常用方法 化學方法 色譜方法 光譜方法 物理方法 一、化學法與試劑反應產生顏色與試劑反應產生沉淀與試劑反應產生氣體雜質鐵鹽檢查硫酸鹽檢查

7、碳酸鹽檢查25雜質與試劑反應特征雜質限量檢測方法 藥典應用示例產生顏色 產生沉淀產生氣體 目視比色，分光光度法比濁法 氣體檢查法顏色 鐵鹽、氟、硒氯化物、硫酸鹽、重金屬、鋇鹽砷、硫、碳酸鹽、氨、氰化物例4 芐氨噻嗪中芳香第一胺的檢查分子結構中無芳香第一胺基，不能發生重氮化-偶合反應，而芳香第一胺雜質可以發生反應而產生顏色，采用分光光度法檢查。芐氟噻嗪261mol/L鹽酸溶液4亞硝酸鈉溶液10氨基磺酸銨溶液2二鹽酸萘基乙二胺溶液步驟各試劑的作用？27（一）紫外吸收光譜法 在某一波長處雜質有最大吸收，藥物無吸收。二羥基蒽醌地蒽酚二、光譜方法依據藥物和雜質對光選擇吸收性質差異進行檢查。示例 地蒽酚中

8、二羥基蒽醌的檢查均有紫外吸收 28 432nm 地蒽酚 無吸收二羥基蒽醌 有最大吸收 規定0.01%地蒽酚氯仿溶液A432nm 結果判斷A晶型C晶型640cm-1 有強吸收 吸收很弱 662cm-1 吸收很弱 有強吸收 33（三）原子吸收分光光度法 通過測定藥物中所含待測元素原子蒸氣，吸收發自光源的該元素特定波長的程度，以求出藥物中待測元素的 含量。限量檢查對照品液：供試品對照品a供試品液bb(a-b) 不合格吸光度 34三、色譜法（chromatography） 藥物中的有機雜質的結構和性質往往和藥物相近，色譜法可以利用藥物與雜質在色譜性質的差異，能有效的將雜質與藥物進行分離和檢測。35樣品

9、對照品（一） TLC 法1. 雜質對照品法適用于已知雜質并能制備雜質對照品的情況。 36示例 枸櫞酸乙胺嗪中N-甲基哌嗪的檢查判斷結果供試品溶液如顯與對照品相應的雜質斑點，其顏色與對照溶液品溶液主斑點比較，不得更深。 供試品溶液：枸櫞酸乙胺嗪（50mg/ml）對照品溶液： N-甲基哌嗪對照品(50 g/ml)點樣 展開 晾干薄層板檢視斑點 372. 供試品溶液自身稀釋對照法適用于雜質的結構不能確定，或無雜質對照品的情況。限于雜質斑點的顏色與主成分斑點顏色相同或相近的情況下使用。樣品對照品結果判斷供試品溶液所顯雜質斑點與自身稀釋對照溶液或系列自身稀釋對照溶液所顯主斑點比較，不得更深。 38示例

10、吡羅昔康中有關物質的檢查供試品溶液：20mg/ml對照溶液：0.2mg/ml結果判斷：供試品溶液如顯雜質斑點，與對照溶液所 顯的主斑點比較，不得更深。 稀釋 393.雜質對照品法與供試品溶液自身稀釋對照 法并用 當藥物中存在多個雜質時，其中已知雜質有對照品時，采用雜質對照品法檢查；共存的未知雜質或沒有對照品的雜質，可采用供試品溶液自身稀釋對照法檢查。 樣品對照品對照40判斷：供試品溶液如顯雜質斑點不得多于2個，其中在與對照品溶液相同的位置上所顯雜質斑點的顏色與對照品溶液主斑點比較，不得更深，另一雜質雜質的顏色與對照溶液主斑點比較，不得更深。示例 鹽酸黃酮哌酯中有關物質的檢查 供試品溶液： 20

11、mg/ml對照溶液： 0.10 mg/ml對照品溶液：3-甲基黃酮-8-羧酸0.10 mg/ml稀釋 414. 對照藥物法 當無合適的雜質對照品，或者是供試品顯示的雜質斑點顏色與主成分斑點顏色有差異，難以判斷限量時，可用與供試品相同的藥物作為對照品，此對照藥物中所含待檢雜質需符合限量要求，且穩定性好。 很少采用42判斷結果：供試品溶液主斑點的位置與顏色應與對照品溶液的主斑點一致，如顯雜質斑點，其顏色不得深于對照品溶液對應的雜質斑點，并不得有對照品溶液以外的雜質斑點；供試品溶液除主斑點外，不得顯任何雜質斑點。示例 馬來酸麥角新堿中有關物質的檢查供試品溶液 ：5mg/ml供試品溶液 ：0.2mg/

12、ml對照品溶液：馬來酸麥角新堿對照品， 5mg/ml 43（二）HPLC 法1. 外標法測定法 44示例 卡托普利及其片劑中卡托普利二硫化物的檢查 供試品溶液： 0.5mg/ml對照品溶液：卡托普利二硫化物對照品，5 g/ml混合溶液： 卡托普利和卡托普利二硫化物對照品 0.1mg/ml和15 g/ml 適用性試驗：用混合溶液 R卡托普利和卡托普利二硫化物大于4.0 以峰面積計算其含量，原料藥中的二硫化物不得超過1.0%，片劑中的不得超過卡托普利標示量的3.0% 452. 加校正因子的主成分自身對照測定法消除雜質與主成分的響應可能不同所引起的測定誤差適用于已知雜質的控制。用雜質對照品測定f雜質

13、，f雜質和相對保留時間直接載入各品種質量標準中，在常規檢驗時用相對保留時間定位，以f雜質校正該雜質的實測峰面積。 藥物對照品的峰面積 雜質對照品的峰面積 46 方法調節檢測靈敏度：對照溶液 主成分色譜峰的峰高約為滿量程的1025供試品溶液的制備對照溶液的制備進樣：供試品溶液 對照溶液 分析時間：主成分色譜峰 保留時間的2倍判斷：供試品溶液中各雜質的峰面積分別乘以相應的 校正因子后，與對照溶液中主成分的峰面積比較。 稀釋 47示例 紅霉素A中紅霉素B、C組分及有關 物質的檢查供試品溶液：4mg/ml對照溶液：0.2mg/ml調節檢測靈敏度：對照溶液 主成分色譜峰的峰高約為滿量程 的20進樣：供試

14、品溶液 對照溶液 分析時間：主成分色譜峰保 留時間的4倍稀釋 48結果判斷：A紅霉素B校正 A紅霉素A對照液A紅霉素烯醇醚校正 0.6A紅霉素A對照液校正峰面積： f 紅霉素B 0.7 紅霉素烯醇醚 0.09 雜質1 0.15其他單個雜質峰面積的和不得大于對照溶液主峰面積 A紅霉素C校正 A紅霉素A對照液A雜質1校正 0.6A紅霉素A對照液493. 不加校正因子的主成分自身對照法適用于沒有雜質對照品的情況 對照溶液：供試品的稀釋液調節檢測靈敏度進樣：供試品溶液 對照溶液 分析時間：供試品溶液 主成分色譜峰保留時間的2倍 供試品溶液中各雜質的峰面積與對照溶液主成分的峰面積比較. 50自身對照液供

15、試品溶液A雜總=A1A2A3 51供試品溶液：1 mg/ml對照溶液： 5g/ml進樣：供試品溶液 對照溶液分析時間：供試品溶液主成分色譜峰保留時間的4倍判斷：單個雜質的峰面積不得大于對照溶液的主峰面積（0.5%），各雜質的峰面積的和不得大于對照溶液的主峰面積的4倍（2.0%）示例 甲氨蝶呤中有關物質的檢查稀釋 52適用于粗略測量供試品中雜質的含量。計算各雜質峰面積及其總和占總峰面積（含藥物的峰面積，而不含溶劑峰面積）的百分率。 該法一般不宜用于微量雜質的檢查。 4. 面積歸一化法53檢測器的選擇：應根據對雜質結構的分析進行有目的的選擇。對于在紫外光區吸收較弱或無吸收的雜質，可采用其他通用型檢

16、測器（如蒸發光散射檢測器、質譜檢測器等）。二極管陣列檢測器(diode array detector ，DAD)是雜質研究，特別是復方制劑中雜質研究的有效手段。通過該檢測器可獲得各雜質的光譜信息，有助于判斷雜質檢測波長選擇的合理性，并可進行峰純度檢查。注意以下問題54檢測波長的選擇：應選用對各雜質均有較強吸收的波長作為檢測波長，當一個測定波長無法兼顧所有雜質時，可選用不同波長分別測定。例如在氯喹那多（chlorquinaldol）及有關物質的HPLC分析中，用DAD檢測器選擇測定波長，氯喹那多在251 nm和360 nm處有最大吸收，有關物質的最大吸收分別在251, 253，254 nm處，為

17、了兼顧氯喹那多的含量測定，選擇測定波長在251 nm處。55(三) 氣相色譜法 主要用于藥物中揮發性雜質的檢查。方法 ：方法同HPLC標準溶液加入法 標準溶液加入法雜質對照品液+供試液外標法或內標法測定總量總量加入的雜質對照品的量雜質的量 56采用下列公式計算：x 供試品中組分X的濃度；Ax 供試品中組分X的色譜峰面積；x 加入的已知濃度的待測 組分對 照品的濃度；Ais 加入對照品后組分X的色譜峰面 積 L=Cx/C樣100% 57示例 異氟烷中的有關物質的檢查 供試品溶液：0.1%（v/v） 系統適用性試驗：理論板數按異氟烷峰計算不低于 15000異氟烷峰與相鄰雜質峰的分離度應符合要求。判

18、斷：各雜質峰面積的和不得大于總峰面積的0.5%。 進樣：供試品溶液58檢查方法與高效液相色譜法相同。（四）毛細管電泳法示例 鹽酸頭孢吡肟中N-甲基吡咯烷的檢查電泳條件：彈性石英毛細管（內徑75m，有效長度56 cm），柱溫25，操作緩沖溶液為pH4.7 咪唑-醋酸緩沖溶液，檢測波長214nm，操 作電壓30kV，壓力進樣。 59供試品溶液：20mg/ml ，內標物 0.1mg/ml 對照品溶液 ： N-甲基吡咯烷對照品， 0.1mg/ml 進樣：供試品溶液 對照品溶液按內標法以峰面積計算，不得過0.3%系統適用性試驗：遷移順序：乙胺和N-甲基吡咯烷， N-甲基吡咯烷峰與乙胺峰的分離度 應大于2

19、.0，進樣數次，RSD不得過 5.0%。60(一）熱重分析法(thermogravimetric analysis, TGA) 在程序升溫下，測量物質的質量與溫度的關系，研究物質在加熱同時失重的情況下，所發生的質的變化。應用：藥物穩定性的研究； 貴重和易氧化藥物的干燥失重測定； 藥物結晶水和吸附水的區別以及結晶水含量的 測定。 四、 熱分析法61TABCTiTfW1W2W反應區間= Tf Ti減失重量=W1-W2 方法：將樣品置熱天平中，按一定速度升溫，記錄 樣品重量隨溫度的變化，即熱重曲線。吸附水失去為漸進過程；結晶水失去在特定溫度發生突躍，可以區分。 624080： CuSO45H2OCu

20、SO43H2O+2H2O80120 ：CuSO43H2OCuSO4H2O+2H2O200250：CuSO4H2OCuSO4+H2O4080120200250（失重14.4） （失重28.8） （失重36） 63(二）差示熱分析(differential thermal analysis, DTA) 是在程序升溫下，測量被測物質和參比物之間的溫差與溫度關系的一種技術。參比物是一種惰性物質，在加熱過程中不發生相變和化學變化。因此溫差(T)只與被測物質的變化有關。T=0 被測物未發生吸熱或放熱反應；T= - 為吸熱峰(負峰) ；T = + 為放熱峰(正峰)。 64典型的差熱曲線TT+放熱峰吸熱峰峰寬

21、峰高外推起始點（與熔點相當） 65DTA在藥物分析中的應用測定藥物的熔點藥物的定性分析尖峰為物理變化寬峰為化學變化估測藥物的純度 66134226CaC2O4H2OCaC2O4+ H2O 398478CaC2O4CaCO3+CO 635838CaCO3CaO+CO2 示例：草酸鈣在加熱過程中的變化 67（三）差示掃描熱分析（differential scanning calorimetry, DSC ） 在程序升溫下，維持樣品和參比物的溫度相同，測量輸給待測物質和參比物的能量差與溫度(或時間)關系。DSC與DTA的區別：記錄方式不同，DSC記錄系統供給的能量；吸熱供給能量，放熱減少供給的能量。

22、DSC-TG常聯合用。 68(一)氯化物的檢查法1. 原理比較濁度Cl- Ag+AgCl（白色渾濁）稀硝酸2. 方法 標準氯化鈉溶液：以50ml中 含5080 g的Cl為宜 酸度以50ml供試溶液中含稀 硝酸10ml為宜 SRS：供試品溶液R：標準溶液 五、藥物中雜質檢查示例以藥物中的無機雜質和殘留溶劑的檢查為例進行討論。693. 干擾的排除（1）供試品有色采用內消色法，按ChP附錄規定的方法處理。供試品溶液供試品溶液AgNO3放置10min反復過濾澄清溶液AgNO3水標準NaCl溶液水對照溶液暗處放置5min后比濁 70二、硫酸鹽檢查法SO42- Ba2+BaSO4（白色渾濁）HCl1. 原

23、理比較濁度2. 方法 SO42- 0.1mg0.5mg/50ml, 即 相當于標準硫酸鉀溶液15ml 酸度 稀鹽酸2ml/50ml 3. 干擾的排除有色供試品采用內消色法排除干擾。SR 71三、鐵鹽檢查法1. 原理Fe3+6SCN-Fe(SCN)63-(紅色)標準鐵溶液: 以硫酸鐵銨配制。加入硫酸，防止鉄 鹽水解。50ml溶液中含Fe3為590 g 時，溶液的吸收度與濃度呈良好線性 關系。 2. 方法 HCl鹽酸酸性: 防止Fe 3的水解 723. 干擾的排除（1）當有Fe2+存在時，加氧化劑過硫酸銨將Fe2 氧化成Fe3用硝酸氧化時，需加熱（紅色）（2）當供試溶液管與標準溶液管色調不一致時，

24、或所呈硫氰酸鐵顏色較淺不便比較時, 可分別移入分液漏斗，各加正丁醇或異戊醇提取，分別取提取液比色。 73四、重金屬檢查法重金屬在規定實驗條件下能與硫代乙酰胺或硫化鈉作用顯色的金屬雜質，如銀、鉛、汞、銅、鎘、錫、銻、鉍等。在藥品生產過程中遇到鉛的機會較多，鉛在體內又易積蓄中毒，故檢查時以鉛為代表。ChP2010 收載三種檢查方法第一法 硫代乙酰胺法第二法 熾灼后的硫代乙酰胺法第三法 硫化鈉法 741. 原理CH3CSNH2+ H2OCH3CONH2 + H2SH2S + Pb2+pH3.5PbS+ 2H+ 適用于溶于水、稀酸和乙醇的藥物，是最常用的方法。 第一法 硫代乙酰胺法2. 方法 Pb2

25、10g 20g/25ml，相當于標準鉛溶液 1 2ml。酸度 pH3.03.5 75當丙管中顯出的顏色不淺于甲管時，乙管中顯出的顏色與甲管比較，不得更深。如丙管中顯出的顏色淺于甲管，應取樣按第二法重新檢查。SRS+R甲乙丙76（1）供試品有色：可采用外消色法消除干擾。標準溶液稀焦糖溶液標準溶液調色后的樣品溶液檢查3. 干擾的排除 77（2）供試品中有微量Fe3+H2SFe3+弱酸性S混濁，對比色有影響排除Fe3+Fe2+ Vc或鹽酸羥胺干擾 78 適用于含芳環、雜環以及難溶于水、稀酸及乙醇的有機藥物。第二法 熾灼后的硫代乙酰胺法 原理 重金屬可能會與芳環、雜環形成較牢固的價鍵， 需先將供試品熾

26、灼（ 500600 ）破壞，殘渣 加硝酸進一步破壞，蒸干。加鹽酸轉化為易溶 于水的氯化物，再按第一法進行檢查。 79 熾灼溫度應在500600。溫度過高，重金屬損失。加硝酸加熱處理后，必須蒸干，除盡氧化氮， 否則亞硝酸可氧化硫化氫析出硫，影響比色。 消除鹽酸或其他試劑中可能夾雜重金屬的影響。對于含鈉鹽或氟的有機藥物，應用鉑坩堝或硬質玻璃蒸發皿。2. 注意事項 80原理 在堿性條件下用硫化鈉作顯色劑。Pb 2 S2- PbS 第三法 硫化鈉法 適用于溶于堿性水溶液而難溶于稀酸或在稀酸中即生成沉淀的藥物。硫化鈉試液應臨用新制。 81五、砷鹽檢查法 砷鹽是劇毒物質，多由藥物生產過程中所使用的無機溶劑

27、引入。 ChP JP USP BP 古蔡氏法 Ag-DDC法 次磷酸法 各國藥典砷鹽檢查法比較 821. 原理As3+3Zn3H+3Zn2+AsH3AsO33-3Zn9H3Zn2+3H2OAsH3AsH33HgBr23HBrAs(HgBr)3(黃色)2As(HgBr)3AsH33AsH(HgBr)2(棕色)As(HgBr)3AsH33HBrAs2Hg3(黑色)AsO43-4Zn11H+4Zn2+4H2OAsH3五、砷鹽檢查法（一）古蔡(Gutzeit)氏法 832. 裝置與試劑作用（1）驗砷儀樣品 對照 84 KI-SnCl2試液AsO43-2I-2H+AsO33-I2H2OAsO43-Sn2

28、+2H+AsO33-Sn4+H2OI2Sn2+2I-Sn4+4I-Zn2+ZnI42-有利于H3As的形成 氯化亞錫在鋅粒表面形成Zn-Sn齊，起去極化的作用，有利于H2均勻連續發生。 85 Pb(Ac)2棉S2- + 2H+ H2S H2S + HgBr2 2HBr + HgSH2S + Pb(Ac)2 2HAc + PbS 鋅粒及供試品中可能含有少量硫化物，在酸性液中能產生硫化氫氣體，與溴化汞作用生成硫化汞的色斑，干擾試驗結果，故用醋酸鉛棉花吸收硫化氫。863. 干擾的排除供試品為S2-、SO32-、S2O32-S2-、SO32-、S2O32-H2SSO42-H+HNO3干擾砷斑檢查 除去

29、干擾 HgBr2試紙HgS, Hg（黑色）氧化例:解毒藥硫代硫酸鈉中 砷鹽的檢查 87 供試品為鐵鹽 （Fe3+）干擾：消耗KI、SnCl2，氧化AsH3排除：可以先加足量的KI或先加入酸性氯化亞錫試 液，將Fe3+還原為Fe2+。例：枸櫞酸鐵銨中砷鹽檢查 88含銻藥物 例如：葡萄糖酸銻鈉SbH3 + HgBr2 SbH2(HgBr) + HBr（灰色）改用白田道夫(Betterdorff)法。干擾：排除:白田道夫法 2As3+ 3SnCl2+ 6HCl2As+ 3SnCl4 + 6H (棕褐色的膠態砷 )與一定量標準砷溶液用同法處理后的顏色比較 干擾砷斑檢查 89 環狀藥物須進行有機破壞，方

30、法有： 堿破壞法 樣品加Ca(OH)2小火灼燒，再于500 600熾灼至完全灰化。 例：酚磺酞、呋塞米檢查中砷鹽檢查 堿融破壞法 適用于環狀結構的有機酸堿金屬鹽用 石灰法不能破壞完全的情況。以無水 Na2CO3無水碳酸鈉進行堿融破壞 例：苯甲酸鈉中砷鹽檢查 環狀藥物 90（二）二乙基二硫代氨基甲酸銀法 （Ag-DDC法）1. 原理 利用砷化氫與Ag-DDC吡啶溶液作用，使Ag-DDC中的銀還原為紅色膠態銀，以Ag-DDC溶液為空白，于510nm的波長處，測定吸收度，供試品溶液的吸收度不得大于標準砷溶液的吸收度。二乙基二硫代氨基甲酸銀結構：（紅色） 91試劑的作用：同古蔡法2. 裝置與試劑作用有

31、機堿：吡啶（USP法） 三乙胺-氯仿溶液（ChP法） 三乙醇胺、麻黃堿等 本反應可逆，加入有機堿使與HDDC結合，有利于反應向右定量進行完全。 92酸堿滴定法pH法指示劑法酸堿性的差異（六）酸堿度檢查法 931. 酸堿滴定法 例：己酸羥孕酮中正己酐、對甲苯磺酸的檢查要求：V5000，填充柱的N1000。（2）色譜圖中，待測物色譜峰與其相鄰色譜峰的分 離度(R)應大于1.5。（3）以內標法測定時，對照品溶液連續進樣5次，所 得待測物與內標物峰面積之比的RSD5%；以 外標法測定，所得待測物峰面積的RSD10%。（二）系統適用性試驗 99頂空條件的選擇 時間：一般平衡30min45min 溫度：根

32、據供試品中殘留溶劑的沸點選擇頂空平衡溫度，并低于溶解供試品所用溶劑的沸點10以下。對沸點較高的殘留溶劑，通常選擇較高的頂空平衡溫度；但應兼顧試品的熱分解特性。 100內標法外標法 限度檢查被測溶劑峰面積與內標峰面積之比不得大于對照品溶液的相應比值 被測溶劑峰面積不得大于對照品溶液的相應峰面積 （三）計算法 內標法外標法 定量測定 101第四節 降解物和雜質的分離與鑒定 最大日劑量 報告限度 鑒定限度 質控限度原料藥 2g 0.05% 0.10%或1.0mg 0.15%或1.0mg 2g 0.03% 0.05% 0.05%制劑 1g 0.1% 1g 0.05%1mg 1.0%或5g TDI1mg

33、-10mg 0.5%或20g TDI10mg-2 g 0.2%或2mg TDI 2g 0.10%10mg 1.0%或50g TDI10mg-100mg 0.5%或200g TDI100mg 0.2%或3mg TDI 2g 0.15%雜質和降解產物的報告、鑒定和質控限度102報告限度（Reporting Threshold）：超出此限度的雜質均應在檢測報告中報告，并應報告具體的檢測數據。 鑒定限度（Identification Threshold）：超出此限度的雜質均應進行定性分析，確定其化學結構。 質控限度（Qualification Threshold）：質量標準中一般允許的雜質限度，如制訂

34、的限度高于此限度，則應有充分的依據。103雜質結構鑒定方法步驟 1步驟 2步驟 3步驟 4依據藥物合成或降解反應機理，推斷最有可能產生的雜質LC-MS法初步測定其結構獲取雜質對照品確證雜質的結構1.雜質對照品法 104示例 加替沙星原料中相關雜質的結構鑒定 加替沙星的結構加替沙星與雜質分離的總離子流色譜圖。105 加替沙星中主要雜質的MS圖譜雜質的MS圖譜：/362.2 (+)+/384.0 （M+Na）+ /406. 1 (+2NaH)+，故確定該化合物的分子量為361,比加替沙星少14，推斷其分子結構較加替沙星少一個亞甲基,其紫外吸收光譜與主成分的UV圖相似。 106DMP DMO保留時間：6.645min 7.520min。DMP保留時間、紫外光譜圖及質譜圖分別與加替